检索结果-内蒙古大学图书馆

南方医科大学学报 2009年第2期29卷 289-291页

作者：王毅飞蔡德鸿陈宏莫永炎伊娜邢飞跃南方医科大学珠江医院内分泌科广东广州510282 南方医科大学病理生理学教研室广东广州510515 广州市中医院内分泌科广东广州510130 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标... 详细信息

目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标记的PPARγ2启动子寡核苷酸结合,丙烯酰胺非变性胶电泳分离,Odyssey红外荧光成像系统扫描分析。结果一条DNA-蛋白结合复合物图像清晰直观,信号强度随着蛋白量的增加而增加。结论红外荧光技术可用于DNA-蛋白复合物电泳迁移率变动的分析,具有灵敏度高、操作方便的优点。

关键词：红外荧光电泳迁移率 DNA-蛋白复合物糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白过氧化物酶体增殖物活化受体γ2

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补阳还五汤预处理大鼠对其脑死亡后肝脏的保护作用

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中华实验外科杂志 2009年第8期26卷 1081-1081页

作者：刘嘉雯陈洁曾慧兰曾耀英苏泽轩暨南大学附属第一医院泌尿外科/器官移植科广州510630 暨南大学附属第一医院血液科广州510630 暨南大学附属第一医院组织移植与免疫中心广州510630

脑死亡供体器官移植后易发生急慢性排斥反应，移植前改善脑死亡供体器官质量是获得移植物长期存活和功能的关键^[1]。本研究旨在观察补阳还五汤（BYHWT）预处理大鼠对其脑死亡后肝脏炎症细胞因子、p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化... 详细信息

脑死亡供体器官移植后易发生急慢性排斥反应，移植前改善脑死亡供体器官质量是获得移植物长期存活和功能的关键^[1]。本研究旨在观察补阳还五汤（BYHWT）预处理大鼠对其脑死亡后肝脏炎症细胞因子、p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化和反应性氧族（ROS）的变化，探讨其对肝脏的保护机制。

关键词：补阳还五汤脑死亡预处理保护作用肝脏 p38丝裂原活化蛋白激酶大鼠慢性排斥反应

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鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：李孝建沈雁张志李延仓杨小红曾耀英暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电... 详细信息

目的研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电泳技术展示蛋白质分子的表达,Image

关键词：初步研究差异蛋白质点差异表达

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不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：李孝建沈雁张志李延仓杨小红曾耀英暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体... 详细信息

目的探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体内等不同培养体系下培养,观察表皮干细

关键词：细胞增殖几丁质膜培养体系

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不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：李孝建沈雁张志曾耀英李延仓杨小红暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的:探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠... 详细信息

目的:探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体内等不同培养体系下培养,观察表皮干细胞生长情况;普通培养和几丁质膜共培养4w后,表皮干细胞克隆形成率的差异;免疫组织化学染色观察表皮干细胞以几丁质膜为载体植入裸鼠体内后4w,表皮干细胞的增殖、分化情况等。结果:表皮干细胞在普通培养皿培养3d左右,细胞开始克隆增殖,12d左右融合成片,传代培养后增殖能力逐渐减低,融合成片时间逐渐延长,传代培养3-4代后细胞终末分化,失去增殖能力;几丁质膜培养表皮干细胞,2w后呈棋盘式集落生长,4w后几丁质膜上有大量的表皮干细胞小集落,集落上有大量的增殖细胞附着生长,扫描电镜下见几丁质膜纤维直径约10μm,以纤维为主,上下两层呈纵横排列成十字孔,孔间有大量表皮干细胞集落。几丁质膜支架材料培养表皮干细胞4w后,其克隆形成率明显高于普通培养皿培养(P<0.05)。表皮干细胞几丁质膜支架植入裸体内培养4w后,细胞大量增殖形成"巢状"排列,在"表皮巢"周围,可见皮肤附件结构形成。结论:表皮干细胞在体外普通培养皿培养,可增殖生长,但维持增殖时间较短;与几丁质膜材料培养,可较长时间地维持表皮干细胞的增殖特性;植入体内后表皮干细胞大量增殖,并可分化形成毛囊等皮肤附件结构。

关键词：细胞增殖培养体系传代培养皮肤附件

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鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：李孝建沈雁张志曾耀英李延仓杨小红暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的:研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶... 详细信息

目的:研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电泳技术展示蛋白质分子的表达,Image Scanner□透射扫描仪及Labscan扫描软件进行扫描获取图像,利用ImageMaster 2D Elite 5.0分析软件对图像进行强度校正、点检测、背景消减、匹配,以获取两种细胞的差异蛋白点;切取差异蛋白点,MOLDI-TOF-TOF质谱仪进行质谱分析,利用软件Mascotdistiller过滤基线峰、识别信号峰,Mascot软件搜索NCBInr数据库(http://***),寻找匹配的相关蛋白质,同时查询其功能。结果:两种细胞的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性,表皮干细胞与角质形成细胞的电泳图谱平均蛋白质点数分别为(930±15)、(982±18)个,匹配点数分别为(798±11)、(850±13)个,匹配率分别为85.81%、86.56%;两种细胞蛋白质间匹配点数(868±8)个,匹配率是76.98%;找到差异蛋白质点11个,其中只在表皮干细胞表达或高表达的有8个,只在角质形成细胞表达或高表达的有3个。差异蛋白质点分别进行MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析,鉴定出11个有意义的蛋白质。其中表皮干细胞表达或表达明显增高的8个蛋白质包括Rho GDP解离抑制蛋白□(dissociation inhibitor(GDI))、翻译延长因子1(Translationelongation factor-1)、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、谷胱苷肽S-转移酶(Glutathione S-transferase Mu 2,GSTM-2)、醛糖还原酶(Aldosereductase,AR)等;角质形成细胞表达或表达明显增高的3个蛋白质,包括Nitrilasehomolog 2(Nit 2)、膜联蛋白A5(Annexin A5)和Ubiquitin-protein hydrolase等。结论:利用双向电泳和质谱分析技术,成功分离和鉴定出鼠表皮干细胞和角质形成细胞差异表达的蛋白质。这些差异蛋白质可能与表皮干细胞和角质形成细胞体外增殖、分化特性的差异有一定关系,为进一步研究调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系奠定了基础。

关键词：差异蛋白质点初步研究差异表达

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咖啡酸苯乙酯对小鼠CD3^+T细胞体外活化和增殖的影响

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中国药理学通报 2008年第4期24卷 472-477页

作者：唐先高曾耀英黄秀艳周建国暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的研究咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对小鼠CD3+T淋巴细胞活化及增殖的影响,探讨其作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结淋巴细胞,制备淋巴细胞悬液。在淋巴细胞活化实验中,分别与不同浓度的咖啡酸苯乙酯预先孵育2h后... 详细信息

目的研究咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对小鼠CD3+T淋巴细胞活化及增殖的影响,探讨其作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结淋巴细胞,制备淋巴细胞悬液。在淋巴细胞活化实验中,分别与不同浓度的咖啡酸苯乙酯预先孵育2h后,加入促分裂原伴刀豆蛋白A(ConA),运用荧光抗体染色技术结合流式细胞术,8h后,检测T淋巴细胞早期活化标记分子CD69的表达情况;24h后,检测T淋巴细胞中期活化标记分子CD25的表达情况;在淋巴细胞增殖试验中,运用CFDA-SE标记法检测T淋巴细胞刺激48h后的增殖情况。结果CAPE(0·5、1、5、10mg·L-1)能够明显地抑制ConA刺激的小鼠淋巴细胞活化,且呈浓度依赖性;CAPE(0·5、1、5、10mg·L-1)能够明显地抑制ConA刺激的小鼠淋巴细胞增殖,且呈浓度依赖性。结论CAPE对小鼠CD3+T淋巴细胞的体外活化和增殖具有抑制作用,其作用机制可能通过同时抑制PLC-γ信号途径和MAP激酶途径,由此推理CAPE是一种潜在的有效的免疫抑制剂。

关键词：咖啡酸苯乙酯 T淋巴细胞活化增殖流式细胞术

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红车轴草提取物对小鼠淋巴细胞活化与增殖及巨噬细胞分泌NO的影响(英文)

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药学学报 2008年第10期43卷 1019-1024页

作者：杨志黄秀艳曾耀英暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

探讨红车轴草提取物(RCE)在体外对小鼠T淋巴细胞和巨噬细胞的影响。MTT法检测RCE对细胞的毒性作用。荧光抗体染色结合流式细胞术检测RCE对T淋巴细胞在Con A的刺激下表达活化抗原CD69、CD25、CD71的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术... 详细信息

探讨红车轴草提取物(RCE)在体外对小鼠T淋巴细胞和巨噬细胞的影响。MTT法检测RCE对细胞的毒性作用。荧光抗体染色结合流式细胞术检测RCE对T淋巴细胞在Con A的刺激下表达活化抗原CD69、CD25、CD71的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术分析RCE对T淋巴细胞在Con A诱导下增殖情况的影响。Griess法检测RCE对小鼠巨噬细胞在LPS刺激24 h后分泌NO的影响。RCE对小鼠有潜在的抗炎作用。RCE对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞的细胞毒作用很小。不同质量浓度的RCE能够很好的抑制过量的炎症相关信号分子表达,如NO,CD69,CD25,CD71,且呈剂量依赖性。RCE能够抑制T淋巴细胞的增殖。数据显示RCE可能通过对小鼠淋巴细胞活化与增殖及巨噬细胞NO分泌的抑制展示其抗炎效应。

关键词：红车轴草提取物淋巴细胞巨噬细胞增殖活化一氧化氮

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双黄连粉针剂对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第8期24卷 774-777页

作者：杨志曾耀英黄秀艳滕菲李林宋兵姚满林暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:探讨双黄连粉针剂(以下简称SHL)对小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖的影响。方法:MTT法检测SHL对小鼠淋巴细胞的毒副作用;双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析SHL对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下体外活化抗原CD69表... 详细信息

目的:探讨双黄连粉针剂(以下简称SHL)对小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖的影响。方法:MTT法检测SHL对小鼠淋巴细胞的毒副作用;双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析SHL对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下体外活化抗原CD69表达的影响;MTT法以及羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)标记技术结合流式细胞术分析SHL对小鼠T淋巴细胞在ConA诱导下体外增殖的影响。结果:SHL对小鼠淋巴结来源的淋巴细胞毒副作用非常小;终质量浓度为60、80、100、120mg/L的SHL对ConA刺激下的T淋巴细胞体外活化抗原CD69表达具有抑制作用(P<0.01);MTT法和CFDA-SE染色法都显示,终质量浓度为60、80、100、120mg/L的SHL对ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用具有明显的抑制作用(P<0.01)。结论:SHL对小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖具有明显的抑制作用。

关键词：双黄连粉针剂 T淋巴细胞体外活化增殖

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His-GILZ原核表达载体的构建及其表达与纯化

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广东医学 2009年第2期30卷 191-193页

作者：王毅飞蔡德鸿陈宏莫永炎伊娜邢飞跃南方医科大学珠江医院内分泌科广州510282 南方医科大学病理生理学教研室广州510515 广东省广州市中医院内分泌科 510130 暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的获取糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)的His融合蛋白,为下阶段深入研究GILZ的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础。方法利用基因工程技术,BamHⅠ/XhoⅠ酶切真核表达质粒HA-GILZ/PcDNA3获得GILZ cDNA,重组于能表达6个组... 详细信息

目的获取糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)的His融合蛋白,为下阶段深入研究GILZ的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础。方法利用基因工程技术,BamHⅠ/XhoⅠ酶切真核表达质粒HA-GILZ/PcDNA3获得GILZ cDNA,重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒pET-30a中。然后用该亚克隆重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA柱纯化。结果亚克隆获得GILZ/pET-30a高效原核表达重组载体,诱导表达的融合蛋白占细菌总蛋白高达40%以上,纯化的蛋白分子量约为24kD。结论成功构建His-GILZ融合蛋白原核表达载体,并高效表达、纯化,为进一步研究其结构功能关系和临床应用奠定了基础。

关键词：糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白融合蛋白原核蛋白构建纯化

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