检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2007年第2期23卷 97-101页

作者：贾仟涛徐丽慧查庆兵李丰耀何贤辉曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的优化诱导条件大批量表达生物素化酶BirA底物肽(BSP)与HLA-A0203重链胞外域的融合蛋白(HLA-A0203-BSP),并制备负载HLA-A0203限制性EB病毒抗原肽EBNA3596-604的四聚体(HLA-A0203/SVR)。方法以HLA-A0203-BSP原核表达载体转化***21(DE3)菌株,优化诱导条件进行大批量重组蛋白的表达。通过稀释法复性可溶性HLA-A0203/SVR单体,然后以BirA对其进行生物素化,并以阴离子交换树脂纯化。将纯化的HLA-A0203/SVR单体与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成四聚体,通过对特异性CTL进行染色验证其结合活性。结果当IPTG的浓度为0.4mmol/L,于37℃诱导过夜后,融合蛋白的表达最多。该重组蛋白相对分子质量(Mr)为34000,与HLA-A0203-BSP的理论Mr相一致。该重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀部分,约占菌体总蛋白的30%。负载抗原肽的可溶性HLA-A0203/SVR单体是在同时存在HLA-A0203-BSP、β2微球蛋白及HLA-A0203限制性抗原肽SVR的情况下通过稀释法复性而获得。该单体生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合后即形成四聚体。流式细胞术(FCM)分析证实,该四聚体具有与HLA-A2+供者特异性CTL结合的活性。结论HLA-A0203-BSP融合蛋白在优化条件下获得高效表达。以此蛋白制备的HLA-A0203/SVR四聚体具有与HLA-A2+供者特异性CTL结合的活性,为研究HLA-A0203个体EB病毒特异性CTL的免疫应答打下了基础。

关键词： HLA—A＊0203 EB病毒四聚体原核表达融合蛋白包涵体

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人表皮组织蛋白质组双向电泳技术的建立

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第6期28卷 581-584页

作者：聂燕芳曾耀英刘钧澄吴晓萍暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 中山大学附属第一医院小儿外科广东广州510080

目的：建立和优化人表皮组织蛋白质组双向电泳技术，为后续的皮肤蛋白质组学研究奠定基础。方法：组织匀浆法制备表皮组织总蛋白，采用固相pH梯度胶条进行双向电泳，凝胶银染后用PDQuest7．4软件对电泳图谱进行分析。结果：人表皮组织... 详细信息

目的：建立和优化人表皮组织蛋白质组双向电泳技术，为后续的皮肤蛋白质组学研究奠定基础。方法：组织匀浆法制备表皮组织总蛋白，采用固相pH梯度胶条进行双向电泳，凝胶银染后用PDQuest7．4软件对电泳图谱进行分析。结果：人表皮组织蛋白质组在7cm pH5～8 IPG胶条的最佳上样量为200μg，平均蛋白斑点数为414±19，平均匹配斑点数为346±31，匹配率达83．6％。结论：通过优化双向电泳条件，获得了分辨率高、重复性好的人表皮组织蛋白质组双向电泳图谱。

关键词：表皮组织双向电泳蛋白质组

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氧化苦参碱对淋巴细胞增殖和调节性T细胞(Tr)数量的影响

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中国病理生理杂志 2007年第7期23卷 1368-1372页

作者：伍斌曾耀英蔡小嫦施军丛林王通曾祥凤中南大学湘雅一医院皮肤科湖南长沙410008 暨南大学组织移植和免疫中心教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632

目的:分析氧化苦参碱(OMT)对小鼠外周血调节性T细胞(Tr细胞)数量及其对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学机制。方法:建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,腹腔注射(ip)不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HC... 详细信息

目的:分析氧化苦参碱(OMT)对小鼠外周血调节性T细胞(Tr细胞)数量及其对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学机制。方法:建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,腹腔注射(ip)不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT),在实验的第1d、7d、14d、21d、28d小鼠尾静脉采血,应用抗-CD3、抗-CD4、抗-CD25单抗进行免疫荧光标记,流式细胞术检测各组CD4+CD25+T细胞数量。利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响。结果:500、125和31mg/LOMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而16、8、4、2mg/LOMT可促进小鼠淋巴结T细胞增殖,但剂量依赖关系不明显。腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量,与HCT组、PBS组比较(P<0.01)。结论:OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈双向作用;腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量;提示:OMT是一种双向免疫调节剂。

关键词：苦参碱 T淋巴细胞

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通痹灵总生物碱抑制关节破坏的细胞免疫作用机制

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第6期23卷 527-530页

作者：陈光星童娟刘清平沈晓燕赵诗哲曾耀英陈纪藩广州中医药大学第一附属医院六内科风湿专科广东广州510405 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:证实通痹灵总生物碱抑制胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症和关节破坏的药效,揭示其调节细胞免疫的作用机制。方法:牛II型胶原混合弗氏不完全佐剂于SPF级Wistar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组,甲氨蝶呤(MTX)治疗... 详细信息

目的:证实通痹灵总生物碱抑制胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症和关节破坏的药效,揭示其调节细胞免疫的作用机制。方法:牛II型胶原混合弗氏不完全佐剂于SPF级Wistar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组,甲氨蝶呤(MTX)治疗组和通痹灵总生物碱(以马钱子碱和士的宁为主的生物碱,TBL总碱)治疗组,容积法评价后肢肿胀度;给药后35d,乳腺钼靶机大鼠全身摄片,计分法评价各组大鼠X光片四肢96块骨侵蚀和100个关节间隙变化;处死动物,取左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(HE)染色,评价中性粒、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜细胞增生的情况;MTT法检测TBL总碱对Jurkat细胞增殖的影响;Western blot检测TBL总碱对Jurkat细胞ERK1/2磷酸化的影响。结果:造模成功后,MTX和TBL总碱给药35d都可明显抑制大鼠关节肿胀和关节破坏,与造模加生理盐水组有统计学差异(P<0.01);TBL总碱可明显抑制CIA淋巴细胞、浆细胞的浸润和滑膜增生(P<0.05),MTX可抑制滑膜增生。TBL总碱可显著抑制T细胞增殖以及ERK1/2的磷酸化。结论:TBL总碱具有抑制关节免疫炎症和关节破坏的作用,其机制可能是通过干预T细胞MAPK信号转导,抑制T细胞的活化和增殖来实现的,为TBL总碱治疗RA提供了实验依据。

关键词：胶原诱导型关节炎关节破坏通痹灵总碱 T淋巴细胞细胞信号转导

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IDO修饰的成纤维细胞培养上清对小鼠T淋巴细胞增殖的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1122-1125页

作者：罗璐曾耀英王箴王青赵莉杨冬梓中山大学附属第二医院妇产科广东广州510120 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 深圳市南山区蛇口人民医院广东深圳518067

目的:检测吲哚胺2-3双加氧酶(IDO)基因修饰的细胞对T淋巴细胞的免疫抑制作用。方法:将pEGFP-Nl-mIDO真核表达载体转染至小鼠NIH3T3成纤维细胞系。体外检测mIDO修饰的成纤维细胞培养液中色氨酸水平的变化;使用CFSE标记技术,检测mIDO修饰... 详细信息

目的:检测吲哚胺2-3双加氧酶(IDO)基因修饰的细胞对T淋巴细胞的免疫抑制作用。方法:将pEGFP-Nl-mIDO真核表达载体转染至小鼠NIH3T3成纤维细胞系。体外检测mIDO修饰的成纤维细胞培养液中色氨酸水平的变化;使用CFSE标记技术,检测mIDO修饰的成纤维细胞培养液对ConA刺激的小鼠T淋巴细胞增殖的影响。结果:将pEGFP-NI-mIDO转入NIH3T3成纤维细胞,流式细胞术(FCM)检测到EGFP的表达;体外实验表明,成纤维细胞培养上清和转染pEGFP-N1的成纤维细胞培养上清可检测到一定量的色氨酸水平,而转染pEGFP-N1-mIDO的成纤维细胞培养上清未检测到色氨酸,提示pEGFP-NI-mIDO转染的成纤维细胞表达了具有活性的mIDO;使用CFSE标记技术,检测mIDO修饰的成纤维细胞培养上清对小鼠T淋巴细胞增殖的影响,发现ConA刺激的IDO组,72h后亲代细胞占各代细胞的百分率明显高于对照组。结论:IDO基因修饰的成纤维细胞可抑制T淋巴细胞的增殖。

关键词： IDO基因 T细胞增殖免疫抑制 CFSE

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人工合成相关寡肽抑制poly I:C诱发性流产的作用

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现代免疫学 2007年第2期27卷 145-150页

作者：仲艳敏林羿李莉平 Nisar Khan 狄静芳曾山 Robbert Benner 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州市第一人民医院妇产科广州510680 荷兰鹿特丹Erasmus医学中心

探讨寡肽蛋-苏-精-缬(MTRV)是否具有抗多聚次黄苷酸-胞苷酸(poly I:C)诱发的小鼠胚胎吸收的作用及其免疫机制。给予异基因妊娠BALB/c×C57BL/6小鼠腹腔注射poly I:C建立胚胎吸收模型;在孕期多个时点腹腔注射MTRV,观察其对胚胎吸收... 详细信息

探讨寡肽蛋-苏-精-缬(MTRV)是否具有抗多聚次黄苷酸-胞苷酸(poly I:C)诱发的小鼠胚胎吸收的作用及其免疫机制。给予异基因妊娠BALB/c×C57BL/6小鼠腹腔注射poly I:C建立胚胎吸收模型;在孕期多个时点腹腔注射MTRV,观察其对胚胎吸收率的影响,并采用四色流式细胞术检测妊娠9.5 d和13.5 d外周血和胎盘各种免疫活性细胞的百分率。结果显示,寡肽MTRV不能显著改变poly I:C所引起的小鼠胎盘多种免疫活性细胞相对数量的增多,但是对poly I:C增高CD45+IL-12+细胞百分率的作用具有显著抑制,并能显著降低poly I:C所引起的孕13.5d胚胎吸收率的增高。寡肽MTRV可调节母-胎界面局部免疫活性细胞的功能状态,从而抑制poly I:C诱发的小鼠胚胎吸收。

关键词：流产免疫调节免疫耐受母-胎界面

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基于声卡声音信号分析仪的设计

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医疗设备信息 2007年第1期22卷 17-18页

作者：曾山陆尧胜王思华刘海燕张茂俊代军弟宋立国暨南大学组织移植免疫中心广东广州510632 暨南大学电子工程系广东广州510632

本文介绍声卡的声音信号分析仪的设计实现方案,重点介绍利用NI公司的LabVIEW软件平台来实现声卡声音信号的采集、分析和回放的方法。

关键词：虚拟仪器 LabVIEW 声音信号分析仪

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基于MATLAB胎儿心电实时显示

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医疗设备信息 2007年第3期22卷 21-22页

作者：曾山陆尧胜代军弟宋立国张茂俊刘海燕暨南大学组织移植免疫中心广东广州510632 暨南大学电子工程系广东广州510632

文章介绍了从母亲体中采集到的心电信号,利用MATLAB软件对采集到的心电信号进行准确的数据实时处理,分离出胎儿心电(ECG)信号,实验结果表明,这种方法有一定的实用性。

关键词： MATLAB 胎儿ECG 实时显示

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早、中、晚孕期胎盘因子对人外周血淋巴细胞CD4、CCR5和CXCR4表达的影响

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免疫学杂志 2007年第4期23卷 409-412页

作者：李莉平林羿康佳丽夏薇王自能广州市第一人民医院妇产科广州510180 暨南大学组织移植与免疫国家重点实验室广州510632 暨南大学第一临床医学院妇产科教研室广州510632

目的通过研究早、中、晚孕期胎盘因子(PF)对人外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4、CCR5和CXCR4表达的作用,探讨PF在人免疫缺陷病-毒1(HIV-1)垂直传播中的作用及其机理。方法制备早、中、晚孕期PF。分离人外周血单个核细胞,并分别与相对浓度为25... 详细信息

目的通过研究早、中、晚孕期胎盘因子(PF)对人外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4、CCR5和CXCR4表达的作用,探讨PF在人免疫缺陷病-毒1(HIV-1)垂直传播中的作用及其机理。方法制备早、中、晚孕期PF。分离人外周血单个核细胞,并分别与相对浓度为25%的早、中、晚孕期PF作用,培养24 h后收集细胞,荧光抗体标记,流式细胞术检测外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4、CCR5和CXCR4表达,以及CD4+T细胞中CCR5+细胞、CXCR4+细胞、CCR5+CXCR4+细胞所占的百分率。结果各孕期PF均可显著降低PBLs中CCR5的表达,其中早孕期PF的作用明显强于中、晚孕期PF的作用;各孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+细胞的百分率均显著低于对照组,早孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+细胞的百分率明显低于中、晚孕期PF组;各孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+CXCR4+细胞的百分率均显著低于对照组,早孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+CX-CR4+细胞的百分率显著低于晚孕期PF组。结论各孕期PF均可显著降低PBLs中CCR5的表达,以及CD4+T细胞中CCR5+细胞和CCR5+CXCR4+细胞的百分率,早孕期PF作用最强,中、晚孕期PF效应相当,PF可能通过抑制R5病毒的入胞而具有抗R5病毒的作用,并可能在阻断HIV-1宫内感染中具有重要作用。

关键词：胎盘因子 HIV-1 垂直传播 CD4 CCR5 CXCR4

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ERK1/2信号通路在Jurkat T细胞增殖调控中的作用

ERK1/2信号通路在Jurkat T细胞增殖调控中的作用

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中国青年科学家论坛暨第四届全国中医药免疫学术研讨会

作者：邢飞跃潘山郝文婷李玉婷樊振华刘娜陈国良陈振珵龙宇天毛成全滕振平 Christian Bronner 方志远郭中峰于哲陈笛陈玲王炯坤暨南大学组织移植与免疫中心，广州 510632 Institut National de la Sante et de la 暨南大学组织移植与免疫中心，广州 510632 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale/Universite Louis Pasteur，Strasbourg，France 67404 暨南大学组织移植与免疫中心，广州 510632

探讨ERK1/2信号通路在Jurkat T细胞增殖调控中的作用。采用共聚焦显微镜和MTT法检测不同浓度PD98059对Jurkat T细胞集落形成和增殖指数的影响，PI染色结合流式细胞术分析不同浓度PD98059对Jurkat T细胞细胞周期的影响。利用不同浓... 详细信息

探讨ERK1/2信号通路在Jurkat T细胞增殖调控中的作用。采用共聚焦显微镜和MTT法检测不同浓度PD98059对Jurkat T细胞集落形成和增殖指数的影响，PI染色结合流式细胞术分析不同浓度PD98059对Jurkat T细胞细胞周期的影响。利用不同浓度、不同信号通路特异性阻断剂LY294002、AG490、GF109203X和Genistein以及LY294002联合AG490处理Jurkat T细胞，观察它们对Jurkat T细胞集落形成和增殖指数的影响。选用最佳浓度PD98059、LY294002、AG490、GF109203X和Genistein，通过Western Blot检测它们对Jurkat T细胞中ERK1/2、P-ERK1/2和反向CCAAT盒结合蛋白(ICBP90)不同时间表达的影响。结果显示，PD98059可显著抑制Jurkat T细胞的增殖，呈剂量依赖关系。PD98059可使Jurkat T细胞停滞于G1/G0期，并阻止其进入S期和G2/M期。不同浓度各阻断剂对Jurkat T细胞的集落形成和增殖指数也具有不同的抑制作用，且呈剂量依赖关系。PD98059作用3 h可部分下调ERK1/2的表达，而其它阻断剂对ERK1/2的表达均无影响。PD98059、LY294002作用3 h可明显下调P-ERK1/2的表达，LY294002+AG490、AG490、GF109203X和Genistein也可使P-ERK1/2的表达不同程度下调，各阻断剂作用3 h均能上调Jurkat T细胞中ICBP90蛋白的表达，并以PD98059最为突出;而在24 h这种上调作用更为明显。这些结果提示阻断ERK1/2信号通路可显著抑制Jurkat T细胞的增殖，这种抑制作用与其使Jurkat T细胞停滞于G1/G0期，阻止细胞进入S期和G2/M期有关;PI-3K、TPK、PKC和JAK信号通路可能与ERK1/2信号通路上游关联，ERK1/2信号通路的下游可能通过ICBP90所介导。

关键词： ERK1/2 细胞增殖调控细胞周期共聚焦显微镜信号通路

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