检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2006年第2期22卷 195-198页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅杜丽蕊暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 暨南大学生物工程研究所广州510632

目的构建人CD40胞外结构域(exCD40)的原核表达载体,获得可溶性产物。方法以RT-PCR方法从人白细胞总RNA中扩增编码CD40胞外区的cDNA,构建羧基端融合His6标签的exCD40的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对表达产物进行复性、纯化和鉴定... 详细信息

目的构建人CD40胞外结构域(exCD40)的原核表达载体,获得可溶性产物。方法以RT-PCR方法从人白细胞总RNA中扩增编码CD40胞外区的cDNA,构建羧基端融合His6标签的exCD40的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对表达产物进行复性、纯化和鉴定。结果构建了exCD40的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高表达,Mr为23 000,与理论大小相符,表达产物主要存在于包涵体中,经Ni2+-NTA柱上复性和纯化获得纯度达95%的可溶性exCD40蛋白,该蛋白能与细胞上的CD40L结合。结论从大肠杆菌中成功获得具有配基结合活性的可溶性exCD40蛋白。

关键词： CD40 原核表达包涵体复性

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甘草甜素抑制小鼠接触性超敏反应的实验研究

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中国病理生理杂志 2006年第4期22卷 656-659页

作者：施军曾耀英蔡小嫦曾祥凤易敏丛林暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨甘草甜素(GL)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠接触性超敏反应(CHS)的抑制效果。方法:BALB/c小鼠分为GL1(11mg/kg)组、GL2(22mg/kg)组、GL3(44mg/kg)组、生理盐水(NS)组和地塞米松(DXM)组5组;利用DNFB诱发小鼠右耳CHS,各组于-1d至5... 详细信息

目的:探讨甘草甜素(GL)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠接触性超敏反应(CHS)的抑制效果。方法:BALB/c小鼠分为GL1(11mg/kg)组、GL2(22mg/kg)组、GL3(44mg/kg)组、生理盐水(NS)组和地塞米松(DXM)组5组;利用DNFB诱发小鼠右耳CHS,各组于-1d至5d每天腹腔注射0·2mL上述不同剂量药物(溶于生理盐水)。以耳厚度差、耳重量差及右耳病理变化,观察GL对小鼠CHS的抑制效果;同时计算胸腺指数、脾指数,了解GL对CHS小鼠免疫系统的影响。结果:3个剂量组GL和DXM均可明显抑制CHS小鼠右耳厚度及重量的增加,与NS组间差异显著(P<0·01),同时亦可明显抑制右耳组织水肿和炎细胞浸润。3种剂量GL均可减低CHS小鼠胸腺重量,与NS组间有统计学差异(P<0·05),而对脾脏重量无明显影响;DXM可显著降低CHS小鼠胸腺和脾脏重量。结论:甘草甜素可明显抑制DNFB诱发的小鼠接触性超敏反应。

关键词：甘草皮炎,接触性二硝基氟苯胸腺脾

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杨梅素对淋巴细胞活化及增殖的影响

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中国药理学通报 2006年第1期22卷 63-66页

作者：俞瑜曾耀英刘良季煜华邢飞跃肇静娴暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 香港浸会大学中医药学院

目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光... 详细信息

目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术,流式细胞仪检测杨梅素对小鼠CD3+T细胞CD69表达的影响;采用3H-TdR参入法检测杨梅素对淋巴细胞增殖的影响,采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测杨梅素对IL-2mRNA表达的影响。采用ELISPOT检测杨梅素对IFN-γ分泌的影响。结果杨梅素能抑制T细胞早期活化标志CD69的表达,并能抑制淋巴细胞增殖反应,同时对淋巴细胞活化后IL-2 mRNA的表达及IFN-γ的分泌也有抑制作用。结论杨梅素对淋巴细胞的活化增殖反应具有抑制作用。

关键词：杨梅素淋巴细胞活化增殖细胞因子

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MAPK信号通路在诱导Th1/Th2分化中的作用

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现代免疫学 2006年第6期26卷 516-519页

作者：于哲刑飞跃曾耀英广州暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广州510632

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也能促进Th2分化;ERK1/2则能诱导CD4+T细胞向Th2分化。

关键词： JNK p38 ERK Th1 Th2 分化

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高频等位基因HLA-A* 1101重链胞外域-BSP融合蛋白原核表达载体的构建及表达鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第4期27卷 509-514页

作者：李丰耀徐丽慧迟晓云查庆兵贾仟涛何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建HLA-A*1101重链胞外域羧基端融合生物素化酶B irA底物肽(BSP)的融合蛋白(HLA-A11-BSP)原核表达载体,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白。方法:以RT-PCR法扩增并克隆HLA-A*1101重链基因的cDNA,以PCR方法构建HLA-A11-BSP的表达载体,... 详细信息

目的:构建HLA-A*1101重链胞外域羧基端融合生物素化酶B irA底物肽(BSP)的融合蛋白(HLA-A11-BSP)原核表达载体,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白。方法:以RT-PCR法扩增并克隆HLA-A*1101重链基因的cDNA,以PCR方法构建HLA-A11-BSP的表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以免疫印迹法进行鉴定。结果:从HLA-A2阴性的供者外周血单个核细胞中克隆到HLA-A*1101重链基因的cDNA,以此cDNA为模板,将编码HLA-A*1101重链胞外域1~276序列与编码BSP的序列融合,构建HLA-A11-BSP融合蛋白表达载体,重组质粒经测序验证。融合蛋白在BL21(DE3)中诱导后获得高效表达,约占菌体总蛋白的20%;其相对分子质量约为35 000,与理论值一致。免疫印迹分析显示表达产物主要存在于包涵体中,上清液中几乎无任何产物存在。结论:成功构建表达HLA-A11-BSP融合蛋白的原核表达载体,该融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式获得高水平表达。

关键词：免疫学高频等位基因HLA-A*1101 生物素化酶底物肽融合蛋白原核表达包涵体

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小鼠表皮干细胞分化潜能的体内植入研究(英文)

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中国病理生理杂志 2006年第12期22卷 2418-2423页

作者：林羿李海标黄锦桃曾山狄静芳曾耀英中山大学组织胚胎学教研室广东广州510080 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:将小鼠表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)种植到可生物降解的载体内并移植到同基因受者小鼠皮下,研究其分化潜能。方法:在体外诱导ES细胞分化为ESC,经用Hoechst 33342荧光染色后,种植到含有胶原凝胶的聚乙醇酸(polyglycolic a... 详细信息

目的:将小鼠表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)种植到可生物降解的载体内并移植到同基因受者小鼠皮下,研究其分化潜能。方法:在体外诱导ES细胞分化为ESC,经用Hoechst 33342荧光染色后,种植到含有胶原凝胶的聚乙醇酸(polyglycolic acid,PGA)小网内,作为细胞载体移植到与干细胞同基因的129/J小鼠皮下。结果:荧光显微镜观察发现ESC在移植物内至少能存活3周以上,并能分化形成毛囊样和腺样结构,形成与天然真皮相似的结构。在植入后10周内未观察到明显排斥或毒性反应。结论:ESC可作为种子细胞用于制备具有形成真皮附属结构潜能的皮肤替代物的实验研究。

关键词：细胞表面标志物表皮干细胞

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多重免疫缺陷NOD/SCID小鼠CD3^+ DX5^+细胞亚群与妊娠结局的关系

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生殖医学杂志 2006年第5期15卷 336-338页

作者：林羿曾山冯铮曾耀英暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632

NOD/SCID小鼠具有T、B和自然杀伤(NK)细胞功能多重免疫缺陷。尽管如此,已证实在NOD/SCID小鼠体内仍残存一定量的NK细胞,具有一定的自然杀伤功能及残存的T细胞功能。NKT细胞是一类同时具有T和NK细胞特征和功能的细胞。虽然数量很少,但因... 详细信息

NOD/SCID小鼠具有T、B和自然杀伤(NK)细胞功能多重免疫缺陷。尽管如此,已证实在NOD/SCID小鼠体内仍残存一定量的NK细胞,具有一定的自然杀伤功能及残存的T细胞功能。NKT细胞是一类同时具有T和NK细胞特征和功能的细胞。虽然数量很少,但因其兼有双重功能,而具特殊意义。CD3和DX5分别是成熟T细胞和NK细胞表面广泛表达特异性标志物。本实验对NOD/SCID小鼠脾脏、腋下淋巴结(LN)和胎盘中NKT细胞(CD3^+DX5+)的构成比和功能等进行初步研究,并与无免疫缺陷的BALB/C小鼠进行比较,研究NKT细胞亚群在妊娠免疫耐受等生理过程中的潜在意义。[第一段]

关键词：动物模型免疫缺陷胎盘妊娠耐受

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人外周血T细胞活化状态对血卟啉单甲醚吸收的影响

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中国病理生理杂志 2006年第2期22卷 234-238页

作者：邱海霞顾瑛刘凡光曾耀英黄秀艳肇静娴曾晶中国人民解放军总医院激光医学科北京100853 暨南大学组织移植与免疫实验室广东广州516032

目的:观察健康人外周血T细胞的活化状态对其吸收新型光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)的影响。以期为进一步研究HMME-PDT对活化T细胞选择性作用提供实验依据。方法:以流式细胞仪检测孵育浓度和孵育时间对活化T细胞吸收HMME的影响。密度梯度法... 详细信息

目的:观察健康人外周血T细胞的活化状态对其吸收新型光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)的影响。以期为进一步研究HMME-PDT对活化T细胞选择性作用提供实验依据。方法:以流式细胞仪检测孵育浓度和孵育时间对活化T细胞吸收HMME的影响。密度梯度法常规分离人外周血淋巴细胞,分别以多克隆刺激剂PHA和PDB+Ion刺激T细胞活化,同时设立未加刺激剂的静止T细胞作对照。在评价孵育浓度对T细胞吸收HMME的影响时,将上述处理的淋巴细胞分别与0、5、10、20、30和40mg/L的HMME孵育1h,经CD3抗体染色后进行T细胞HMME吸收分析。在评价T细胞活化状态对HMME吸收量与孵育时间相关性的影响时,将培养的淋巴细胞与10mg/L的HMME分别孵育0-160min后进行检测。结果:T细胞的活化使其HMME吸收量的孵育浓度相关曲线以及孵育时间相关曲线较静止T细胞右移和上移。在一定孵育浓度范围内(5-20mg/L),活化T细胞对HMME的吸收量明显大于静止T细胞,差别具有统计学意义。然而,随着孵育浓度的进一步增加,活化T细胞与静止T细胞对HMME吸收量的差异逐渐减小。在10mg/L HMME孵育浓度的条件下,不论活化与否,随着孵育时间的延长,T细胞内HMME的吸收量在逐渐增强。在15-60min之间,活化T细胞HMME吸收量明显高于静止T细胞。结论:活化T细胞与静止T细胞HMME吸收量的差别取决于其孵育浓度和孵育时间,在一定孵育浓度和孵育时间范围内,活化T细胞HMME的吸收量明显高于静止T细胞,提示这可能有助于形成选择性删除活化T细胞的剂量关联和时间关联的HMME-PDT治疗窗口。

关键词： T淋巴细胞血卟啉类光化学疗法

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人类巨细胞病毒特异性CD8^+T细胞IFN-γ和穿孔素水平的检测

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 440-443页

作者：查庆兵徐丽慧迟晓云何贤辉肇静娴暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632

目的研究人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽(pp65495503,NLV)特异性CD8+T细胞的功能特性。方法将HLAA2NLV四聚体染色与细胞内细胞因子或穿孔素染色相结合,以流式细胞仪直接分析NLV特异性CD8+T细胞内穿孔素的表达水平,或者在NLV... 详细信息

目的研究人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽(pp65495503,NLV)特异性CD8+T细胞的功能特性。方法将HLAA2NLV四聚体染色与细胞内细胞因子或穿孔素染色相结合,以流式细胞仪直接分析NLV特异性CD8+T细胞内穿孔素的表达水平,或者在NLV抗原肽刺激6h后分析γ干扰素(IFNγ)的表达水平。结果NLV抗原肽能诱导hCMV特异性CD8+T细胞分泌IFNγ,不同供者特异性CD8+T细胞产生IFNγ的比率存在较大差异(55.69±17.64)%,当NLV抗原肽质量浓度为10μgmL时IFNγ阳性细胞百分率最高;未经刺激的特异性CD8+T细胞内表达较高水平的穿孔素(53.90±16.41)%。结论识别单一表位的hCMV特异性CD8+T细胞合成IFNγ和穿孔素的能力存在多样性。

关键词：巨细胞病毒 CD8^+T细胞四聚体细胞内细胞因子染色流式细胞术

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PD-L1基因在正常胃和胃癌组织中的表达及其可变剪接变异体的鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第2期27卷 184-188页

作者：迟晓云徐丽慧查庆兵何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:检测PD-L1基因的常规和可变剪接变异体mRNA在胃癌组织和正常胃组织中的表达。方法:以RT-PCR方法从胃癌和正常胃组织的总RNA中扩增PD-L1的cDNA,并将扩增产物通过测序鉴定。结果:4例胃癌标本中,从病例2中扩增到常规和可变剪接变异体... 详细信息

目的:检测PD-L1基因的常规和可变剪接变异体mRNA在胃癌组织和正常胃组织中的表达。方法:以RT-PCR方法从胃癌和正常胃组织的总RNA中扩增PD-L1的cDNA,并将扩增产物通过测序鉴定。结果:4例胃癌标本中,从病例2中扩增到常规和可变剪接变异体,但以常规剪接体为主,病例3仅扩增到常规剪接体PD-L1Ⅰ,病例4扩增到其可变剪接变异体PD-L1Ⅱ,而病例1两种剪接形式均未扩增到。在2例正常胃组织中均只扩增到可变剪接变异体PD-L1Ⅱ。结论:PD-L1基因在大多数胃癌组织中表达,正常与胃癌组织中还表达可变剪接变异体PD-L1Ⅱ,提示表达产物的剪接方式具有多样性。

关键词： PD-L1基因可变剪接胃癌

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