检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2004年第6期24卷 629-632页

作者：季煜华曾耀英暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广州510632

探讨不同浓度的维生素C(AscorbicAcid ,Asc)对培养大鼠肋生长板软骨细胞 (ratcostochondralgrowthplatechondrocyte,RGC)增殖和胶原合成的影响。分离、培养RGC ,以组织化学和免疫组织化学的方法鉴定第 2代RGC的表型 ;分别用3 H TdR和3 H... 详细信息

探讨不同浓度的维生素C(AscorbicAcid ,Asc)对培养大鼠肋生长板软骨细胞 (ratcostochondralgrowthplatechondrocyte,RGC)增殖和胶原合成的影响。分离、培养RGC ,以组织化学和免疫组织化学的方法鉴定第 2代RGC的表型 ;分别用3 H TdR和3 H Proline掺入法检测 2 5、5 0和 10 0mg/LAsc对第 2代RGC增殖和胶原合成的影响。3种浓度的Asc均能促进RGC胶原合成 (P <0 0 5 ) ,2 5mg/L和 5 0mg/LAsc的促胶原合成作用明显强于 10 0mg/L(P <0 0 5 ) ;2 5mg/L和 5 0mg/L的Asc促进RGC增殖 (P <0 0 5 ) ,10 0mg/L的Asc抑制RGC的增殖 (P <0 0 5 )。因此一定浓度的Asc具有促进RGC增殖和胶原合成的作用 ,2 5mg/L～ 5 0mg/L是较为合适的添加浓度。

关键词： RGC 胶原合成软骨细胞增殖大鼠维生素C 肋骨骨生长促进影响作用

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T细胞识别同种异型移植抗原的研究进展

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中国免疫学杂志 2004年第3期20卷 149-152页

作者：曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

移植是末期组织、器官功能衰竭最彻底的治疗措施.同种异体移植(allogeneic transplantation)是临床最常见的移植类型.在本质上,人类的同种异体移植排斥反应是由受者的T细胞介导的、针对移植抗原的免疫应答.这一免疫应答是通过受者T细胞... 详细信息

移植是末期组织、器官功能衰竭最彻底的治疗措施.同种异体移植(allogeneic transplantation)是临床最常见的移植类型.在本质上,人类的同种异体移植排斥反应是由受者的T细胞介导的、针对移植抗原的免疫应答.这一免疫应答是通过受者T细胞表面的T细胞受体(T cell receptor,TCR)识别移植物细胞的同种异型抗原引发的.受者T细胞可以通过直接识别(direct recognition)和间接识别(indirect recognition)移植物细胞的同种异型MHC分子而被激活.在移植免疫领域里,有些问题一直困扰着学者们,近年的研究进展使这些问题在一定程度上得到阐明.

关键词： T细胞同种异型移植抗原免疫应答 T细胞受体 TCR 移植物基因编码

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人β_2-微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

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生物工程学报 2004年第1期20卷 99-103页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅曾耀英组织移植与免疫教育部重点实验室(暨南大学) 广州510632

β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大... 详细信息

β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大肠杆菌中得到高效表达。表达的β2 m大部分在包涵体中 ,经洗涤、变性和复性 ,并以强阴离子交换柱层析纯化 ,获得SDS PAGE纯的人重组 β2 m ,Western印迹法分析表明该蛋白具有与抗人天然 β2 m抗体反应的特性。此工作为制备MHCⅠ类分子四聚体奠定基础。

关键词： β2-微球蛋白基因克隆大肠杆菌表达基因克隆重组蛋白包涵体

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NK细胞在小鼠异基因骨髓移植中的作用

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中国病理生理杂志 2004年第9期20卷 1563-1567页

作者：杨志刚曾耀英何贤辉王通王青暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的研究自然杀伤(NK)细胞在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、骨髓植入及造血重建的影响。方法以近交系小鼠C57/6j(H-2b)为供鼠、BALB/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和/或NK细胞进行异基因骨髓移植,... 详细信息

目的研究自然杀伤(NK)细胞在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、骨髓植入及造血重建的影响。方法以近交系小鼠C57/6j(H-2b)为供鼠、BALB/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和/或NK细胞进行异基因骨髓移植,用流式细胞仪检测受鼠的CD34+细胞计数和H-2Kb+细胞表达水平,血细胞自动分析仪检测外周血白细胞计数,并结合临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率、GVHD、植入水平及造血重建等。结果增加NK细胞组的小鼠存活率显著大于不增加NK细胞组,小鼠出现GVHD的数量少、程度轻,外周血白细胞及骨髓CD34+细胞恢复快、H-2Kb+细胞表达水平高。结论NK细胞抑制小鼠异基因骨髓移植中的GVHD和移植排斥,促进骨髓植入及造血重建。

关键词：杀伤细胞天然异基因骨髓移植同种异基因反应性移植物抗宿主病

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染料木黄酮对小鼠T细胞体外活化及增殖的影响

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中国病理生理杂志 2004年第2期20卷 186-190页

作者：王青何贤辉肇静娴杨志刚曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的 :研究染料木黄酮 (Gen)对T细胞体外活化及增殖的影响 ,并探讨其机制。方法 :利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术 ,检测多克隆刺激剂佛波醇酯 (PDB)或刀豆蛋白 (ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD6 9、CD2 5的百分率 ;... 详细信息

目的 :研究染料木黄酮 (Gen)对T细胞体外活化及增殖的影响 ,并探讨其机制。方法 :利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术 ,检测多克隆刺激剂佛波醇酯 (PDB)或刀豆蛋白 (ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD6 9、CD2 5的百分率 ;以羧基荧光素乙酰乙酸 (CFSE)标记技术结合流式细胞术 ,分析PDB +Ion (Iono mycin)或ConA刺激下T细胞增殖相关指数。结果 :Gen对ConA刺激组T细胞CD6 9、CD2 5表达有明显抑制作用 (P<0 0 5 ) ,且呈剂量依赖关系 ,而对PDB刺激组T细胞CD6 9及CD2 5表达的抑制需要较高浓度 (>5 0 μmol/L) ;Gen无论对ConA或PDB +Ion刺激组T细胞增殖均有显著抑制作用 (P <0 0 1) ,且均呈剂量依赖关系。结论 :Gen可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞体外活化及增殖 ,其作用机制可能是抑制早期活化相关蛋白酪氨酸激酶活性。

关键词：染料木黄酮抗原 CD69 受体白细胞介素2 T淋巴细胞流式细胞术

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小鼠眼内移植性黑色素瘤诱导免疫偏离的表达

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眼科研究 2004年第2期22卷 128-131页

作者：张翼飞李志杰李辰暨南大学第一附属医院眼科广州510630 暨南大学组织移植与免疫中心广州510630

目的　观察小鼠前房和玻璃体腔的移植性黑色素瘤是否具有诱导免疫偏离的能力。方法　将雄性昆明小鼠 60只随机分为实验组及其相应的对照组共 5组。分别于实验组小鼠的前房或玻璃体腔接种黑色素瘤B16F10细胞 ,然后观察测量和比较其抗原... 详细信息

目的　观察小鼠前房和玻璃体腔的移植性黑色素瘤是否具有诱导免疫偏离的能力。方法　将雄性昆明小鼠 60只随机分为实验组及其相应的对照组共 5组。分别于实验组小鼠的前房或玻璃体腔接种黑色素瘤B16F10细胞 ,然后观察测量和比较其抗原特异性迟发型超敏反应 (DTH)的程度。结果　 ( 1)小鼠前房和玻璃体腔移植性黑色素瘤均可进行性生长。 ( 2 )各组小鼠右耳DTH反应的肿胀值为前房组 ( 3 4± 3 5 ) μm ,玻璃体腔组 ( 3 6± 96) μm ,前房对照组 ( 194± 99) μm ,玻璃体腔对照组 ( 186± 5 5 ) μm以及空白对照组 ( 165± 118) μm。实验组与其相应对照组的差异具有显著性意义 (前房组t =-5 2 0 9,P =0 0 0 0 ;玻璃体腔组t =-3 871,P =0 0 0 2 )。 ( 3 )病理观察实验组“二免”后右耳未见炎性细胞浸润 ,而对照组则相反。结论　同种异体的昆明小鼠前房和玻璃体腔的移植性黑色素瘤均具有诱导其相关免疫偏离的能力。

关键词：小鼠眼内移植性黑色素瘤诱导免疫偏离表达疾病模型

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CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第2期20卷 135-139页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦... 详细信息

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞 2 4h后 ,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为 16%。表达的融合蛋白主要分布于胞内 ,细胞膜上分布较少。相反 ,转染空载体的细胞仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。以佛波醇酯加离子霉素刺激后 ,CTLA4 EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到 2 9% ,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合 ;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变。结论 :成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K562细胞中得到表达。

关键词： CTLA4 绿色荧光蛋白融合蛋白共聚焦显微术

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人PD-L1 cDNA的克隆及其胞外区蛋白在大肠杆菌中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 659-663页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表... 详细信息

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果 :克隆到PD L1cDNA编码区的全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。同时构建了在羧基端带有His6标签的PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。免疫印迹分析表明 ,在IPTG诱导后表达的PD L1胞外区蛋白 ,相对分子质量 (Mr)为 2 50 0 0 ,与理论值的大小相符。该重组蛋白能与抗His6标签的单抗 (mAb)特异性反应。结论 :成功地克隆PD L1基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为利用PD L1转基因修饰移植物或以PD

关键词： PD-L1 cDNA克隆淋巴细胞重组蛋白

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IDO-EGFP表达载体的构建及其在人软骨细胞中的表达

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免疫学杂志 2004年第3期20卷 172-176页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅江逊蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的　克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法　利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞... 详细信息

目的　克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法　利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞进行瞬时表达 ,以共聚焦显微镜对表达的绿色荧光进行分析。结果　从活化的人白细胞中克隆到IDO基因编码区全长 ,并构建了IDO EGFP融合蛋白表达载体。以该表达载体转染原代人软骨细胞 ,表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞。结论　成功构建了IDO EGFP哺乳动物细胞表达载体。

关键词：吲哚胺双加氧酶绿色荧光蛋白融合蛋白软骨细胞共聚焦显微术

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小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立

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中国病理生理杂志 2004年第10期20卷 1947-1949页

作者：杨志刚曾耀英王青王通曾蕙兰暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632

目的 :建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病 (GVHD)模型 ;为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法 :以C5 7BL/6 (H - 2 b)小鼠为供鼠、BALB/c(H - 2 d)小鼠为受鼠 ,在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴... 详细信息

目的 :建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病 (GVHD)模型 ;为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法 :以C5 7BL/6 (H - 2 b)小鼠为供鼠、BALB/c(H - 2 d)小鼠为受鼠 ,在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴细胞以引起不同程度的GVHD。根据临床表现、存活期及病理检查等判断GVHD程度。结果 :单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现急性GVHD ,2 0 %的小鼠长期存活 (超过 12 0d) ,无急性GVHD表现 ;混合不同比例外周淋巴细胞的异基因骨髓移植小鼠出现GVHD的时间和程度均有差异 ,其中骨髓与外周淋巴细胞 1∶1混合组小鼠全部在移植后 5 - 14d出现典型的弓背体位 ,存活期 6 - 2 4d ,临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论 :以供鼠骨髓与外周淋巴细胞 1∶1混合进行的异基因骨髓移植 ,10 0 %引出致死性的急性GVHD。

关键词：小鼠骨髓移植移植物抗宿主病动物模型

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