检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2008年第3期16卷 627-632页

作者：杨志刚熊丹曾耀英梁亮李庆华吴国才广东医学院附属医院血液科广东湛江524001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632

本研究探讨自然杀伤(NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射(TBI)的预处理条件下进行allo-BMT... 详细信息

本研究探讨自然杀伤(NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)中对移植排斥、造血及免疫重建的影响。以C57BL/6(H-2b)小鼠为供鼠、BALB/c(H-2d)小鼠为受鼠,分别在致死剂量和非致死剂量(≤7.0Gy)全身照射(TBI)的预处理条件下进行allo-BMT,移植同时输注供鼠外周T细胞和(或)NK细胞,移植后不同时间检测受鼠外周血白细胞、骨髓CD34+细胞数和外周血淋巴细胞中CD3+细胞、CD19+细胞及供鼠来源的H-2Kb+细胞表达的百分率,并对不同移植组的存活率、植入与排斥、造血及免疫重建进行比较。结果表明:在致死剂量TBI预处理的移植中,输注NK细胞与不输注NK细胞的移植组比较,存活率显著增高(60天存活率为70%vs0.0%);白细胞数、CD19+细胞表达及骨髓CD34+细胞数恢复快;H-2Kb+细胞的表达水平高[(86.68±4.45)%vs(4·68±0·32)%]。移植后28天输注NK细胞组CD3+细胞表达水平明显低于不输注NK细胞组[(33.69±3.36)%vs(50.40±5·06)%,p<0.01],移植后60天两组比较差异无显著性(p>0.05)。在非致死剂量TBI预处理的移植中,移植后30天,异基因骨髓移植组H-2Kb+细胞表达率明显下降,移植后60天已下降至移植前水平;而输注高浓度和低浓度NK细胞的两组在移植后60天仍能检测到80%以上的H-2b+细胞表达。结论:在小鼠allo-BMT中,同种异基因反应性NK细胞可以抑制移植排斥,提高造血干细胞的植入水平,促进造血及免疫重建并增加移植受鼠的生存率。

关键词：天然杀伤细胞骨髓移植同种异基因反应性造血重建

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流式细胞术微球阵列法检测急性白血病血清IL-6、IL-10和TNF水平

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第4期29卷 375-377页

作者：肖平曾耀英林蔚暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 广东省佛山市第一人民医院临床医学研究所广东佛山528000

目的:探讨流式细胞术微球阵列法(CBA)在细胞因子检测中的应用及血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)在不同亚型急性白血病(AL)中的表达水平。方法:采用BD CBA F lex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒和流式细胞... 详细信息

目的:探讨流式细胞术微球阵列法(CBA)在细胞因子检测中的应用及血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)在不同亚型急性白血病(AL)中的表达水平。方法:采用BD CBA F lex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒和流式细胞术检测29例急性白血病患者和20例正常人血清样本中3种细胞因子水平。结果:AL患者IL-6、IL-10和TNF水平显著高于正常对照组,急性淋巴细胞白血病(ALL)的IL-10和TNF水平较急性非淋巴细胞白血病(ANLL)有显著性提高(P<0.05)。在ANLL亚型中,M1型IL-6水平最高。结论:CBA法能快速、准确地定量检测细胞因子;AL血清中IL-6、IL-10和TNF水平升高,可能与疾病的发生发展存在相关性。

关键词：流式细胞术微球阵列法急性白血病细胞因子

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趋化因子对调节性NK细胞归巢的诱导作用

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现代免疫学 2008年第6期28卷 457-464页

作者：王慧琪李萃林羿王文静曾山暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室长沙410008

调节性T细胞和调节性NK细胞都可能在维持妊娠方面发挥关键作用。研究显示,同种异基因妊娠非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胚胎丢失率显著增高,而注射抗唾液酸神经节苷脂清除其残存的NK细胞,可使胚胎丢失率进一步增高。相反,过继性输注来源于正... 详细信息

调节性T细胞和调节性NK细胞都可能在维持妊娠方面发挥关键作用。研究显示,同种异基因妊娠非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胚胎丢失率显著增高,而注射抗唾液酸神经节苷脂清除其残存的NK细胞,可使胚胎丢失率进一步增高。相反,过继性输注来源于正常小鼠的CD49b+CD25+NK细胞可显著降低胚胎丢失率。检测了CXCL12的特异性受体CXCR4在NK细胞表面的表达模式,并采用体外和体内迁移实验研究了NK细胞的迁移规律。由于以往研究证实小鼠胎盘滋养层细胞表达CXCL12,研究结果提示:孕期动员子宫外表达CXCR4的CD49b+CD25+NK细胞向妊娠子宫内迁移,可能对于调节母胎免疫耐受具有重要意义。

关键词：动物模型细胞迁移免疫调节妊娠耐受

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鼠表皮干细胞的稳定分选方法及其体外培养体系建立

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第25期12卷 4851-4854页

作者：李孝建李延仓4暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院烧伤科曾耀英沈雁杨小红谭见容暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院烧伤科广东省广州市510220 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心广东省广州市510220

背景：采用多种人工合成材料构建的组织工程皮肤，存在着创面愈合后不耐受摩擦、瘢痕增生及挛缩严重、缺乏皮肤附件等不足。而表皮干细胞尽管在体内可无限增殖分化以维持皮肤更新，但在体外普通培养条件下易发生终末分化。目的：为获得... 详细信息

背景：采用多种人工合成材料构建的组织工程皮肤，存在着创面愈合后不耐受摩擦、瘢痕增生及挛缩严重、缺乏皮肤附件等不足。而表皮干细胞尽管在体内可无限增殖分化以维持皮肤更新，但在体外普通培养条件下易发生终末分化。目的：为获得稳定生长的鼠表皮干细胞，拟建立或完善能够调控其增殖分化的体外培养体系。设计、时间及地点：细胞观察，于2007—05／11在广州市创伤外科研究所完成。材料：清洁级1～3d龄Wistar大鼠20只用于制备表皮干细胞。方法：采用两步酶消化法获得单个表皮细胞悬液，Ⅳ型胶原快速贴壁法分选贴壁细胞，加入含胎牛血清、0．05mmol／LCaCl2及表皮细胞生长因子、腺苷、胰岛素、氢化可的松、霍乱毒素等复合的DMEM培养基进行培养，原代分离细胞时胎牛血清体积分数为0．2以维持细胞活性，第2次换液时改为0．1。主要观察指标：光镜下观察细胞生长情况，免疫组化法检测目的细胞角蛋白19和P63整合素的表达，流式细胞仪检测01整合素和CD71的表达，通过细胞周期及生长曲线观察其增殖能力。结果：①Ⅳ型胶原筛选的细胞在复合DMEM培养基中生长良好，细胞活性〉98％，培养6d后形成含100～200个细胞的大克隆，呈鹅卵石样铺满瓶底。②角蛋白19和P63均呈阳性表达，β1整合素表达率为98.57％，CD71表达率为9．05％。③94．99％细胞处于GdG，期，细胞呈指数增长。结论：两步酶消化＋Ⅳ型胶原快速黏附法可成功分选稳定生长的鼠表皮干细胞。含霍乱毒素、腺苷、胰岛素等因子的复合DMEM培养基可维持表皮干细胞的增殖能力，其中合适的血清浓度及Ca^2＋浓度至关重要。

关键词：表皮干细胞细胞培养鉴定

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早、中、晚孕期胎盘因子体外抗HIV-1的研究

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免疫学杂志 2008年第2期24卷 230-233页

作者：李莉平林羿康佳丽夏薇王自能广州市第一人民医院妇产科广州510180 暨南大学组织移植与免疫国家重点实验室广州510632 暨南大学第一临床医学院妇产科教研室广州510632

目的探讨早、中、晚孕期胎盘因子(PF)体外抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)及在HIV-1垂直传播中的作用。方法荧光染料Calcien-AM标记的H9/HIV-1ⅢB分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,与MT2细胞混合培养,荧光显微镜下观察合胞体的形... 详细信息

目的探讨早、中、晚孕期胎盘因子(PF)体外抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)及在HIV-1垂直传播中的作用。方法荧光染料Calcien-AM标记的H9/HIV-1ⅢB分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,与MT2细胞混合培养,荧光显微镜下观察合胞体的形成;用HIV-1ⅢB感染MT2细胞,并分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,用MTT法检测HIV-1感染细胞的存活率,用ELISA方法检测细胞培养上清中p24抗原水平。结果各孕期PF并不能抑制MT2和H9/HIV-1ⅢB细胞的融合,但可以增加HIV-1感染细胞的存活率及减少HIV-1p24抗原的表达,且效应以早孕期PF最大,中孕期PF其次,晚孕期PF最小,并与剂量呈正相关。结论PF在体外具有抗HIV-1的作用,并呈现孕期和剂量相关性,可能在阻断HIV-1垂直传播中具有一定作用。

关键词：胎盘因子 HIV-1 垂直传播 Calcien-AM

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H-2D^b四聚体的制备及其在检测LCMV特异性CD8^＋T细胞中的应用

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生物工程学报 2008年第2期24卷 278-284页

作者：刘毅徐丽慧曾学思孙建方何贤辉中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所南京210042 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632 暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

MHC四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2D^b基因型(如C57BL/6)小鼠的特异性CD8^+T细胞免疫应答,需要建立H-2D^b四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR方法克隆H-2D^b重链基因的cDNA,进而构建H-2D^b胞外域与生... 详细信息

MHC四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2D^b基因型(如C57BL/6)小鼠的特异性CD8^+T细胞免疫应答,需要建立H-2D^b四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR方法克隆H-2D^b重链基因的cDNA,进而构建H-2D^b胞外域与生物素化酶BirA底物肽(BSP)融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。在LCMV GP_(33-41)抗原肽(KAVYNFATC,KAV)和人β_2-微球蛋白存在时,通过稀释法复性获得H-2D^b/KAV单体。该单体经生物素化并纯化后与PE-链亲和素按4:1的比例混合,即形成四聚体。通过流式细胞术检测经KAV肽免疫的C57BL/6小鼠体内的LCMV特异性CD8^+T细胞的频率.结果表明在外周血、引流淋巴结和脾脏中均可检测到一定频率的LCMV特异性CD8^+T细胞,其中以对外周血标本染色的效果最佳。成功建立了小鼠H-2D^b四聚体制备技术平台,为监测及分析基于H-2D^b基因型小鼠的实验性免疫治疗创造了条件。

关键词： H-2D^b MHC四聚体淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒原核表达

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人小胶质细胞的分离、纯化、特异分子表达与吞噬功能研究

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 939-944页

作者：黄秀艳曾耀英张彩朱斌暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632 中山大学附属第一医院妇产科(黄埔院区) 广东广州510700 广州市番禺区何贤纪念医院产科广东广州511400

目的:探讨人小胶质细胞(microglia)分离、纯化、培养及鉴定的方法,为深入研究小胶质细胞功能建立一种简便的、稳定的细胞模型。方法:取5个月人工药物引产的胎儿脑组织,将脑组织剪碎、研磨、过滤、离心获取混合胶质细胞悬液,用DMEM/F12... 详细信息

目的:探讨人小胶质细胞(microglia)分离、纯化、培养及鉴定的方法,为深入研究小胶质细胞功能建立一种简便的、稳定的细胞模型。方法:取5个月人工药物引产的胎儿脑组织,将脑组织剪碎、研磨、过滤、离心获取混合胶质细胞悬液,用DMEM/F12完全培养基调整细胞密度为2×1010cells/L,接种于75cm2培养瓶中(记作first0d);7-10d后,进行第1次纯化。此次纯化采用轻柔摇动法将贴壁不牢的小胶质细胞和少突胶质细胞与底层的星形胶质细胞分离并转入另一培养瓶继续培养扩增(记作second0d);4-5d后,混合的小胶质细胞和少突胶质细胞汇合成片,采用胰酶-EDTA消化法结合差速贴壁法进行第2次纯化。此次纯化将消化得到的细胞悬液离心和重悬,接种于培养瓶(记作0h);2h后,小胶质细胞贴壁生长,少突胶质细胞依然漂浮在培养上清中,此时通过移走上清以去除少突胶质细胞,即得到高纯度的小胶质细胞;运用激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术结合细胞表面或胞内免疫荧光抗体染色技术检测所分离的小胶质细胞CD45,CD11b和CD68的阳性率,以计算其纯度;通过吞噬荧光微球评价其吞噬功能;利用胞膜边缘波动(membrane ruffling)现象结合荧光标记的鬼笔环肽染色技术鉴定其活化水平。结果:我们所分离的小胶质细胞中,>98%的细胞表达CD45,CD11b和CD68,并且能够吞噬荧光微球。结论:我们成功地分离和纯化了人小胶质细胞,所得到的小胶质细胞高表达CD45,CD11b和CD68分子,并且具有很强的吞噬功能,为进一步进行其功能和蛋白质组研究奠定基础。

关键词：小神经胶质细胞 CD68 吞噬作用

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骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳技术的建立与优化

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中国实验血液学杂志 2008年第3期16卷 497-500页

作者：肖平曾耀英聂燕芳林蔚吴晓萍暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 广东省佛山市第一人民医院临床医学研究所广东佛山528000

本研究旨在建立和优化人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法,以获得分辨率高、重复性好的图谱。提取骨髓中白血病细胞总蛋白质,以等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向分离蛋白,显色后用PDQuest 7.4软件分析电泳图谱,比较不同... 详细信息

本研究旨在建立和优化人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法,以获得分辨率高、重复性好的图谱。提取骨髓中白血病细胞总蛋白质,以等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向分离蛋白,显色后用PDQuest 7.4软件分析电泳图谱,比较不同的实验条件对图谱的影响。结果显示:通过优化样品制备和电泳中的实验环节,获得了蛋白点分离清晰的图谱,平均蛋白点数为780±73,重复实验所得蛋白点匹配率为82±5%。结论:成功建立了人骨髓白血病细胞的蛋白质组双向电泳分析方法,该方法适用于后续各亚型白血病比较蛋白组学研究。

关键词：白血病双向电泳蛋白质组

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荨麻疹患者外周血嗜碱性粒细胞表面CD63表达的研究

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实用皮肤病学杂志 2008年第2期1卷 82-83,78页

作者：李振肇静娴蔡小嫦邓列华深圳市龙岗区人民医院皮肤科深圳518116 暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学附属第一医院皮肤科

目的观察荨麻疹患者外周血中活化的嗜碱性粒细胞表面表达CD63的数量,探讨嗜碱性粒细胞的活化程度,为临床检测提供新方法。方法用屋尘螨浸液作划破试验,筛选敏感的荨麻疹患者。用CD63-FITC等抗体标记嗜碱性粒细胞,流式细胞技术检测CD63... 详细信息

目的观察荨麻疹患者外周血中活化的嗜碱性粒细胞表面表达CD63的数量,探讨嗜碱性粒细胞的活化程度,为临床检测提供新方法。方法用屋尘螨浸液作划破试验,筛选敏感的荨麻疹患者。用CD63-FITC等抗体标记嗜碱性粒细胞,流式细胞技术检测CD63的表达情况。结果急、慢性患者活化嗜碱性粒细胞百分率分别为33.77～15.75%、11.66～5.25%,与正常人比较均有显著差异(P<0.05);经变应原刺激后,急、慢性患者活化嗜碱性粒细胞百分率分别为60.25～18.88%、22.22～7.89%,急、慢性患者活化前、活化后也均存在明显差异(P<0.05),而且急性患者活化程度更高(P<0.05)。结论通过测定嗜碱性粒细胞表达CD63可能有助于过敏的诊断。

关键词：荨麻疹嗜碱性粒细胞 CD63 流式细胞术

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早、中、晚孕期胎盘因子体外抗HIV-1的研究

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现代生物医学进展 2008年第6期8卷 1001-1004页

作者：李莉平康佳丽夏薇曾耀英广州市第一人民医院妇产科广东广州510180 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:探讨早、中、晚孕期胎盘因子(PF)体外抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的作用及其在HIV-1垂直传播中可能的作用。方法:采用荧光染料Calcien-AM标记的H9/HIV-1ⅢB分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,与MT2细胞混合培养,荧光显微... 详细信息

目的:探讨早、中、晚孕期胎盘因子(PF)体外抗人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的作用及其在HIV-1垂直传播中可能的作用。方法:采用荧光染料Calcien-AM标记的H9/HIV-1ⅢB分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,与MT2细胞混合培养,荧光显微镜下观察合胞体的形成;用游离的HIV-1ⅢB感染MT2细胞,并分别与早、中、晚孕期不同稀释浓度的PF作用后,用MTT法检测HIV-1感染细胞的存活率,用HIV-1 p24抗原试剂盒检测细胞培养上清中p24抗原含量的变化。结果:各孕期PF并不能抑制MT2和H9/HIV-1ⅢB细胞的融合,但可以增加HIV-1感染细胞的存活率及减少HIV-1 p24抗原的表达,且效应以早孕期PF最大,中孕期PF其次,晚孕期PF最小,并与剂量呈正相关。结论:PF在体外具有抗HIV-1的作用,并呈现孕期和剂量相关性,可能在阻断HIV-1垂直传播中具有一定作用。

关键词：胎盘因子 HIV-1 垂直传播 Calcien—AM

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