检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2006年第4期22卷 638-641页

作者：李海仙曾耀英曾祥凤肇静娴李孝建王通暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:体外研究脐血和外周血单个核细胞(CBMC和PBMC)培养上清对HIV-1感染的影响,为发现抗HIV-1的可溶性因子奠定基础。方法:PHA刺激CBMC和PBMC后5h和12h收集上清,加入荧光标记的HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞培养体系中,2h后在倒置荧光显微镜下... 详细信息

目的:体外研究脐血和外周血单个核细胞(CBMC和PBMC)培养上清对HIV-1感染的影响,为发现抗HIV-1的可溶性因子奠定基础。方法:PHA刺激CBMC和PBMC后5h和12h收集上清,加入荧光标记的HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞培养体系中,2h后在倒置荧光显微镜下观察其对细胞融合的影响;用Luminex100TM分析仪检测收集上清中细胞因子含量。结果:PHA刺激CBMC和PBMC后5h和12h的上清均可抑制HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞融合,同一时间收集的PBMC和CBMC上清对HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞融合的抑制作用无差异,但5h上清的抑制作用强于12h的上清;CBMC5h上清中促炎症细胞因子比PBMC5h上清为低,而CCR5配体MIP-1α和RANTES则比PBMC5h上清高,差异显著(P<0·05)。结论:通过脐血和外周血单个核细胞可以制备有效抗HIV感染的可溶性因子,可能为艾滋病治疗药物提供新的来源。

关键词：胎血单核细胞细胞因子类 HIV-1

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佛波醇酯加离子霉素诱导脐血和成人外周血CD4^+CD25^+ T细胞分泌IL-2的相关机制研究

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中国病理生理杂志 2006年第6期22卷 1133-1137页

作者：肇静娴曾耀英李海仙曾祥凤季煜华何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510630

目的:以佛波醇酯加离子霉素作为刺激剂,验证CD4+CD25+调节性T细胞本身并不存在分泌IL-2障碍;同时通过对脐血和成人外周血的比较性研究,了解脐血CD4+CD25+T细胞的成熟度。方法:以autoMACS从足月婴儿脐血(CB)和成人外周血(PB)分选CD4+CD25... 详细信息

目的:以佛波醇酯加离子霉素作为刺激剂,验证CD4+CD25+调节性T细胞本身并不存在分泌IL-2障碍;同时通过对脐血和成人外周血的比较性研究,了解脐血CD4+CD25+T细胞的成熟度。方法:以autoMACS从足月婴儿脐血(CB)和成人外周血(PB)分选CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞,以PDB+ionomycin作为刺激剂,培养45h后流式细胞术检测各组细胞表达CD69和CD25水平,并以Luminex多重细胞因子检测技术检测培养上清中7种细胞因子的浓度。结果:经PDB+ionomycin刺激后,CB、PB的CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞均发生增殖,但在培养45h后CD4+CD25+T细胞均出现细胞状态变差或死亡倾向。CB、PB的CD4+CD25+T细胞活化后CD25分子表达进一步上调,高于CD25-细胞活化后的CD25分子密度。经PDB+ionomycin刺激后,PB CD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞均分泌高水平的IFN-γ、IL-2和TNF-α,但CD25+细胞分泌IL-5、IL-4和IL-10水平远远高于CD25-细胞;CBCD4+CD25+和CD4+CD25-T细胞亦分泌高水平的IL-2和TNF-α,但IFN-γ水平远远低于PB,基本不分泌IL-5、IL-4和IL-10。结论:CD4+CD25+T细胞本身并不存在合成和分泌IL-2障碍,其可能具有与传统T细胞不同的T细胞受体信息转导模式;脐血CD4+CD25+T细胞功能尚未完全成熟。

关键词： CD4^+CD25^+T细胞佛波醇酯类白细胞介素2 胎血离子霉素

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地塞米松诱导小鼠胸腺细胞线粒体去极化与凋亡进程研究

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免疫学杂志 2006年第1期22卷 54-57页

作者：王通曾耀英邢飞跃梁佩燕肇静娴何贤辉暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广州510630

目的研究地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡进程中线粒体去极化作用特点。方法无菌获取Balb/c小鼠胸腺细胞,设对照组和DEX组;在5 h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;利用DiOC6(3)/PI双染流式细胞术检测细胞线粒... 详细信息

目的研究地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡进程中线粒体去极化作用特点。方法无菌获取Balb/c小鼠胸腺细胞,设对照组和DEX组;在5 h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;利用DiOC6(3)/PI双染流式细胞术检测细胞线粒体去极化与死亡;利用DiOC6(3)/Annexin V-PE双染流式细胞术检测凋亡过程中的去极化现象。结果在1×10-6mol/L DEX诱导下,小鼠胸腺细胞在5 h凋亡百分率为(36.20±5.11)%,对照组为(4.10±0.98)%,差异显著(P<0.01);DEX组坏死百分率为(4.07±0.24)%,对照组为(1.25±0.25)%,差异显著(P<0.01)。DEX组线粒体去极化增强仍存活的细胞所占百分率为(46.77±6.21)%,显著高于对照组的(12.80±4.55)%(P<0.01)。DEX组线粒体去极化增强且已启动凋亡的细胞为(35.34±4.19)%,显著高于对照组的(7.21±0.61)%(P<0.01)。DEX组线粒体去极化作用增强未凋亡的细胞为(13.68±1.27)%,显著高于对照组的(6.85±0.92)%(P<0.01)。结论DEX诱导小鼠胸腺细胞发生典型细胞凋亡和线粒体去极化增强,在该进程中,线粒体去极化增强发生在细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻之前。

关键词：地塞米松小鼠胸腺细胞去极化凋亡进程线粒体

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表皮生长因子对传代培养的大鼠生长板软骨细胞增殖与胶原合成的影响

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中国病理生理杂志 2006年第3期22卷 592-596页

作者：季煜华曾耀英俞瑜暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨不同浓度的表皮生长因子(EGF)对传代培养的大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)增殖和胶原合成的影响。方法:分离、培养RGC,分别用Westernblot和阿尔新蓝(Alcineblue)染色检测各代RGC中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达;用[3H]-TdR和[3H]-prol... 详细信息

目的:探讨不同浓度的表皮生长因子(EGF)对传代培养的大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)增殖和胶原合成的影响。方法:分离、培养RGC,分别用Westernblot和阿尔新蓝(Alcineblue)染色检测各代RGC中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达;用[3H]-TdR和[3H]-proline掺入分别检测1、10和100μg/LEGF对第1、3和5代RGC增殖和胶原合成的影响。结果:原代培养的RGC表达Ⅱ型胶原和蛋白多糖,从第4代起Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达迅速降低,RGC发生了去分化。[3H]-TdR掺入表明,EGF促进第1代RGC的增殖(P<0.01),3个浓度的作用依次为:1μg/L>10μg/L>100μg/L,差异显著(P<0.01);3个浓度的EGF对第3代RGC保持了相近的促增殖作用(P<0.01);对第5代RGC均无促增殖作用(P>0.05)。与促增殖作用不同,不同浓度EGF促不同传代的RGC的[3H]-proline掺入率比对照组均高20%左右(P<0.01)。结论:EGF具有促进培养RGC增殖和胶原合成的作用,连续传代引起的去分化降低了RGC对EGF促增殖作用的反应,但对EGF的促胶原合成作用没有产生影响。

关键词：软骨细胞生长面表皮生长因子胶原

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Bcr/abl同靶点小干扰RNA与反义寡核苷酸对K562细胞的作用比较

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广东医学 2006年第1期27卷 40-42页

作者：史金桃蒋建伟曾慧兰汪卓赟王芳狄静芳暨南大学医学院生化教研室广州510632 暨南大学附属第一医院血液科广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

目的比较靶向Bcr/abl基因b3a2融合位点的小干扰RNA(small interferon RNA,SiRNA)及作用靶点完全相同的反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人白血病K562细胞的增殖抑制作用,并联用三氧化二砷(AS2O3),比较二者对K562细胞化疗增敏作用。方法体外转录方法合成Bcr/ablb3a2融合位点SiRNA,lipofectamineTM2000转染,改良MTT法检测药物对K562细胞增殖的抑制作用。结果SiRNA和相同作用靶点的A-SODN均显示出明显的细胞增殖抑制效应,SiRNA抑制K562细胞的IC50为97.47 nmol/L,ASODN抑制K562细胞的IC50为10.71μmol/L;50 nmol/L SiRNA与AS2O3联用后,明显提高K562细胞对AS2O3的敏感性,相同浓度的ASODN对细胞无明显化疗增敏作用。结论本实验结果提示针对Bcr/abl基因融合位点设计的极低浓度的SiRNA即能显著抑制K562细胞增殖,提高细胞对化疗药物的敏感性,其效果明显强于同靶位点的ASODN,显示了RNAi技术应用于慢性髓系白血病的良好前景。

关键词： Bcr/abl SiRNA 反义寡核苷酸慢性髓系白血病

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复杂性人工晶体眼裂孔性视网膜脱离玻璃体切除术的疗效

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中山大学学报（医学科学版） 2006年第4期27卷 459-462页

作者：邹秀兰赖铭莹曾祥凤暨南大学第一附属医院眼科广东广州510630 暨南大学附属深圳眼科中心广东深圳518001 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

【目的】探讨复杂性人工晶体眼裂孔性视网膜脱离(PRRD)玻璃体切除术的疗效及其并发症。【方法】106例资料完整,随访6个月以上的复杂性PRRD且行玻璃体切除作为首选手术的患者被回顾。其中,27例术前检查未发现裂孔,26例曾行Nd:YAG后囊膜... 详细信息

【目的】探讨复杂性人工晶体眼裂孔性视网膜脱离(PRRD)玻璃体切除术的疗效及其并发症。【方法】106例资料完整,随访6个月以上的复杂性PRRD且行玻璃体切除作为首选手术的患者被回顾。其中,27例术前检查未发现裂孔,26例曾行Nd:YAG后囊膜切开术。【结果】术后视网膜首次和最终复位率分别是72.6%(77/106)和98.1%(104/106)。术后59.4%(63/106)的患者术后视力>0.3,仅15.1%(16/106)<0.1,与术前视力(>0.3者仅34%,<0.1则50%)相比具有显著性差异(χ2=23.31,P<0.001)。手术并发症主要是术中医源性裂孔(6.6%);术后增殖性玻璃体视网膜病变(14.2%)和黄斑前膜(23.6%)。【结论】玻璃体切除治疗复杂性PRRD能取得较好的解剖和功能效果,但应尽量避免医源性裂孔等手术并发症的发生。

关键词：人工晶体眼玻璃体切除术裂孔性视网膜脱离增殖性玻璃体视网膜病变

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喜树碱诱导Jurkat细胞线粒体膜电势和线粒体质量变化的研究

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中国病理生理杂志 2006年第5期22卷 846-850页

作者：江颖娟曾耀英王通肇静娴刑飞跃王希朝梁佩燕暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

目的:研究喜树碱(camptothecin,CPT)诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体膜电势和线粒体质量的变化。方法:用喜树碱处理Jurkat细胞,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞早期凋亡,PI染色流式细胞术测细胞周期,Annexin V-PE/DiOC6(3... 详细信息

目的:研究喜树碱(camptothecin,CPT)诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体膜电势和线粒体质量的变化。方法:用喜树碱处理Jurkat细胞,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞早期凋亡,PI染色流式细胞术测细胞周期,Annexin V-PE/DiOC6(3)双染流式细胞术检测线粒体膜电势(△ψm),NAO染色流式细胞术检测线粒体质量。结果:在10μmol.L-1CPT诱导下,6 h时Jurkat细胞早期凋亡的细胞比率(22.59±1.04)%显著高于对照组(3.93±0.73)%(P<0.01)。CPT组坏死比率(2.48±0.53)%与对照组(2.78±0.63)%无显著差异(P>0.05);并可使细胞出现明显的凋亡峰。晚期凋亡的细胞比率为(13.58±0.97)%显著高于对照组(3.18±0.51)%(P<0.01),CPT组G0/G1期细胞比率(48.14±0.96)%,明显高于对照组(44.09±0.43)%(P<0.01)。CPT组线粒体发生明显去极化现象,AnnexinV+DiOC6(3)-的细胞比率为(19.47±0.69)%,而对照组比率为(4.21±0.40)%,差异显著(P<0.01)。同时,CPT组线粒体质量显著低于对照组:CPT组NAO+细胞比率为(74.77±1.66)%,对照组为(92.24±1.41)%(P<0.01)。结论:CPT诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体去极化作用增强并且线粒体质量下降,表明该凋亡过程与线粒体途径密切相关。

关键词：喜树碱 Jurkat细胞线粒体膜电位细胞凋亡

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阻断ERK途径对地塞米松诱导胸腺细胞凋亡中线粒体膜电势的影响

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中国病理生理杂志 2006年第4期22卷 625-629页

作者：王通曾耀英梁佩燕邢飞跃罗文亭江逊暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

目的:研究阻断ERK途径对地塞米松(DEX)诱导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电势的影响。方法:利用PD098059(PD)阻断小鼠胸腺细胞ERK途径,分别设对照组(control)、单纯PD组(PD only)、DEX组和PD+DEX组;在3h、5h和7h时点,利用Annexin V-FITC/PI... 详细信息

目的:研究阻断ERK途径对地塞米松(DEX)诱导的胸腺细胞凋亡中线粒体膜电势的影响。方法:利用PD098059(PD)阻断小鼠胸腺细胞ERK途径,分别设对照组(control)、单纯PD组(PD only)、DEX组和PD+DEX组;在3h、5h和7h时点,利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;在3h、7h和11h,利用JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电势(△ψm)变化。结果:在1μmol·L-1DEX刺激下,小鼠胸腺细胞在3h、5h和7h凋亡率分别为(19·63±0·35)%、(41·84±1·67)%和(67·00±2·43)%,对照组分别为(4·98±0·39)%、(6·08±0·33)%和(9·31±0·34)%,差异显著(P<0·01);相同时点下,PD only组细胞凋亡率分别为(7·95±0·60)%、(10·69±0·48)%和(22·20±1·24)%,显著高于对照组(P<0·01);PD+DEX组在3h和5h时点细胞凋亡率显著高于DEX组(P<0·01),而在7h时点,两组差异不显著(P>0·05)。在3h、7h和11h,DEX组△ψm降低的细胞比率分别为(21·23±1·43)%、(55·34±1·78)%和(70·88±2·87)%,对照组分别为(5·25±1·22)%、(8·01±0·97)%和(12·88±1·10)%,差异显著(P<0·01);相同时点下,PD only组△ψm降低的细胞比率分别为(11·09±2·00)%、(16·21±2·25)%和(21·15±3·70)%,显著高于对照组(P<0·01);PD+DEX组在3h和5h时点细胞凋亡率显著高于DEX组,分别为(30·55±2·99)%和(65·22±4·32)%(P<0·01),11h时点两组差异不显著(P>0·05)。结论:DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡至少部分通过ERK途径,阻断ERK途径在该凋亡过程中具有重要生物学意义。

关键词：地塞米松胸腺细胞细胞凋亡线粒体有丝分裂素激活蛋白激酶类

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紫外线对角质细胞线粒体功能及凋亡的影响研究

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中国病理生理杂志 2006年第5期22卷 1020-1023页

作者：王会营曾耀英王通邢飞跃肇静娴季煜华暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

目的:分析紫外线(UV)照射对HaCaT角质细胞系线粒体功能及凋亡的影响。方法:以紫外线低剂量(UVA2J/cm2,UVB10mJ/cm2)和高剂量(UVA6J/cm2,UVB30mJ/cm2)照射HaCaT细胞,继续培养15 h,用流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm)、线粒体质量(mitoc... 详细信息

目的:分析紫外线(UV)照射对HaCaT角质细胞系线粒体功能及凋亡的影响。方法:以紫外线低剂量(UVA2J/cm2,UVB10mJ/cm2)和高剂量(UVA6J/cm2,UVB30mJ/cm2)照射HaCaT细胞,继续培养15 h,用流式细胞仪检测线粒体膜电位(△ψm)、线粒体质量(mitochondrial mass);使用碘化丙啶(PI)进行DNA染色并用流式细胞仪检测亚二倍体分析凋亡,以及进行Annexin V-FITC与PI共染色,用激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况。结果:HaCaT细胞经紫外线照射后,△ψm下降的细胞比例随着照射剂量的增加而增加,对照组、低剂量组及高剂量组分别为7.94%±1.02%、25.87%±4.55%、39.27%±5.32%;线粒体质量降低的细胞比例同样随着照射剂量的增加而增加,对照组、低剂量组以及高剂量组分别为15.19%±1.58%、40.36%±4.41%、68.79%±5.46%。用PI检测DNA含量所产生的亚二倍体峰观测凋亡率,对照组、低剂量组以及高剂量组凋亡率分别为1.82%±0.51%、30.16%±5.47%、58.49%±5.98%。用Annexin V-FITC/PI染色分析细胞凋亡程度,其结果与PI-DNA染色所得结果一致,对照组仅有少量细胞死亡,低剂量组凋亡细胞较对照组为多(Annexin V-FITC单阳性细胞),高剂量组以坏死细胞为多(Annexin V-FITC/PI双阳性)。结论:HaCaT细胞经紫外照射后,线粒体去极化作用增强,同时线粒体质量降低,这些变化与细胞凋亡相关。

关键词： HaCaT细胞紫外线线粒体细胞凋亡

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腺病毒介导ERK-2基因在生长板软骨细胞中的表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第4期27卷 503-508页

作者：季煜华曾耀英邢飞跃俞瑜王会营江颖娟暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:构建ERK-2基因重组腺病毒载体,检测构建的腺病毒感染原代大鼠生长板软骨细胞的效率以及目的基因的表达。方法:将ERK-2 cDNA亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转染***.i B J5183,将筛选... 详细信息

目的:构建ERK-2基因重组腺病毒载体,检测构建的腺病毒感染原代大鼠生长板软骨细胞的效率以及目的基因的表达。方法:将ERK-2 cDNA亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转染***.i B J5183,将筛选、鉴定的重组腺病毒质粒线性化后转染HEK293细胞进行病毒颗粒的包装;流式细胞术检测不同感染复数(MO I)ERK-2重组腺病毒感染原代培养的大鼠肋生长板软骨细胞的效率,W estern b lot检测腺病毒感染的生长板软骨细胞中ERK-2蛋白的表达。结果:成功构建ERK-2重组腺病毒,MO I 50的腺病毒感染原代生长板软骨细胞的效率大于90%,感染的生长板软骨细胞中ERK-2表达显著增加。结论:构建的重组腺病毒可介导ERK-2基因在原代大鼠生长板软骨细胞中高表达。

关键词： ERK-2基因生长板软骨细胞腺病毒

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