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药学学报 2009年第5期44卷 480-485页

作者：陆晓宇曾耀英叶燕霞周玉英慕静静赵晓慧暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

探讨根皮素(phloretin)在体外对小鼠T淋巴细胞增殖、活化、周期和巨噬细胞NO释放、吞噬功能的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术检测根皮素对T淋巴细胞增殖的影响。荧光抗体染色结合流式细胞术分析根皮素对T淋巴细胞在ConA的刺激下C... 详细信息

探讨根皮素(phloretin)在体外对小鼠T淋巴细胞增殖、活化、周期和巨噬细胞NO释放、吞噬功能的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术检测根皮素对T淋巴细胞增殖的影响。荧光抗体染色结合流式细胞术分析根皮素对T淋巴细胞在ConA的刺激下CD69和CD25的表达水平的影响。碘化丙啶(PI)染色检测细胞周期的分布情况。Griess试剂盒和荧光微球分别用以检测巨噬细胞NO释放和吞噬功能。结果显示,根皮素(40、60和80μmol.L-1)明显抑制T淋巴细胞增殖,增殖指数(PI)从1.41±0.13分别下降到1.34±0.16、1.19±0.12和1.07±0.06。根皮素可明显抑制CD69和CD25的表达(P<0.01)。细胞周期分析显示,根皮素可将细胞抑制在G0/G1期。巨噬细胞在LPS和IFN-γ的刺激下的NO释放量为(26.72±3.57)μmol.L-1,而在根皮素作用下NO释放量明显下降(P<0.01)。巨噬细胞吞噬率在根皮素作用下也明显下降(P<0.01)。以上结果表明,根皮素有望发展成为一种新的免疫抑制药物。

关键词：根皮素 T淋巴细胞巨噬细胞流式细胞术

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银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134表达的研究

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中国实用医刊 2010年第11期37卷 8-11页

作者：刘毅蔡小嫦曾耀英北京协和医学院皮肤病研究所中国医学科学院 210042 暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式... 详细信息

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式细胞术检测T细胞CD69、CD134的表达.结果银屑病患者组和健康对照组各11例纳入研究,结果显示:①银屑病患者组新鲜血标本T细胞CD134、CD69表达率均明显高于健康对照组(P<0.01); ②PMA联合Ionomycin刺激第6、12、24 h,银屑病患者组与健康对照组外周血T细胞CD69表达率仅在第24 h差异具有统计学意义(P<0.05); ③在刺激第6、12、24 h,银屑病患者组外周血T细胞CD134表达率均较健康对照组显著升高(P<0.001).结论银屑病患者外周血T细胞存在异常活化.在体外活化的外周血T细胞上,银屑病患者组CD134的表达显著高于健康对照组.

关键词：银屑病患者外周血流式细胞术检测 CD69 表达率 T lymphocytes peripheral blood T cells controls 对照组健康志愿者 results 刺激体外活化 PMA 免疫荧光标记 plus whole blood significant 统计学意义

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IL-22参与介导NOD小鼠自发性胚胎丢失

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现代免疫学 2010年第5期30卷 370-374页

作者：许洁涵陈琳琳赵晓明陈翃王文静林羿上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心上海200001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科学研究所上海200001

为研究IL-22与NOD小鼠自发性胚胎吸收率增高的关系,多次腹腔注射中和抗体抑制IL-22,采用流式细胞术检测子宫CD4+IL-22+细胞百分率,并观察NOD×C57BL/6小鼠交配组合中孕鼠胚胎吸收率的变化。结果显示,NOD×C57BL/6孕鼠子宫CD4+IL... 详细信息

为研究IL-22与NOD小鼠自发性胚胎吸收率增高的关系,多次腹腔注射中和抗体抑制IL-22,采用流式细胞术检测子宫CD4+IL-22+细胞百分率,并观察NOD×C57BL/6小鼠交配组合中孕鼠胚胎吸收率的变化。结果显示,NOD×C57BL/6孕鼠子宫CD4+IL-22+细胞百分率显著高于BALB/c×C57BL/6孕鼠(52.4%±2.1%与14.3%±4.4%,P<0.01)。多次腹腔注射中和抗体可显著降低NOD×C57BL/6孕鼠子宫内CD4+IL-22+细胞数量(18.7%±2.8%;与未抑制组相比,P<0.01),并可显著降低这些小鼠孕12.5 d的胚胎吸收率(4.8%±2.0%与19.1%±5.1%,P<0.05)。线性相关-回归分析显示,胚胎吸收率与子宫CD4+IL-22+细胞百分率呈正相关。提示妊娠子宫内CD4+IL-22+细胞相对数量过多是妊娠不利因素,可能是造成NOD×C57BL/6孕鼠胚胎吸收率增高的原因之一。

关键词：流产母-胎界面免疫调节免疫耐受

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根皮素对小鼠T淋巴细胞体外活化、周期、Ca^(2+)离子内流以及凋亡的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第12期25卷 1199-1201页

作者：陆晓宇曾耀英叶燕霞曾祥凤肇静娴暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究根皮素(Ph)对小鼠T淋巴细胞中期活化、细胞周期、Ca2+离子内流以及凋亡的影响,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性。方法:双色荧光抗体染色结合流式细胞术(FCM)分析Ph对多克隆刺激剂(ConA)刺激下的小鼠T淋巴细胞CD25表达的影... 详细信息

目的:研究根皮素(Ph)对小鼠T淋巴细胞中期活化、细胞周期、Ca2+离子内流以及凋亡的影响,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性。方法:双色荧光抗体染色结合流式细胞术(FCM)分析Ph对多克隆刺激剂(ConA)刺激下的小鼠T淋巴细胞CD25表达的影响;PI染色法检测Ph对T淋巴细胞周期的影响;Fluo-4/AM染色结合FCM分析Ph对T淋巴细胞Ca2+离子内流的影响;calcein/Co2+技术检测Ph对T淋巴细胞线粒体通透性转换(MPT)的影响,并用DIOC6(3)染色检测其对线粒体膜电势(MMP)的影响。结果:Ph(40,60,80μmol/L)对ConA刺激的T淋巴细胞CD25表达有显著的抑制作用(P<0.01);Ph能抑制T淋巴细胞Ca2+离子内流(P<0.01);细胞周期分析显示,Ph能将T淋巴细胞抑制在S期;且Ph能够诱导和加速MPT,并导致MMP的显著下降。结论:Ph对小鼠T淋巴细胞活化和Ca2+内流具有显著的抑制作用,并能将细胞抑制在S期,能通过线粒体途径诱导T淋巴细胞凋亡,可望发展成为一种新的免疫抑制药物。

关键词：根皮素淋巴细胞流式细胞术抑制作用

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HIV/AIDS患者外周血白细胞TLR-1、-2、-4和-6的表达

HIV/AIDS患者外周血白细胞TLR-1、-2、-4和-6的表达

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2010年全国艾滋病临床影像诊断研讨会

作者：赵令斋唐小平曾耀英广州市第八人民医院传染病研究所，广州，510060 暨南大学组织移植与免疫研究中心，广州，510632

[目的]通过对健康人和HIV/AIDS患者外周血白细胞Toll样受体-11(TLR-1)、TLR-2、TLR-4和TLR-6的表达差异分析，以筛选出表达异常的TLRs，探讨其在HIV/AIDS疾病过程中的意义。 [方法]应用流式细胞仪检测15例健康人和20例HIV/AIDS患者... 详细信息

[目的]通过对健康人和HIV/AIDS患者外周血白细胞Toll样受体-11(TLR-1)、TLR-2、TLR-4和TLR-6的表达差异分析，以筛选出表达异常的TLRs，探讨其在HIV/AIDS疾病过程中的意义。 [方法]应用流式细胞仪检测15例健康人和20例HIV/AIDS患者外周血多型核粒细胞、淋巴细胞和单核细胞表面TLR-1、TLR-2、TLR-4和TLR-6的表达。 [结果]TLR-1、TLR-2、TLR-4和TLR-6在外周血白细胞表面均有表达。HIV/AIDS患者多型核粒细胞表面的TLRs表达水平均降低，与健康对照相比，P值分别为P=0.014，P＜0.001，P＜0.001，P=0.004;但HIV/AIDS患者单核细胞表面的TLRs表达水平均升高，与健康对照相比，P值分别为P=0.047，P＜0.001，P=0.019，P＜0.001;HIV/AIDS患者淋巴细胞表面的TLRs表达水平有增高的趋势，TLR-4的表达水平与健康对照相比没有显著差异，TLR-1、TLR-2、和TLR-6的表达水平均升高，P值分别为P=0.024，P=0.008，P=0.037。 [结论]HIV/AIDS患者外周血白细胞表面TLR-1、-2、-4、-6的表达水平与健康对照相比有显著变化，这表明TLRs及其介导的免疫应答在HIV/AIDS疾病过程中有一定的意义。

关键词： HIV/AIDS roll样受体多型核粒细胞单核细胞淋巴细胞

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Forskolin对佛波醇酯类刺激的小鼠体外T淋巴细胞行为的影响

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免疫学杂志 2009年第2期25卷 177-182,186页

作者：宋兵曾耀英黄秀艳李林杨志滕菲姚满林暨南大学组织移植与免疫中心

目的分析Forskolin对佛波醇酯多克隆刺激剂(phorbol12,13-dibutyrate,PDB)联合离子霉素(ionomycin,Ion)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞体外增殖和周期的影响,在此基础上进一步研究Forskolin对单纯PDB刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69... 详细信息

目的分析Forskolin对佛波醇酯多克隆刺激剂(phorbol12,13-dibutyrate,PDB)联合离子霉素(ionomycin,Ion)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞体外增殖和周期的影响,在此基础上进一步研究Forskolin对单纯PDB刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69分子和中期活化标志CD25分子的影响,从而阐明其作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育48h后,运用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色技术和碘化丙锭(PI)染色技术结合流式细胞术、CELLQuest和ModFitLT软件,分别检测Forskolin对PDB+Ion刺激下小鼠CD3+T淋巴细胞增殖和周期的影响;与不同浓度的Forskolin孵育2h、10h,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术检测Forskolin对PDB诱导下的小鼠CD3+T淋巴细胞CD69分子和CD25分子表达的影响。结果Forskolin(10-7、10-6、10-5mol.L-1)均能明显抑制PDB+Ion刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞的增殖并将细胞阻滞在G0/G1期;同时也能明显抑制单纯PDB刺激下的CD3+T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系。结论提示Forskolin在CD3+T细胞活化过程中信号转导的某个环节上有抑制作用,从而通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。

关键词： Forskolin CD69 CD25 增殖周期流式细胞术

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红车轴草提取物对小鼠同种异基因皮片移植的影响

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中华中医药杂志 2009年第4期24卷 443-446页

作者：杨志黄秀艳狄静芳曾耀英暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

目的:探讨红车轴草提取物(Trifoliumpratense Leguminosaeextract,TLE)对小鼠同种异基因皮片移植的影响。方法:受体BALB/c小鼠分为生理盐水对照组(physiologicsaline,PS)与TLE处理组,通过背-背法进行C57BL/6的全厚皮皮片移植,以观察TLE处理组移植皮片生长情况是否优于PS组。取受体小鼠淋巴细胞进行羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE)标记的增殖追踪及混合淋巴细胞反应。结果:尾静脉注射TLE25μg/kg每天的处理组移植皮片生长情况优于PS组。TLE处理组BALB/c小鼠淋巴细胞增殖低于PS组。结论:TLE可能参与了小鼠免疫系统调节,诱导了其对同种异基因皮片的耐受。

关键词：红车轴草提取物皮片移植同种异基因增殖混合淋巴细胞反应实验研究

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乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第8期25卷 719-721页

作者：曾山林羿狄镜芳冯铮暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:观察乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注后导致的细胞凋亡的影响,探讨其机制。方法:链尿佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,随机分为假手术组、缺血/再灌注组和缺血/再灌注+乙酰半胱氨酸治疗组。组织匀浆检测心肌组织还原型谷胱甘肽(... 详细信息

目的:观察乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注后导致的细胞凋亡的影响,探讨其机制。方法:链尿佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,随机分为假手术组、缺血/再灌注组和缺血/再灌注+乙酰半胱氨酸治疗组。组织匀浆检测心肌组织还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)和琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化两种方法检测心肌细胞凋亡并计算凋亡指数。结果:缺血/再灌注后,糖尿病和非糖尿病组均出现明显的心肌细胞凋亡,同时伴有GSH含量降低,GSSG含量和Caspase-3的活性升高,上述变化糖尿病组比非糖尿病组更明显(P<0.05);乙酰半胱氨酸干预的糖尿病和非糖尿病大鼠的心肌细胞凋亡均减轻,同时伴有GSH含量上升,GSSG含量和Caspase-3的活性下降,上述变化非糖尿病组比糖尿病组更明显(P<0.05)。结论:乙酰半胱氨酸干预可以通过提高心肌GSH含量、降低Caspase-3的活性减轻糖尿病和非糖尿病大鼠缺血/再灌注引起的心肌细胞凋亡,对缺血/再灌注心肌有保护作用,但糖尿病组的疗效低于非糖尿病组。

关键词：心肌再灌注损伤乙酰半胱氨酸半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3

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乙酰半胱氨酸对小鼠缺血再灌注损伤肝肺组织的保护作用及机制

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第11期25卷 1058-1060页

作者：曾山林羿狄镜芳冯铮暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型中肝肺组织的保护作用及机制。方法:制备BALB/c小鼠肝部分缺血再灌注损伤模型,将小鼠随机分为3组:假手术组(SH组),缺血再灌注组(I/R组)和NAC组(I/R-NAC组)。分别于再... 详细信息

目的:研究抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型中肝肺组织的保护作用及机制。方法:制备BALB/c小鼠肝部分缺血再灌注损伤模型,将小鼠随机分为3组:假手术组(SH组),缺血再灌注组(I/R组)和NAC组(I/R-NAC组)。分别于再灌注后1 h、3 h取静脉血测定血清TNF-α浓度和ALT水平;取肺组织标本测湿干质量比及病理。同时取肝、肺组织行RT-PCR以观测Toll样受体2/4(TLR2/4)表达。结果:肺组织病理结果显示I/R组肺组织毛细血管充血,肺泡结构破坏,肺泡间质中性粒细胞浸润,肺泡腔内不同程度渗出及少量红细胞。肺湿干质量比显示肺水肿。缺血再灌注后静脉血清TNF-α浓度和ALT水平较假手术组显著升高。受损肝叶和肺组织内均出现TLR2/4 mR-NA高表达,NAC干预后,肺水肿明显减轻;TLR2/4 mRNA表达受到抑制;血清TNF-α浓度和ALT水平较I/R组明显下降。结论:N-乙酰半胱氨酸抑制再灌注后TLR2/4的活化,降低TNF-α的分泌,从而减轻缺血再灌注肝、肺组织的损伤。

关键词：乙酰半胱氨酸缺血再灌注肺损伤

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Jagged-1对骨髓来源树突状细胞生成细胞因子的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第2期25卷 100-103页

作者：方志远邢飞跃郭中锋陈玲暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:探讨可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白(Jagged-1)对重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)产生细胞因子的影响。方法:建立rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导DC的模型,观察Jagge... 详细信息

目的:探讨可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白(Jagged-1)对重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)产生细胞因子的影响。方法:建立rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导DC的模型,观察Jagged-1/Fc对DC分化的形态学影响,通过Luminex蛋白液相芯片技术和ELISA检测其细胞因子的表达水平,藉MTT法测定可溶性Jagged-1/Fc诱导的DC对同种异基因淋巴细胞增殖的刺激能力。结果:除了TGF-β,Jag-ged-1/Fc诱导的DC与细菌脂多糖(LPS)或酵母聚糖A诱导的DC不同,表现为生成TNF-α的水平明显降低,IL-4显著增高,而IL-10、IL-6、IL-2、IL-12和IFN-γ的水平与对照组无明显差异。γ分泌酶抑制剂DAPT能逆转Jagged-1/Fc抑制DC生成TNF-α。混合淋巴细胞反应显示Jagged-1/Fc诱导的DC对T细胞增殖的刺激能力最弱,LPS诱导的DC的刺激能力最强。结论:Jagged-1/Fc诱导的DC倾向介导免疫耐受,指导初始T细胞向Th2细胞偏离。

关键词： Jagged-1 细菌脂多糖酵母聚糖A 树突状细胞细胞因子

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