检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2015年第11期32卷 2872-2874页

作者：张弛王义生李宁博王宸赵国强李月白郑州大学第一附属医院骨科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室 450052 郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的观察激素性股骨头坏死（ONFH）晚期患者坏死区骨组织中相关基因的表达.方法收集手术切除的20个股骨头,其中,10例晚期激素性ONFH作为实验组,10例头下型股骨颈骨折作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）分别测定两... 详细信息

目的观察激素性股骨头坏死（ONFH）晚期患者坏死区骨组织中相关基因的表达.方法收集手术切除的20个股骨头,其中,10例晚期激素性ONFH作为实验组,10例头下型股骨颈骨折作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）分别测定两组坏死骨组织中骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、过氧化物酶体增殖子活化受体γ（PPARγ）、护骨素（OPG）、成骨转录因子（Runx2）及核因子（NF）-κB受体活化因子配基（RANKL） mRNA的表达水平.结果实验组坏死骨组织中BMP-2、PPARγ、OPG、Runx-2及RANKL mRNA水平均较对照组明显下调,2-△△Ct分别为0.38±0.05、0.47 ±0.05、0.44±0.06、0.37 ±0.05、0.43 ±0.05,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论晚期激素性ONFH坏死区面积大,其内残存骨活性成分很少,其成骨与成脂基因表达均下调,股骨头已毁损而不可能再生,应施以全髋关节置换术.

关键词：股骨头坏死激素全髋关节置换术基因

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转化生长因子β1刺激改良培养小鼠原代肝星状细胞的活化

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中国组织工程研究 2015年第51期19卷 8234-8240页

作者：毕晓娟张传山李亮吕国栋林仁勇新疆医科大学第一附属医院/临床医学研究院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830011 新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830011

背景:肝星状细胞是肝内分泌细胞外基质的关键细胞类型,因此在肝纤维化研究中很重要。目的:实验改良了肝星状细胞原代培养方法,获得充足的细胞量,用转化生长因子β1刺激活化,研究致纤维化的相关因子表达情况。方法:氯胺酮麻醉小鼠后采用... 详细信息

背景:肝星状细胞是肝内分泌细胞外基质的关键细胞类型,因此在肝纤维化研究中很重要。目的:实验改良了肝星状细胞原代培养方法,获得充足的细胞量,用转化生长因子β1刺激活化,研究致纤维化的相关因子表达情况。方法:氯胺酮麻醉小鼠后采用门静脉穿刺原位灌注肝脏的方法分离肝脏,采用密度梯度离心获得肝星状细胞,利用形态学、免疫荧光染色等方法对原代肝星状细胞进行鉴定;将培养24 h肝星状细胞用质量浓度10μg/L转化生长因子β1刺激48 h,同时设PBS组进行对比。结果与结论:通过原位灌注肝脏并且酶消化的方法可以成功获得小鼠原代肝星状细胞,并且锥虫蓝染色活率为(97.2±0.8)%,免疫荧光染色纯度为(90.4±1.2)%,细胞计数总量约2.5×106/只。实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与PBS组比较,转化生长因子β1刺激组的肝星状细胞平滑肌肌动蛋白α、Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β受体1、转化生长因子β受体2 mR NA表达水平明显升高(P<0.05)。结果证实,实验采用的改良的培养方法可更高效高质量的获得原代肝星状细胞,转化生长因子β1刺激可导致肝星状细胞活化,分泌致纤维化因子。

关键词：组织工程肝细胞转化生长因子β1 组织构建肝星状细胞肝纤维化原代培养分离鉴定胶原蛋白平滑肌肌动蛋白α 国家自然科学基金

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三维培养诱导人脂肪间充质干细胞微球的成软骨分化能力

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中国组织工程研究 2015年第1期19卷 24-29页

作者：毕晓娟郭晨明李亮段显琳江明新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院干细胞研究室、新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆医科大学第一附属医院乳腺外科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆医科大学第一附属医院血液病中心、新疆维吾尔自治区血液病研究所新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054

背景:关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。目的:采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。方法:无菌切取吸脂术后脂肪... 详细信息

背景:关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。目的:采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。方法:无菌切取吸脂术后脂肪组织,分离培养人脂肪间充质干细胞,传至第3代进行流式细胞术分析,成骨成脂肪诱导等鉴定,同时也给予合适的培养条件用三维培养的方式向软骨细胞诱导,并行阿利辛蓝染色鉴定糖胺多糖的合成,苏木精-伊红染色进行组织学分析,免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达,称质量测量软骨硬度。结果与结论:分离的人脂肪间充质干细胞CD105,CD44,CD29均高表达,而CD45,CD34低表达,并且成骨成脂诱导后细胞茜素红染色和油红O染色均为阳性。三维培养法诱导的软骨细胞可表达大量糖胺多糖及Ⅱ型胶原。结果证实,三维培养法诱导人脂肪间充质细胞向软骨分化后,具有软骨细胞的特性。

关键词：组织工程干细胞间质干细胞软骨脂肪干细胞三维培养体系软骨微球诱导分化间充质干细胞脂肪源间充质干细胞人脂肪间充质干细胞无支架微球培养条件优化软骨诱导

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晚期乙醇性股骨头坏死骨组织中相关基因的表达

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中华实验外科杂志 2014年第8期31卷 1784-1786页

作者：李明王义生王宸李宁博赵国强李月白郑州大学第一附属医院骨科河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室 450052 郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室

目的观察晚期乙醇性股骨头坏死（ONFH）坏死区骨组织细胞中相关基因的表达.方法收集在全髋关节置换术中切除的20个股骨头,其中,10例世界骨循环研究学会（ARCO）分期Ⅲ-C、Ⅳ期乙醇性ONFH,作为实验组;10例GardenⅢ、Ⅳ型新鲜股骨颈骨... 详细信息

目的观察晚期乙醇性股骨头坏死（ONFH）坏死区骨组织细胞中相关基因的表达.方法收集在全髋关节置换术中切除的20个股骨头,其中,10例世界骨循环研究学会（ARCO）分期Ⅲ-C、Ⅳ期乙醇性ONFH,作为实验组;10例GardenⅢ、Ⅳ型新鲜股骨颈骨折的股骨头,作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）分别测定两组坏死骨组织细胞中骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、成骨转录因子-2（Runx-2）、过氧化物酶体增殖子活化受体-γ（PPAR-y）、护骨素（OPG）、破骨细胞分化因子（RANKL） mRNA的表达.结果实验组细胞中BMP-2、Runx-2、PPAR-γ、OPG、RANKL mRNA表达水平均较对照组明显降低,2-△△Ct值分别为0.51 ±0.04、0.46 ±0.09、0.59±0.07、0.31 ±0.04、0.52±0.06,两组间差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论晚期（ARCOⅢ-C、Ⅳ期）乙醇性ONFH的骨组织坏死区很大,股骨头内残存的骨活性成分和细胞很少,其成骨与成脂基因表达均降低,股骨头已毁损,适于行人工髋关节置换术.

关键词：乙醇股骨头坏死晚期基因降低

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沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ表达降钙素基因相关肽基因重组载体的构建与鉴定

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中华实验外科杂志 2014年第1期31卷 142-145页

作者：王义生李宁博李劲峰施佳辰孙俊魁李月白赵国强郑州大学第一附属医院骨科郑州大学骨科研究所河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室 450052 郑州大学基础医学院郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室微生物免疫教研室

目的构建与鉴定沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ（PPARγ）同时表达降钙素基因相关肽（CGRP）基因重组载体.方法选用pGFP-V-RS载体,将PPARγ小干扰RNA（siRNA）寡核苷酸靶序列连接入pGFP-V-RS载体,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体... 详细信息

目的构建与鉴定沉默过氧化物酶体增殖子活化受体γ（PPARγ）同时表达降钙素基因相关肽（CGRP）基因重组载体.方法选用pGFP-V-RS载体,将PPARγ小干扰RNA（siRNA）寡核苷酸靶序列连接入pGFP-V-RS载体,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ;将CGRP片段与Mlu Ⅰ酶切,并与末端羟基化的线性质粒pGFP-V-RS重组连接,得到重组载体pGFP-V-RS-exCGRP.将获取的CGRP基因片段连接入线性化重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ,酶切鉴定及测序正确后得到重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP.收集第3代HEK-293细胞,将细胞分为4组：CON组：转染空载体pGFP-V-RS质粒,作为对照；SI组：转染重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ质粒；EX组：转染重组pGFP-V-RS-exCGRP质粒；DOU组：转染重组双基因载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP质粒.每组电极杯中加入5x106个细胞,并分别加入上述质粒2.5μl,给予直流电低压脉冲1次,时间15 ms.培养48 h后收集各组细胞,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）与Western blot检测细胞内PPAR、CGRP mRNA及蛋白的表达.结果重组双基因载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP经酶切鉴定及测序结果与设计完全一致.电转染HEK-293细胞后,DOU组细胞PPARγ基因呈低表达,PPARγmRNA与其蛋白的相对表达量为0.036±0.003、0.108 ±0.031,与EX组（0.156±0.014、0.778±0.103）及CON组（0.148±0.014、0.742 ±0.143）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,与SI组（0.054±0.005、0.135 ±0.039）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.DOU组细胞CGRP基因呈高表达,CGRP mRNA与其蛋白的相对表达量为1.144±0.106、1.244±0.184,与SI组（0.320±0.030、0.370±0.089）及CON组（0.444 ±0.041、0.274±0.062）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,与EX组（1.021 ±0.095、1.221±0.181）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论成功构建出沉默PPARγ基因并表达CGRP基因的重组载体pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP,能够有效阻断PPARγ基因表达,同时促进CGRP基因表达.

关键词： RNA干扰过氧化物酶体增殖子活化受体-γ 降钙素基因相关肽重组载体

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细粒棘球蚴TGF-βⅡ型受体不同结构域酵母双杂交载体的构建和自激活鉴定

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中国病原生物学杂志 2014年第5期9卷 434-437,F0003页

作者：李亮张传山杨乐王丽敏吕国栋王俊华林仁勇新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆乌鲁木齐830011

目的构建细粒棘球蚴转化生长因子pII型受体全长（EgTβRⅡ）、受体结合域（EgTβRⅡ-A）和激酶域（EgTβRⅡ-K）的酵母双杂交真核表达载体，检测重组融合蛋白对酵母Y2HOold菌株的毒性作用和自激活活性。方法采用Trizol法提取细粒棘球绦... 详细信息

目的构建细粒棘球蚴转化生长因子pII型受体全长（EgTβRⅡ）、受体结合域（EgTβRⅡ-A）和激酶域（EgTβRⅡ-K）的酵母双杂交真核表达载体，检测重组融合蛋白对酵母Y2HOold菌株的毒性作用和自激活活性。方法采用Trizol法提取细粒棘球绦虫总RNA，反转录合成cDNA；PCR扩增EgTβRⅡ—A、EgTβRⅡ—K和EgTβIRⅡ基因，分别克隆入pGADT7、pGBKT7载体中，经PCR、限制性内切酶鉴定及序列测定正确后，采用PEG／I。iAc法转入酵母菌，检测重组融合蛋白对酵母菌毒性和自激活活性。结果构建EgTβRⅡ-A、EgTβR1／-K和EgTβRU的pGADT7、pGBKT7重组质粒，经双酶切和1％琼脂糖凝胶电泳鉴定，得到长度为406bp、1023bp和1824bp的目的基因片段，与预期结果一致；重组质粒转化酵母菌后形成的菌落与对照质粒pGBKT7转化菌的菌落生长状况一致，直径1．5～2．0mm，而在SD／-Leu／X／AbA、SD／-Trp／X／AbA平板上无菌落生长。结论成功构建EgTβRⅡ-A、EgTCtRⅡ-K和EgTCtRⅡ基因的pGADT7、pGBKT7真核表达载体，其表达蛋白对酵母菌Y2HGold无毒性作用和自激活活性，重组质粒载体可用于酵母双杂交系统，为鉴定EgTL3RII在TGF-β／Smad通路中的生物学功能奠定了理论基础。

关键词：细粒棘球蚴转化生长因子βⅡ型受体酵母双杂交

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药物干预小鼠凝血功能对肿瘤形成的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2013年第4期34卷 395-400页

作者：王睿徐珊珊余忠伟吴彬彬刘誉暨南大学医学院临床医学系广东广州510632 暨南大学医学院生物化学教研室广东广州510632

目的:以药物干预接种肿瘤小鼠凝血功能,研究早期肿瘤形成与凝血系统功能的关系。方法:成年健康KM小鼠皮下接种S180肿瘤细胞,分正常组、肿瘤对照组、肝素组、抗癌药组、溶剂组。接种瘤细胞后第5天开始药物干预,分别为:不处理、皮下注射... 详细信息

目的:以药物干预接种肿瘤小鼠凝血功能,研究早期肿瘤形成与凝血系统功能的关系。方法:成年健康KM小鼠皮下接种S180肿瘤细胞,分正常组、肿瘤对照组、肝素组、抗癌药组、溶剂组。接种瘤细胞后第5天开始药物干预,分别为:不处理、皮下注射生理盐水(2 d 1次)、皮下注射低分子量肝素(2 d 1次)、抗癌药灌胃(每d 1次)、溶剂灌胃(每d 1次)。在接种后第3周末测量肿瘤大小、凝血酶原时间、血浆抗凝血酶Ⅲ和血清TNF-α水平,再处死小鼠,剥离实体肿瘤。统计学分析肿瘤大小与各检测参数之间的相关性。结果:肿瘤对照组和溶剂组分别在接种瘤细胞后第6和第10天有1小鼠死亡,肿瘤大小测量结果显示,对照组和溶剂组的瘤体显著较大,平均为(5.0±2.5)cm^2,肝素组的外观比前两者略小,平均为(3.2±1.8)cm^2,但与前两者无统计学上差异。抗癌药组瘤体显著较小,平均(1.8±0.82)cm^2,与对照组有显著差异(P<0.01)。统计学分析结果显示,肿瘤大小与凝血酶原时间和抗凝血酶Ⅲ水平成负相关(P<0.05),但与血清TNF-α的水平成正相关(P<0.05)。结论:单纯肝素干预治疗肿瘤小鼠无显著减小肿瘤大小作用,但与对照组相比瘤体有缩小的趋向,抗凝药物治疗可能对肿瘤的发生和发展具有抑制作用。

关键词：小鼠肿瘤凝血酶原时间肝素

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去氢骆驼蓬碱诱导HepG2细胞凋亡并增强其对5-氟尿嘧啶和顺铂的敏感性

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中国病理生理杂志 2013年第2期29卷 284-289页

作者：李强曹明溶刘志龙蒋建伟暨南大学附属第一医院普通外科广东广州510632 暨南大学医学院生物化学教研室广东广州510632

目的:研究去氢骆驼蓬碱体外诱导HepG2细胞凋亡过程中c-Jun N末端激酶(JNK)途径的作用,并观察其联合化疗药物对HepG2细胞的影响。方法:CCK-8法检测联合或不联合使用JNK特异性抑制剂SP600125对细胞增殖的抑制作用;克隆形成实验观察不同浓... 详细信息

目的:研究去氢骆驼蓬碱体外诱导HepG2细胞凋亡过程中c-Jun N末端激酶(JNK)途径的作用,并观察其联合化疗药物对HepG2细胞的影响。方法:CCK-8法检测联合或不联合使用JNK特异性抑制剂SP600125对细胞增殖的抑制作用;克隆形成实验观察不同浓度药物对细胞克隆形成的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞形态变化;PI单染检测细胞亚二倍体率;Annexin V-PI双染测定细胞早期凋亡水平;Western blotting检测细胞聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)、JNK和p-JNK蛋白表达的改变;联合5-氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂(DDP)观察细胞对化疗药物的敏感性。结果:去氢骆驼蓬碱随药物浓度的升高而抑制作用增强,48 h后IC50为9.80 mg/L;去氢骆驼蓬碱能显著抑制细胞克隆形成,并且导致细胞凋亡形态学变化;PI单染检测发现细胞周期的G1期前有亚二倍体凋亡峰,Annexin V-PI双染检测细胞出现明显的早期凋亡细胞群;Western blotting检测到随着去氢骆驼蓬碱浓度增加PARP及p-JNK蛋白表达增加,JNK蛋白表达减少;联合使用SP600125对细胞增殖的抑制作用减弱;联合5-FU或顺铂明显增强化疗药物对肿瘤细胞的抑制作用,增敏倍数分别为1.47和5.78倍。结论:去氢骆驼蓬碱对HepG2细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡,激活JNK信号通路可能是其主要机制之一;同时去氢骆驼蓬碱可以增强HepG2细胞对5-FU和顺铂的敏感性。

关键词：去氢骆驼蓬碱 HepG2细胞 c—Jun N末端激酶细胞凋亡

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PRPS2基因shRNA质粒的构建与表达

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山西医科大学学报 2014年第8期45卷 678-682,783页

作者：吴彬游锦梅李钰 Yang Yong 陈显久太原钢铁(集团)有限公司总医院中心实验室太原030003 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室山西医科大学第一临床医学院骨科 Department of Epidemiology Medical BoardSingapore General Hospital

目的构建磷酸核糖焦磷酸合成酶2(phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 2,PRPS2)基因shRNA质粒,为探讨PRPS2基因功能奠定基础。方法设计并合成PRPS2基因shRNA,将其分别与真核表达载体GV102重组为shRNA质粒,分别命名为GV102-PRPS2-1、GV102-PRPS2-2、GV102-PRPS2-3,分别转染这三种载体的细胞设为实验组1、2、3;阴性对照载体命名为GV102-PRPS2-0,转染该载体设为阴性对照组;分别测序鉴定。常规转染人结肠癌HCT116细胞后采用RT-PCR、Western blot检测细胞PRPS2基因的表达水平,筛选干扰效果最佳shRNA载体。结果设计并合成的PRPS2干扰载体,经测序鉴定序列正确。转染HCT116细胞后在72 h内发绿色荧光的细胞数量随时间的增加而增强,转染效率均介于40%-50%。RT-PCR和Western blot结果显示,转染shRNA质粒的3个实验组PRPS2表达均较阴性对照组显著下降(P<0.05),其中GV102-PRPS2-3使细胞中PRPS2的mRNA(0.27±0.05)水平下降73%、蛋白(0.30±0.04)水平下降70%,干扰效果优于GV102-PRPS2-1(mRNA:0.61±0.03,蛋白:0.37±0.06)和GV102-PRPS2-2(mRNA:0.89±0.02,蛋白:0.84±0.05)。结论本研究利用RNAi技术下调了人结肠癌HCT116细胞中PRPS2基因的表达,为深入探讨PRPS2表达下调后对细胞行为的影响奠定了研究基础。

关键词：磷酸核糖焦磷酸合成酶2/PRPS2 RNA干扰 HCT116细胞基因重组

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白血病血细胞中葡萄糖转运体SLC2A的表达及意义

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西部医学 2014年第4期26卷 425-427,434页

作者：胡琳高秀峰刘伟平王璐四川大学基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室四川成都610041 自贡市第一人民医院检验科四川自贡643000 四川大学临床医学院四川成都610207

目的探讨葡萄糖转运体SLC2 A1～9在K562细胞、正常人与白血病患者血细胞中的表达差异,分析其在白血病发生发展中的作用.方法通过培养收集人慢性髓原白血病细胞（K562细胞）、正常人和白血病患者血细胞,采用反转录PCR和电泳技术检测SLC... 详细信息

目的探讨葡萄糖转运体SLC2 A1～9在K562细胞、正常人与白血病患者血细胞中的表达差异,分析其在白血病发生发展中的作用.方法通过培养收集人慢性髓原白血病细胞（K562细胞）、正常人和白血病患者血细胞,采用反转录PCR和电泳技术检测SLC2A1～9 mRNA的表达量.结果 K562细胞可见SLC2A1、3、4、6、8、9 mRNA表达,正常人血细胞可见SLC2A3、6、8 mRNA表达,白血病患者血细胞可见SLC2A3、6、8、9 mRNA表达;白血病患者组SLC2A6、9 mRNA的表达水平均明显高于正常人组（P＜0.05）,而SLC2A3 mRNA的表达水平则明显低于正常人组（P＜0.01）,SLC2A8 mRNA的表达则两组间无显著差异（P＞0.05）.结论 SLC2A6、9在白血病中高表达,可能成为白血病基因诊断的分子标志物和抗癌治疗新靶点.

关键词：白血病葡萄糖转运体糖代谢人慢性髓原白血病细胞(K562细胞)

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