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中华实验眼科杂志 2012年第11期30卷 976-981页

作者：招志毅陈建苏钟敬祥谭美华李善义戴应暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究所再生医学教育部重点实验室广州510632

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs... 详细信息

背景诱导多能干细胞（iPSCs）具有类似胚胎干细胞的分化能力，可以分化为全身各种类型的体细胞，同时不会引起伦理学问题和免疫排斥反应，因此iPSCs有可能作为组织工程角膜内皮重建的种子细胞。目的利用原子力显微镜（AFM）观察人iPSCs与兔角膜内皮细胞（CECs）混合共培养后分化iPSCs的形态学变化，并找出其细胞膜超微结构变化的规律。方法分别培养兔CECs和人MMC-iPSCs细胞系，用免疫组织化学法测定iPSCs细胞的标志物以鉴定iPSCs细胞。将传代后7d的iPSCs与60％融合的CECs在内皮细胞培养基中共培养建立混合共培养模型，利用AFM结合倒置显微镜观察CECs及共培养前后iPSCs的形貌和超微结构变化。结果CECs的长度和宽度分别为（66．93±10．48）μm和（44．85±8．14）μm，共培养前未分化的谮SCs的长度和宽度分别为（12．51±1．40）μm和（10．93±1．69）μm，共培养后分化的iPSCs长度和宽度分别为（36．12±10．29）μm和（31．53±9．65）μm。分化的iPSCs长度和宽度均大于共培养前的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05）。分化的iPSCs宽度与CECs比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CECs细胞膜表面突起的最大宽度和高度分别为（2．11±1．03）μm和（115．68±92．08）nm，膜表面凹陷为窗孔样凹陷，最大宽度为（1．49±0．65）μm，膜表面结构几何参数均方根粗糙度（Rq）为（39．20±7．82）nm，平均粗糙度（Ra）为（30．37±5．32）nm；未分化的iPSCs细胞膜表面突起为颗粒状，突起的最大宽度和高度分别为（0．39±0．22）μm和（13．11±9．18）nm，膜表面凹陷为虫蚀样，凹陷的最大宽度为（0．34±0．18）μm，Rq和Ra分别为（26．60±4．93）nm和（9．97±3．78）nm；分化的iPSCs细胞膜表面突起为指状，突起的最大宽度和高度分别为（1．91±0．76）μm和（106．55±77．27）nm，膜表面凹陷为窗孔样，凹陷的最大宽度为（1．61±1．25）μm，Rq为（57．33±12．80）nm，Ra为（43．63±11．17）nm。分化的iPSCs细胞膜表面突起最大宽度和高度、凹陷最大宽度、Rq、Ra均大于共培养前未分化的iPSCs，差异均有统计学意义（P〈0．05），与CECs比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论AFM能够敏感地观察到iPSCs与CECs接触共培养7d后iPSCs向CECs方向转化的形态学变化，为进一步研究iPSCs向CECs的分化提供了研究基础。

关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞混合共培养分化原子力显微镜

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诱导多能干细胞在眼科的研究进展

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中华实验眼科杂志 2012年第7期30卷 662-666页

作者：招志毅(综述) 陈建苏(审校) 暨南大学附属第一医院眼科、暨南大学医学院眼科研究所、再生医学教育部重点实验室广州510632

2006年诱导多能干细胞（iPSCs）的建立被誉为是干细胞研究领域的重大突破，使得进行患者体细胞来源的干细胞治疗成为可能。近年的研究表明，动物和人的成纤维细胞、B淋巴细胞、神经干细胞、头发角质细胞、胰腺细胞、脐带基质和羊膜的间... 详细信息

2006年诱导多能干细胞（iPSCs）的建立被誉为是干细胞研究领域的重大突破，使得进行患者体细胞来源的干细胞治疗成为可能。近年的研究表明，动物和人的成纤维细胞、B淋巴细胞、神经干细胞、头发角质细胞、胰腺细胞、脐带基质和羊膜的间充质细胞均可重编程成为iPSCs并可通过一定的诱导分化为特定类型的细胞，为多种疾病的特异性治疗提供了新的方法。而iPSCs研究在眼科领域的研究也取得了长足进展。在眼科，iPSCs诱导后可分化为视网膜色素上皮（RPE）细胞、感光细胞和其他视网膜细胞，从而为治疗视网膜退行性病变奠定了基础。与传统的干细胞治疗不同，iPSCs移植治疗相应的疾病避免了传统干细胞治疗所存在的道德伦理及免疫排斥等限制，具有较好的应用前景。就iPSCs的概念、诱导策略及方法、在眼科领域的研究现状、研究中存在的问题及应用前景等方面进行综述。

关键词：诱导多能干细胞视网膜变性性疾病眼科

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小环肽C＊HSDGIC＊对中波紫外线诱导的视网膜色素人上皮细胞凋亡的影响

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中国病理生理杂志 2012年第5期28卷 914-918页

作者：丁勇程欢欢余榕捷陈建苏暨南大学附属第一医院眼科广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632 暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)的衍生物小环肽C*HSDGIC*(CHC)对中波紫外线(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法:Western blotting检测人RPE细胞PACAP 1型受体(PAC1受体)表达;RPE细胞接受0.2 J/cm2UVB照射... 详细信息

目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活多肽(PACAP)的衍生物小环肽C*HSDGIC*(CHC)对中波紫外线(UVB)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡的影响。方法:Western blotting检测人RPE细胞PACAP 1型受体(PAC1受体)表达;RPE细胞接受0.2 J/cm2UVB照射,随后实验组给予含不同浓度CHC的无血清培养基培养,对照组给予无血清培养基培养;CCK-8法检测CHC对RPE细胞活性的影响;流式细胞术Annexin-V/PI双染检测RPE细胞凋亡情况,JC-1染色检测线粒体膜电位。结果:Western blotting显示RPE细胞表达PAC1受体,CCK-8法显示CHC促细胞活性的最佳浓度为100μmol/L,细胞活性比对照组增加(34.23±3.39)%(P<0.05),抗凋亡最佳浓度也为100μmol/L,细胞活性比对照组增加(20.10±1.48)%(P<0.05)。流式细胞仪分析显示,100μmol/L CHC能使UVB照射后凋亡细胞比例下降(5.63±1.49)%,线粒体去极化细胞比例下降(5.2±0.5)%(P<0.05)。结论:人RPE细胞存在PAC1受体,小环肽C*HSDGIC*对人RPE细胞有促进活性和拮抗凋亡的作用。

关键词： C＊HSDGIC＊紫外线B 细胞凋亡视网膜色素上皮

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角膜基质细胞的表型转化及其分子机制

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中国病理生理杂志 2011年第4期27卷 803-807,812页

作者：潘红卫李学晶徐锦堂陈妙姣马荣暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632 暨南大学医附属第一医院眼科广东广州510632 中国中医科学院眼科医院北京100040 暨南大学医学院临床医学系广东广州510632

角膜瘢痕是继发于多种角膜疾病的病理性改变,是许多角膜疾病造成视力不同程度损害甚至丧失的直接原因,也是影响角膜屈光手术效果的重要因素。对于角膜损伤愈合后的角膜瘢痕,目前临床上主要治疗方法是穿透性或者板层角膜移植术,但因为角... 详细信息

角膜瘢痕是继发于多种角膜疾病的病理性改变,是许多角膜疾病造成视力不同程度损害甚至丧失的直接原因,也是影响角膜屈光手术效果的重要因素。对于角膜损伤愈合后的角膜瘢痕,目前临床上主要治疗方法是穿透性或者板层角膜移植术,但因为角膜供体材料缺乏和经济原因,大量的患者无法得到手术治疗而最终丧失视力。近年来国外内相关研究证实了角膜基质细胞向肌成纤维细胞的表型转化在角膜瘢痕形成中的重要作用。

关键词：角膜细胞肌成纤维细胞表型转化

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带有穿膜肽PTD的重组Oct4的制备及活性鉴定

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中国病理生理杂志 2011年第9期27卷 1790-1795页

作者：李红阳李晓霞余榕捷刘晓飞王静静苏航陈建苏暨南大学第一临床医学院广东广州510632 暨南大学医学院眼科广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的:重组蛋白构建细胞转录因子PTD-Oct4。方法:利用重叠延伸PCR法重组目的基因构建质粒pKYB-PTD-Oct4,并转染至*** ER2566。镍柱纯化重组蛋白并用Western bloting对其进行鉴定。用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PTD-Oct4,检测其穿透中国仓... 详细信息

目的:重组蛋白构建细胞转录因子PTD-Oct4。方法:利用重叠延伸PCR法重组目的基因构建质粒pKYB-PTD-Oct4,并转染至*** ER2566。镍柱纯化重组蛋白并用Western bloting对其进行鉴定。用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PTD-Oct4,检测其穿透中国仓鼠卵巢(CHO)细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(FRET)检测重组融合蛋白PTD-Oct4结合目的DNA的活性。结果:成功获得目的蛋白PTD-Oct4,其可以成功进入细胞,定位于细胞核内,穿膜效率为(28.3±2.4)%,并具有与目标DNA序列特异结合的能力。结论:制备重组PTD-Oct4为外源蛋白诱导多能干细胞(IPSCs)奠定基础。

关键词： Oct4 诱导全能干细胞

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小环肽CHSDGIC对兔角膜碱烧伤愈合的作用

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眼科新进展 2011年第10期31卷 904-907页

作者：丁勇汤翠翠余榕捷黄霖陈建苏赵秀丽徐锦堂暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究室暨南大学生物工程研究所广东省广州市510632

目的研究垂体腺苷酸环化酶激活多肽衍生的小环肽CHSDGIC对兔角膜碱烧伤愈合的促进作用,为临床治疗提供新思路。方法制作兔角膜碱烧伤模型。14只新西兰大白兔随机平均分为2组:一组为实验组,碱烧伤后给予小环肽滴眼液滴眼(100μmol.L-1),... 详细信息

目的研究垂体腺苷酸环化酶激活多肽衍生的小环肽CHSDGIC对兔角膜碱烧伤愈合的促进作用,为临床治疗提供新思路。方法制作兔角膜碱烧伤模型。14只新西兰大白兔随机平均分为2组:一组为实验组,碱烧伤后给予小环肽滴眼液滴眼(100μmol.L-1),每天3次,持续21d;另一组为对照组给予生理盐水滴眼。碱烧伤后每天观察眼前段情况,在不同的时间点(碱烧伤后第2、7、14、21天)通过角膜荧光素染色测量角膜着色面积,并在治疗结束后进行角膜组织学检查。结果角膜碱烧伤后在不同时间点(第2、7、14、21天)测量的角膜荧光素染色面积,实验组分别为(1.85±0.10)mm2、(4.56±0.22)mm2、(3.39±0.13)mm2、(0.44±0.10)mm2;对照组分别为(2.33±0.15)mm2、(6.80±0.26)mm2、(9.09±0.24)mm2、(5.03±0.24)mm2,两组之间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。HE染色检查发现实验组角膜上皮修复较完整,基质层未见明显炎症细胞及少量血管内皮细胞。对照组角膜上皮与基底部结合疏松,可见明显炎性细胞。结论小环肽CHSDGIC能促进碱烧伤后角膜上皮的修复,可能成为恢复角膜完整性及透明性的极有潜力的治疗药物。

关键词：小环肽 CHSDGIC 角膜碱烧伤

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一种培养原代小鼠角膜基质细胞的新方法

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眼科新进展 2011年第6期31卷 524-526页

作者：李晓霞陈建苏余榕捷苏杭李娟田振彩戴静赵秀丽李红阳招志毅暨南大学第一临床医学院眼科广东省广州市510632 暨南大学医学院眼科研究所广东省广州市510632 暨南大学生物工程研究所广东省广州市510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室

目的改良小鼠角膜基质细胞分离培养方法 ,为角膜基质细胞生物学和角膜组织工程等研究提供更好的种子细胞。方法采用Dispase酶消化法联合组织块贴壁法分离、培养原代小鼠角膜基质细胞,倒置显微镜下观察细胞生长情况,通过间接免疫荧光化... 详细信息

目的改良小鼠角膜基质细胞分离培养方法 ,为角膜基质细胞生物学和角膜组织工程等研究提供更好的种子细胞。方法采用Dispase酶消化法联合组织块贴壁法分离、培养原代小鼠角膜基质细胞,倒置显微镜下观察细胞生长情况,通过间接免疫荧光化学染色Vimentin表型和RT-PCR检测Vimentin、Lumican和CK12基因表达对培养的细胞进行鉴别。结果倒置显微镜下可见小鼠角膜基质细胞呈三角形和树枝状,细胞间连接明显,可形成网状连接;免疫荧光化学鉴定小鼠角膜基质细胞表达Vimentin阳性;RT-PCR显示Vimentin和Lumican基因表达阳性,CK12表达阴性。结论 Dispase酶消化法联合组织块贴壁法培养可获得具有角膜基质细胞特性的细胞,本方法为体外获得单纯小鼠角膜基质细胞提供了简单高效的途径。

关键词：角膜基质细胞培养小鼠

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Maxadilan 对兔角膜上皮细胞的促增殖作用

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眼科新进展 2011年第10期31卷 901-903,911页

作者：招志毅陈建苏余榕捷谭美华李红阳刘晓飞王静静暨南大学附属第一医院眼科暨南大学医学院眼科研究所再生医学教育部重点实验室广东省广州市510632 暨南大学生物医学工程研究所广东省广州市510632

目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的PAC1受体特异激动剂Maxadilan对角膜上皮细胞的促增殖作用。方法分离新西兰大白兔角膜上皮细胞,并在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基... 详细信息

目的探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的PAC1受体特异激动剂Maxadilan对角膜上皮细胞的促增殖作用。方法分离新西兰大白兔角膜上皮细胞,并在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基中培养。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测兔角膜上皮细胞PACAP的PAC1受体;细胞增殖实验采用CCK-8法检测,角膜上皮细胞培养基中分别加入0.01μmol.L-1、0.03μmol.L-1、0.05μmol.L-1、0.10μmol.L-1、0.15μmol.L-1Maxadilan作为实验组,未加入Maxadilan作为对照组,检测不同浓度的Maxadilan对角膜上皮细胞增殖的影响;流式细胞仪分析0.10μmol.L-1Maxadilan对细胞周期的影响。结果 RT-PCR检测显示兔角膜上皮细胞含有PACAP的PAC1受体;CCK-8法检测显示0.05μmol.L-1、0.10μmol.L-1、0.15μmol.L-1Maxadilan实验组分别比对照组细胞增多29.1%、41.5%、32.5%,与对照组相比差异有统计学意义(P分别为0.001、0.000、0.000);流式细胞仪分析显示0.10欁μmol.L-1Maxadilan组细胞增殖指数平均值为35.98%,与对照组细胞细胞增殖指数平均值29.48%相比,差异有统计学意义(P=0.014)。结论角膜上皮细胞存在PACAP的PAC1受体,Maxadilan对角膜上皮细胞有促增殖作用。

关键词： Maxadilan 角膜上皮细胞细胞增殖兔

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TGF-β在角膜中的作用

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眼科新进展 2011年第4期31卷 301-304页

作者：徐锦堂吴静潘红卫胡琦暨南大学医学院眼科研究室广东省广州市510630 哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院黑龙江省哈尔滨市150001

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一个多功能的生长因子,对角膜上皮、内皮和基质细胞均有影响。TGF-β与免疫抑制有着密切的联系,当在培养液内添加TGF-β1时,可使CD69+CD25+和CD25+CD4+、CD25+CD8+、CD71+CD4+... 详细信息

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一个多功能的生长因子,对角膜上皮、内皮和基质细胞均有影响。TGF-β与免疫抑制有着密切的联系,当在培养液内添加TGF-β1时,可使CD69+CD25+和CD25+CD4+、CD25+CD8+、CD71+CD4+、CD71+CD8+的表达受到抑制。有实验证明:局部应用TGF-β1对大鼠的移植排斥反应具有抑制作用,TGF-β1治疗组移植片比对照组透明时间长。用猪角膜作载体,体外构建TGF-β1转基因后板层角膜植片移植给兔,结果表明:角膜内皮细胞内高表达TGF-β1,可抑制免疫排斥反应的发生和延长移植片的成活时间。初步应用TGF-β1滴眼液治疗角膜与免疫相关疾病结果证实,TGF-β1能够提高这些眼病的治愈率,缩短其病程。

关键词：转化生长因子-β1 角膜移植排斥

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第十六次全国眼科年会图片展获奖作品选登

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中华眼科医学杂志（电子版） 2011年第1期1卷 114-115页

作者：卿国平李婷蔡正元王桂芳戴荣平高磊吕刚王怀洲张赫杜虹首都医科大学附属北京同仁医院眼科中心 100730 新疆维吾尔自治区人民医院眼科上海市第一人民医院眼科研究所暨南大学附属第一医院眼科北京协和医院眼科青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院眼科长春一诺眼科医院英智眼科医院检查室

本文图片选自于中华医学会第十六次全国眼科学术会议期间,第十一届眼科图片展获得专家评审团特别推荐奖的优秀作品.图片简介 ①晶状体悬韧带,卿国平;②黄斑裂孔,李婷;③赤道部视网膜裂孔,蔡正元;④'沟回',王桂芳;⑤'庆典... 详细信息

本文图片选自于中华医学会第十六次全国眼科学术会议期间,第十一届眼科图片展获得专家评审团特别推荐奖的优秀作品.图片简介 ①晶状体悬韧带,卿国平;②黄斑裂孔,李婷;③赤道部视网膜裂孔,蔡正元;④'沟回',王桂芳;⑤'庆典',王桂芳;⑥'青蛙',戴荣平;⑦视网膜前出血,高磊;⑧视网膜皱襞,吕刚;⑨瞳孔残膜,王怀洲;⑩'君为谁舞?',张赫; '群星拱日',杜虹; BOWEN。

关键词：视网膜前出血黄斑裂孔晶状体悬韧带王桂芳获奖作品选张赫学术会议专家评审团中华医学会赤道部

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