检索结果-内蒙古大学图书馆

现代免疫学 2007年第2期27卷 125-128页

作者：李莉平林羿康佳丽夏薇王自能广州市第一人民医院妇产科广州510180 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学第一临床医学院妇产科教研室广州510632

通过晚孕期胎盘因子(PF)对小鼠淋巴细胞体外增殖的作用,探讨PF对正常机体免疫系统和免疫功能的效应。分离小鼠淋巴细胞,用ConA刺激其增殖,并分别与晚孕期不同浓度的PF作用,于48 h和72 h用活体染料羧基荧光素乙酰乙琥珀酰亚胺酯(CFSE)标... 详细信息

通过晚孕期胎盘因子(PF)对小鼠淋巴细胞体外增殖的作用,探讨PF对正常机体免疫系统和免疫功能的效应。分离小鼠淋巴细胞,用ConA刺激其增殖,并分别与晚孕期不同浓度的PF作用,于48 h和72 h用活体染料羧基荧光素乙酰乙琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,流式细胞术检测增殖。于48 h碘化丙啶染色,流式细胞术检测细胞周期分布。结果显示,晚孕期PF在48 h和72 h时间点均能显著促进ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应,且效应与剂量呈正相关。晚孕期各浓度PF组G0期所占比率均显著低于对照组,且浓度越大,比率越低,组间两两比较有统计学意义。各浓度PF组S期所占比率均显著高于对照组,各浓度PF组G2/M期所占比率均显著高于对照组,25%PF组G2/M期所占比率均显著高于5%PF组和15%PF组。晚孕期PF通过促进小鼠淋巴细胞由G1期向S和G2/M期而促进ConA刺激小鼠淋巴细胞的增殖反应,提示PF具有免疫调节的功能,可以提高机体的免疫功能。

关键词：胎盘因子人免疫缺陷病毒 CFSE 淋巴细胞增殖细胞周期分布

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非孕与早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织自然杀伤细胞亚群的变化

非孕与早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织自然杀伤细胞亚群的变化

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第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会

作者：侯倩曾耀英王自能江西省妇幼保健院辅助生殖中心暨南大学组织移植与免疫中心

目的:探讨非孕与早孕妇女的外周血、宫内膜和蜕膜组织之间的自然杀伤（NK）细胞亚群的差异,以及雌、孕激素对外周血、宫内膜和蜕膜组织 NK 细胞的影响。方法:用流式细胞仪检测非孕和早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织 NK 细胞表面标记 C... 详细信息

目的:探讨非孕与早孕妇女的外周血、宫内膜和蜕膜组织之间的自然杀伤（NK）细胞亚群的差异,以及雌、孕激素对外周血、宫内膜和蜕膜组织 NK 细胞的影响。方法:用流式细胞仪检测非孕和早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织 NK 细胞表面标记 CD56和 CD16分子,以及用放射免疫沉淀法测定外周血清雌二醇（E）和孕酮（P）水平,并进行比较分析。结果:早孕外周血组 NK 细胞的 CD56CD16、CD56CD16和 CD56CD16三组亚群的百分率均明显高于非孕外周血组（分别为 P≤0.013,P<0.001,P≤0.001）;非孕宫内膜组的 NK 细胞以 CD56为主,为20.82%,且其 CD56CD16的百分率明显高于其外周血组,而其 CD56CD16的百分率明显小于外周血组（P<0.001）,二组的 CD56CD16的百分率无差异（P>0.05）;非孕宫内膜组 CD56CD16的百分率明显高于 CD56CD16和 CD56CD16（均为 P<0.001）,而非孕外周血组的 NK 细胞以 CD16为主, 且其 CD56CD16的百分率明显高于 CD56CD16和 CD56CD16（均为 P<0.001）。早孕蜕膜组的 NK 细胞以 CD56为优势,为62.42%;早孕蜕膜组 NK 细胞的 CD56CD16、CD56CD16和 CD56CD16三组亚群的百分率均明显高于非孕宫内膜组（均为 P<0.001）;而早孕周围血中的 NK 细胞以 CD56CD16和 CD16为主,分别为9.93%和10.65%,且与 CD56CD16比较均有显著性差异（均为 P<0.001）;早孕外周血组 CD16NK 细胞的百分率明显高于蜕膜组（P≤0.001）,且二组的 CD56CD16的百分率无差异（P>0.05）。结论:孕激素能明显促进宫内膜 CD56NK 细胞的增殖和分化,雌、孕激素水平的协同升高可增加外周血和宫内膜组织的 CD56、CD56CD16、和 CD16NK 细胞亚群的百分率;CD56CD16NK 细胞在在早孕外周血和蜕膜组织之间,以及在非孕外周血和宫内膜组织之间均可能起免疫调控作用。

关键词：宫内膜蜕膜外周血自然杀伤细胞雌激素孕酮

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从孕妇外周血分离胎儿细胞及胎儿游离的DNA作无创性产前遗传诊断的研究

从孕妇外周血分离胎儿细胞及胎儿游离的DNA作无创性产前遗传诊断...

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作者：黄艳仪曾耀英陈小蔓吴菁孙荭孔舒孙筱放黎青葛琪冯铮陈小兵佘若菁广州市第二人民医院暨南大学组织移植与免疫中心

第一部分研究成果主要归纳三点：①建立了从孕妇外周血中分离胎儿细胞的细胞分离技术，提高了从孕妇外周血中分离胎儿细胞的精确度；②成功的应用免疫磁珠细胞分离仪从孕妇外周血中富集胎儿细胞，该研究成果使孕妇外周血分离胎儿细胞技... 详细信息

标准号: 0701950159

第一部分研究成果主要归纳三点：①建立了从孕妇外周血中分离胎儿细胞的细胞分离技术，提高了从孕妇外周血中分离胎儿细胞的精确度；②成功的应用免疫磁珠细胞分离仪从孕妇外周血中富集胎儿细胞，该研究成果使孕妇外周血分离胎儿细胞技术能更广泛的应用于临床，推动了无创性产前诊断方法的开展；③孕妇外周血中经磁珠分离的胎儿细胞进行遗传学诊断，应用于临床对患X-性连锁遗传病孕妇胎儿进行性别诊断。该研究成果处于全国先进水平，在全国率先应用磁珠分离仪从孕妇外周血富集胎儿细胞，并进行遗传产前诊断。(1)建立了孕妇外周血分离胎儿细胞的细胞的分离技术，提出应用转铁蛋白受体CD71阳性选择+糖蛋白A双抗抗体和CD45阴性选择(CD71++GPA+/CD45-)多参数细胞分离能提高从孕妇外周血分离胎儿细胞的精确度。(2)成功的应用免疫磁珠细胞分离仪从孕妇外周血分离胎儿细胞。(3)建立经磁珠分离的胎儿细胞荧光原位杂交(FISH)技术作染色体检查，并用于X-性连锁遗传病产前诊断。(4)成功的应用酚提取法提取孕妇血浆中胎儿游离DNA，应用巢式PCR技术确定男性胎儿SRY基因，并用此法对X-性连锁遗传病家庭史的患者进行产前诊断。(5)成功地应用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测母体血浆中的胎儿DNA，该研究证实SRY基因作为睾丸决定因子具有很高的特异性，并得出早、中、晚期不同孕周胎儿SRY基因DNA的量与总的DNA的量，该成果可用于无创性产前诊断开辟了新的途径。第二部分研究成果包括：1.证实母体血浆中存在胎儿DNA，且含量较高，其浓度随着孕周的增长而增加；2.荧光定量PCR用于检测母体血浆胎儿游离DNA均有较高的敏感性和特异性，而荧光定量PCR更具有优越性；3.该研究证实SRY基因作为睾丸决定因子具有很高的特异性，可用于产前胎儿性别诊断，并作为检测胎儿DNA的重要标志物。4.该研究成果成功的建立孕妇血浆中胎儿游离DNA的提取技术，应用先进的分子生物学技术、DNA的定性、荧光定量检测技术，通过孕妇血中胎儿SRY基因的检测，可对X-性连锁遗传病孕妇胎儿作出性别判断，应用于临床；5.应用孕妇血浆中的胎儿游离DNA进行产前诊断，为非侵入性产前遗传诊断开辟了新的途径，有非常广泛的应用前景和非常重要的临床意义。

关键词：产前遗传诊断孕妇外周血胎儿细胞分离染色体检查

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寡肽丙-谷胺-甘-缬抑制多聚次黄苷酸-胞苷酸所致流产的作用

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中华围产医学杂志 2007年第5期10卷 312-317页

作者：林羿仲艳敏王自能 Nisar Khan 李莉平 Robbert Benner 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 暨南大学第一临床学院妇产科荷兰鹿特丹Erasmus医学中心广州市第一人民医院妇产科

目的探讨人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，hCG）来源的寡肽丙-谷胺-甘-缬（Ala—Gln—Gly-Val，AQGV）是否具有抗poly I：C诱导的小鼠胚胎吸收的作用及其可能的免疫机制。方法给予异基因妊娠的BALB／c小鼠腹腔注... 详细信息

目的探讨人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，hCG）来源的寡肽丙-谷胺-甘-缬（Ala—Gln—Gly-Val，AQGV）是否具有抗poly I：C诱导的小鼠胚胎吸收的作用及其可能的免疫机制。方法给予异基因妊娠的BALB／c小鼠腹腔注射多聚次黄苷酸-胞苷酸（poly I：C）建立胚胎吸收模型，注射磷酸盐缓冲液组作为对照，观察孕期多次注射AQGV对胚胎吸收率的影响，并采用流式细胞术检测孕9．5d和13．5d胎盘和外周血中免疫活性细胞，包括T细胞、NK细胞、NKT细胞、B细胞和巨噬细胞等的百分率，以及早期活化标志CD25、共刺激分子CD86和细胞内细胞因子IL-12水平。结果孕9．5d时AQGV组胎盘中巨噬细胞和B细胞所占比率和CD45^＋细胞内IL-12水平显著低于流产模型组；孕13．5d时除上述变化外，AQGV组胎盘中T细胞所占比率显著低于流产模型组；孕9．5d时AQGV组外周血CD45^＋细胞内IL-12水平明显低于流产模型组；孕13．5d时外周血NK细胞、巨噬细胞、B细胞所占百分率和CD45^＋细胞内IL-12水平明显低于流产模型组。与此相应，AQGV组孕9．5d和13．5d胚胎吸收率也显著下降。结论 AQGV可降低胎盘局部和外周血免疫活性细胞的构成比和抑制免疫反应向Th1型转化，从而抑制poly I：C诱导的小鼠胚胎吸收。

关键词：流产,自然动物模型寡肽类免疫耐受

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脂质体介导pIDO-EGFP转染原代培养软骨细胞的初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1110-1112,1116页

作者：段小红何贤辉崔鹏程王晓燕吴明明史剑波许庚江逊第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科陕西西安710038 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 第四军医大学口腔医学院陕西西安710036 中山大学附属第一医院耳鼻咽喉科医院广东广州510080 第四军医大学唐都医院小儿科陕西西安710038

目的:检测脂质体介导pIDO-EGFP转染原代培养的C57小鼠关节软骨细胞的瞬时表达及转染效率,建立原代培养的小鼠关节软骨细胞转染方法。方法:大肠杆菌中扩增pIDO-EGFP质粒,在最优化条件下通过lipofectamine2000TM转染试剂将pIDO-EGFP质粒... 详细信息

目的:检测脂质体介导pIDO-EGFP转染原代培养的C57小鼠关节软骨细胞的瞬时表达及转染效率,建立原代培养的小鼠关节软骨细胞转染方法。方法:大肠杆菌中扩增pIDO-EGFP质粒,在最优化条件下通过lipofectamine2000TM转染试剂将pIDO-EGFP质粒转入原代培养的小鼠关节软骨细胞,应用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其转染过程及瞬时表达情况,流式细胞术检测其转染效率。结果:质粒携带的增强型绿色荧光蛋白在转染后24h得到了明显表达,48h后流式细胞术检测其转染效率为36.43%,未影响软骨细胞贴壁过程。结论:经绿色荧光蛋白检测表明,脂质体成功地将IDO基因转染进入原代培养的软骨细胞。转染后的软骨细胞在体外仍能存活,在最优化的条件下能达到良好的瞬时转染效率,为组织工程化软骨细胞基因导入和基因修饰提供了思路。

关键词：基因转染软骨细胞基因表达吲哚胺2 3-双加氧酶绿色荧光蛋白

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实时定量PCR评价小鼠胸腺功能方法的建立

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南方医科大学学报 2006年第1期26卷 62-65页

作者：张华华曾耀英何贤辉刑飞跃暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的建立实时定量PCR检测小鼠胸腺及脾脏T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环(sjTRECs)水平的方法,推测其中的初始T细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细... 详细信息

目的建立实时定量PCR检测小鼠胸腺及脾脏T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环(sjTRECs)水平的方法,推测其中的初始T细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增目的片段。纯化构建标准质粒的RAG2片段,构建标准重组质粒并鉴定。优化PCR体系后,实时定量PCR反应建立标准曲线,并检测不同品系(BALB／c和C57BL／6)成年小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞sjTRECs含量。结果成功构建标准质粒。确定最适实时定量PCR反应条件后,在实时定量PCR中建立可信度高的标准曲线。建立的方法分析表明,这两个不同品系的sjTRECs含量统计学差异不显著。结论成功建立定量检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量从而推测其中的初始T细胞数目的方法,为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。

关键词：实时定量PCR T细胞受体删除环幼稚T细胞

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TLR3参与poly(I-C)所致流产的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第7期26卷 623-626页

作者：林羿曾耀英曾山冯铮狄静芳暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632

目的研究Toll样受体3(toll-like receptor 3,TLR3)在poly(I-C)诱发小鼠流产中的潜在作用。方法多聚次黄苷酸-胞苷酸[polyinosinic-polycytidync acid,poly(I-C)]是一种双链RNA,腹腔注射时能够诱发小鼠流产。在预先用单抗阻断或不阻断TLR3情况下,注射poly(I-C)建立小鼠诱发性流产模型,应用流式细胞术分别检测CD45+DX5+和DX5+CD69+细胞百分率。结果不用抗TLR3抗体预处理,单用poly(I-C)刺激同种异基因交配模型BALB/c×C57BL/6,可使CD45+DX5+和DX5+CD69+细胞百分率均显著升高。但是,应用抗TLR3抗体预处理的雌鼠,用poly(I-C)刺激时上述百分率不改变。与此相应,poly(I—C)刺激可显著增高胚胎吸收率,而抗TLR3抗体预处理可消除这种作用。结论poly(I-C)与TLR3结合可能对母-胎界面NK细胞活化至关重要,并可促进小鼠胚胎吸收。

关键词：流产动物模型细胞表面标志物妊娠耐受生殖免疫学

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p38对放线菌酮经线粒体途径诱导HL-60细胞死亡的影响

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中华血液学杂志 2006年第6期27卷 398-402页

作者：梁佩燕曾耀英王通邢飞跃肇静娴江逊狄静芳暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632

目的研究 p38对放线菌酮(CHX)经线粒体途径诱导 HL-60细胞死亡的影响。方法利用 p38持异性阻断剂 SB203580(SB)阻断 HL-60细胞 p38途径,分别设对照组、单纯 SB 组、CHX组和 CHX 联合 SB 组;于处理6,9,12,18,24 h 利用碘化丙锭(PI)染色... 详细信息

目的研究 p38对放线菌酮(CHX)经线粒体途径诱导 HL-60细胞死亡的影响。方法利用 p38持异性阻断剂 SB203580(SB)阻断 HL-60细胞 p38途径,分别设对照组、单纯 SB 组、CHX组和 CHX 联合 SB 组;于处理6,9,12,18,24 h 利用碘化丙锭(PI)染色流式细胞术检测亚二倍体峰细胞比率;于处理6和18 h 进行膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)/PI 双标流式细胞术测定凋亡和坏死细胞比率;于处理18 h 利用 JC-1染色流式细胞术分析,通过对 FL2的划分比较不同处理时间高 JC-1集合体量细胞比率;测定细胞 JC-1集合体(FL2)和 JC-1单体(FL1)平均荧光强度,并计算线粒体膜电势(△Ψ_m,FL2/FL1)。结果在 CHX 处理6 h HL-60细胞亚二倍体峰细胞比率显著高于对照组,在此过程中阻断 p38途径则在处理9 h 开始亚二倍体峰细胞比率显著高于 CHX 组。处理18 h 凋亡细胞比率:CHX组[(27.9±0.52)%]和 CHX 联合 SB 组[(28.54±1.38)%]均显著高于对照组[(2.45±0.65)%](P<0.01);CHX 联合 SB 组与 CHX 组比较差异无统计学意义(P>0.05)。处理18 h 坏死细胞比率:CHX 组和 CHX 联合 SB 组均显著高于对照组(P<0.01);CHX 联合 SB 组显著高于 CHX 组(P<0.01)。此外,CHX 组和 CHX 联合 SB 组高 JC-1集合体细胞比率均显著低于对照组(P<0.01),CHX联合 SB 组高 JC-1集合体细胞比率显著低于 CHX 组(P<0.01)。处理18 h 时各实验组△Ψ_m CHX 组(0.17+0.01)和 CHX 联合 SB 组(0.05±0.003)均显著低于对照组(0.38±0.02)(P<0.01),CHX 联合 SB 组△Ψ_m 显著低于 CHX 组(P<0.01)。结论 CHX 可诱导 HL-60细胞凋亡和线粒体去极化,在该过程中阻断 p38途径可使线粒体的去极化作用增强,本模型中 p38途径可能与 HL-60细胞的坏死密切相关。

关键词：放线菌酮细胞系,HL-60 细胞凋亡膜电位,线粒体有丝分裂素激活蛋白激酶类

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ERK7的结构性活化与功能

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第12期22卷 935-941页

作者：陈玲邢飞跃暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

ERK7是细胞外信号调节激酶家族中的新成员.尽管ERK7激酶的活化环上含有ERK家族成员共有的TEY基序,但是在活化上与其它ERK家族成员截然不同,ERK7无需典型活化ERK的细胞外刺激或JNK和p38激酶活化物而发生自磷酸化并足以使其在缺乏上游激... 详细信息

ERK7是细胞外信号调节激酶家族中的新成员.尽管ERK7激酶的活化环上含有ERK家族成员共有的TEY基序,但是在活化上与其它ERK家族成员截然不同,ERK7无需典型活化ERK的细胞外刺激或JNK和p38激酶活化物而发生自磷酸化并足以使其在缺乏上游激酶时发生活化,且发现ERK7中非激酶结构域的C端区域调节其结构性活化、核定位、生长抑制.此外,N端的20个氨基酸作为ERK7降解的首要决定因素调节ERK7的表达.新近研究表明ERK7与乳腺肿瘤、神经元分化、胚胎发生密切相关.本文就ERK7的结构特性活化、调控及功能等作了综述.

关键词：细胞外信号调节激酶7 自磷酸化信号通路生长抑制

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可溶性三聚化CD40-异亮氨酸拉链融合蛋白的制备及鉴定

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生物工程学报 2006年第3期22卷 477-482页

作者：徐丽慧刘毅何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

以克隆的CD40cDNA为模板,经多步PCR构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6标签的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表达载体,在大肠杆菌中获得高效表达,分子量为27kD,与理论大小相符,表达产物主要存在于... 详细信息

以克隆的CD40cDNA为模板,经多步PCR构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6标签的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表达载体,在大肠杆菌中获得高效表达,分子量为27kD,与理论大小相符,表达产物主要存在于包涵体中,对包涵体蛋白进行稀释复性和纯化得到可溶性的sCD40IZ重组蛋白,该蛋白在溶液中的分子量为91kD,表明最有可能以三聚体形式存在。活性分析显示该蛋白能够与细胞上的CD40L结合,并且其结合活性与不含IZ基序的可溶性CD40相比明显提高。这些结果表明,在可溶性CD40羧基端融合IZ基序能够促进形成三聚体,并且具有增强的配基结合活性。

关键词： CD40,三聚化,异亮氨酸拉链,原核表达,包涵体复性

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