检索结果-内蒙古大学图书馆

中国恒河猴Mamu-B*1703/EGFP在K562和B16细胞中的表达及分布

第三军医大学学报 2010年第9期32卷 874-878页

作者：欧阳东云徐丽慧高琦郭贺何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室暨南大学生物工程研究所广州510632

目的分析恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子重链的亚细胞分布,建立适于体外研究恒河猴MHCⅠ类分子表达和抗原呈递功能的细胞系。方法将含Mamu-B*1703重链基因真核表达载体pEGFP-N1分别转染K562... 详细信息

目的分析恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子重链的亚细胞分布,建立适于体外研究恒河猴MHCⅠ类分子表达和抗原呈递功能的细胞系。方法将含Mamu-B*1703重链基因真核表达载体pEGFP-N1分别转染K562和B16细胞,细胞收集后以W6/32单克隆抗体或抗Mamu-B*1703抗血清及PE标记二抗染色,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞术分析Mamu-B*1703复合体在细胞内和细胞表面的表达。结果在K562和B16细胞的细胞质内均可观察到与Mamu-B*1703重链基因融合表达的绿色荧光蛋白激发后的绿色荧光,即2种细胞均可表达外源Mamu-B*1703重链分子;但通过藻红蛋白标记的抗MHCⅠ类分子复合体抗体染色显示,Mamu-B*1703复合体仅表达于K562细胞表面,而不表达于B16细胞表面。结论Mamu-B*1703重链可与人K562细胞而不能与小鼠B16细胞内的βm轻链结合组装成复合体,表达于细胞表面,提示研究恒河猴的MHCⅠ分子表达应利用人类的细胞株。

关键词：主要组织相容性复合体Ⅰ类分子 Mamu-B＊1703 中国恒河猴转染

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3种流感病毒细胞毒T淋巴细胞抗原表位比较

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中国公共卫生 2010年第10期26卷 1293-1294页

作者：王飞鹏何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

2009年甲型H1N1流感的世界性流行引起普遍关注。然而,发现甲型H1N1感染者多数症状较轻,重症病例很少。研究显示,目前流行的甲型H1N1流感病毒中包含了人类流感病毒H3N2以及禽流感病毒H5N1的成分,而且其他组分也与以往流行的人类流感病毒... 详细信息

2009年甲型H1N1流感的世界性流行引起普遍关注。然而,发现甲型H1N1感染者多数症状较轻,重症病例很少。研究显示,目前流行的甲型H1N1流感病毒中包含了人类流感病毒H3N2以及禽流感病毒H5N1的成分,而且其他组分也与以往流行的人类流感病毒有较高同源性,据此推测,既往有人类流感病史者对甲型H1N1流感可能有一定交叉免疫力,即人类体内普遍存在的免疫记忆,[第一段]

关键词：流感病毒抗原表位表位预测交叉抗原反应

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重组人ASCT2的C-末端胞外结构域的原核表达、纯化及鉴定

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中国生物工程杂志 2010年第4期30卷 39-43页

作者：欧阳东云徐丽慧高琦郭贺陈清何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广州510632 暨南大学生物工程研究所广州510632

中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,其最大的胞外结构域存在于C-末端的105个氨基酸(以下简称TAIL)。通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的... 详细信息

中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,其最大的胞外结构域存在于C-末端的105个氨基酸(以下简称TAIL)。通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的TAIL序列,与pET-41b(克隆位点的N-和C-端分别有谷胱甘肽转移酶和His6标签序列)连接构建原核表达载体,重组质粒在大肠杆菌中获得表达,免疫印迹显示重组蛋白TAIL在细菌裂解液上清和沉淀(包涵体)中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化获得高纯度的TAIL蛋白,该蛋白可结合在表达合胞素的MCF-7细胞表面,提示其可能具有结合合胞素的活性。

关键词：合胞素中性氨基酸转运蛋白胞外结构域原核表达

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补阳还五汤预先干预对大鼠脑死亡后心肺炎症细胞因子表达的抑制作用

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中草药 2010年第5期41卷 757-761页

作者：陈洁曾耀英曾慧兰刘嘉雯苏泽轩郝彤彤暨南大学附属第一医院泌尿外科/肾移植科广东广州510630 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 暨南大学附属第一医院血液科广东广州510630

目的观察补阳还五汤预先干预大鼠抑制其脑死亡后心、肺炎症细胞因子表达。方法雄性 Wistar 大鼠 30 只，体质量 180～200 g，随机分3组。对照组：正常大鼠麻醉后取心和肺；脑死亡模型组：诱导大鼠脑死亡；补阳还五汤组：脑死亡诱导前 ... 详细信息

目的观察补阳还五汤预先干预大鼠抑制其脑死亡后心、肺炎症细胞因子表达。方法雄性 Wistar 大鼠 30 只，体质量 180～200 g，随机分3组。对照组：正常大鼠麻醉后取心和肺；脑死亡模型组：诱导大鼠脑死亡；补阳还五汤组：脑死亡诱导前 7 d，连续每天1次给大鼠 ig 补阳还五汤水煎剂（1.8 mL/100 g，12.6 g/kg）。大鼠脑死亡诱导成功，机械呼吸 6 h，若平均动脉压大于 80 mmHg，则取其心和肺。RT-PCR 检测心、肺组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β （IL-1β） mRNA 表达，Western blotting 检测心、肺组织 TNF-α和 IL-1β 蛋白及磷酸化 p38 丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）蛋白表达。结果模型组心肺 TNF-α、IL-1β mRNA 和蛋白表达及 p-p38MAPK 蛋白表达比对照组显著增加（P ＜0.01）。补阳还五汤组各指标比模型组显著降低（P ＜0.05），但仍比对照组显著增加（P ＜0.01）。结论补阳还五汤预先干预大鼠能显著抑制其脑死亡后心肺炎症细胞因子表达，可能与其在不同层面阻断 p38MAPK 信号通路关键靶点有关。

关键词：补阳还五汤脑死亡炎症细胞因子 p38丝裂原活化蛋白激酶

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siRNA干扰p38α上调人血管eNOS基因启动子转录活性

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第6期31卷 539-543页

作者：王宝玉邢飞跃刘娜李卓唐征乐暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:通过靶向p38α的siRNA干扰人血管内皮细胞的p38α信号通路,探索其对血管内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调节作用。方法:利用W estern印迹检测siRNA-p38α干扰HUVEC-12细胞后p38α蛋白的表达,确定siRNA-p38α的最佳... 详细信息

目的:通过靶向p38α的siRNA干扰人血管内皮细胞的p38α信号通路,探索其对血管内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调节作用。方法:利用W estern印迹检测siRNA-p38α干扰HUVEC-12细胞后p38α蛋白的表达,确定siRNA-p38α的最佳作用时间和浓度,然后通过双荧光素酶报告基因技术检测转染siRNA-p38α后细胞裂解液的荧光强度,分析eNOS基因启动子的转录活性变化。结果:与对照组比较,siRNA-p38α干扰后p38α蛋白表达明显减弱,而相应的eNOS启动子转录活性上调,以100 nmol/L的siRNA-p38α作用48 h的效果最佳。结论:siRNA干扰p38α信号可上调人血管内皮细胞eNOS基因的转录活性。

关键词：一氧化氮合酶 p38α丝裂原活化蛋白激酶小分子干扰RNΑ 内皮细胞

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hNIS转基因介导^(131)碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第4期31卷 387-392页

作者：钟兴弓健曾祥凤徐浩暨南大学附属第一医院医学影像中心广东广州510630 暨南大学附属第一医院核医学科广东广州510630 暨南大学组织与免疫移植实验中心广东广州510632

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可... 详细信息

目的:克隆人的甲状腺钠/碘同向转运体(hNIS)基因,研究其转导在鼻咽癌细胞内的功能,以及131碘对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到hNIS的可编码区基因,并克隆到pcDNA3.1(+)-FLAG载体,获得重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG。采用脂质体转染的方法,将pcDNA3.1(+)-hNIS-FLAG质粒导入到鼻咽癌细胞株CNE2,G418筛选得到稳定表达hNIS鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS,体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取和外流情况。CCK8试剂盒检测131碘对鼻咽癌细胞增殖的作用,AnnexinⅤ-FITC/PI双标记流式细胞技术(FCM)检测131碘作用后鼻咽癌细胞凋亡情况。结果:成功克隆hNIS基因,并建立能稳定表达hNIS的鼻咽癌细胞系CNE2-hNIS。CNE2-hNIS对125碘的吸收量比CNE2高约15倍,但在无碘的环境中,细胞内滞留的碘外流迅速,有效半衰期约8min。131碘在72 h后对CNE2-hNIS的增殖产生抑制作用,细胞早期凋亡率增加,并随着131碘浓度的增加,作用逐渐增强(P<0.01)。结论:从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染鼻咽癌细胞后,能使鼻咽癌细胞发挥高水平吸碘功能,131碘能够抑制转染hNIS的鼻咽癌细胞的增殖,促进细胞凋亡。

关键词：人钠/碘同向转运体基因转染碘放射性同位素

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中药喘可治注射液对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第6期31卷 572-576页

作者：孙成宏张亚兴宋兵曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20μL/mL)孵育4 h后,加入过氧化氢(H2O2)、放线菌... 详细信息

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20μL/mL)孵育4 h后,加入过氧化氢(H2O2)、放线菌酮(CHX)、环磷酰胺(CTX)诱导细胞凋亡,荧光酶标仪结合SytoxGreen染色检测细胞凋亡;加药孵育4 h后,加入细菌脂多糖(LPS,终质量浓度10μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80ng/mL),24h后Grass试剂盒检测巨噬细胞NO的量;加药孵育4 h后,加入LPS(终质量浓度10μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后流式细胞仪结合Cytometric Bead Array(CBA)技术检测细胞因子的释放。结果:CKZ能抑制H2O2、CHX、CTX诱导的细胞凋亡;促进非刺激状态下巨噬细胞NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生,抑制LPS和IFN-γ刺激的NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生。结论:CKZ可抑制巨噬细胞凋亡,并对巨噬细胞NO的分泌和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的生成具有双向调节作用。

关键词：巨噬细胞喘可治细胞凋亡一氧化氮细胞因子

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酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制Jurkat T细胞增殖

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第3期26卷 214-217页

作者：毛成全邢飞跃郭中峰方志远暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响,探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制。方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat ... 详细信息

目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响,探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制。方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat T细胞表面分子CD69和CD25表达的影响;利用噻唑蓝(MTT)比色法观察AG490对Jurkat T细胞增殖的影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测AG490对Jur-kat T细胞周期的影响;应用Annexin V-FITC和PI双染色检测AG490对Jurkat T细胞凋亡的影响;Western blot检测AG490对Jurkat T细胞中ICBP90蛋白表达的影响以确定其与AG490抑制Jurkat T细胞增殖的关系。结果:随着AG490浓度从1 mmol/L增至30 mmol/L,细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期和G2/M期,导致Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达显著降低;AG490对细胞的抑制作用于24 h最为明显,抑制率可达27.37%,呈剂量依赖关系;AG490不能明显抑制Jurkat T细胞的活化或促进其凋亡。结论:AG490能明显抑制Jurkat T细胞的生长,其抑制作用可能通过下调Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达与细胞周期阻滞有关,而不是通过促进细胞凋亡而实现。

关键词： AG490 Jurkat T细胞增殖周期 ICBP90

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体外培养对人皮肤角质形成细胞蛋白质组的影响

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实用医学杂志 2010年第10期26卷 1704-1706页

作者：吴晓萍曾耀英聂燕芳刘钧澄暨南大学组织移植与免疫实验中心广州市510632 中山大学附属第一医院小儿外科广州市510080

目的:探讨体外长期培养对人皮肤角质形成细胞蛋白质组的影响。方法:制备原代和第7代体外培养的人皮肤角质形成细胞的总蛋白样品进行双向凝胶电泳。采用PDQuest图像分析软件对获得的双向凝胶电泳图谱进行分析。串联飞行时间质谱鉴定选取... 详细信息

目的:探讨体外长期培养对人皮肤角质形成细胞蛋白质组的影响。方法:制备原代和第7代体外培养的人皮肤角质形成细胞的总蛋白样品进行双向凝胶电泳。采用PDQuest图像分析软件对获得的双向凝胶电泳图谱进行分析。串联飞行时间质谱鉴定选取的差异表达蛋白质点。半定量RT-PCR对差异表达蛋白质的mRNA水平进行确证。结果:获得了蛋白质分离效果较好的双向凝胶电泳图谱,串联飞行时间质谱鉴定选取的2个在第7代角质形成细胞中表达显著下调的蛋白质分别为PA-FABP(psoriasis-associated fatty acidbinding protein5)和Galectin-7,半定量RT-PCR确证第7代角质形成细胞中PA-FABP和Galectin-7的基因转录水平较原代角质形成细胞相应的基因转录水平显著降低。结论:体外长期培养人皮肤角质形成细胞可能影响一些与细胞的脂肪酸代谢及细胞凋亡相关蛋白的表达。

关键词：电脉,凝胶,双向人皮肤角质形成细胞质谱 RT-PCR

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人工合成相关寡肽抑制流产发生的免疫机制研究

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现代免疫学 2010年第1期30卷 14-18页

作者：王丽丽曾山孙 Nisar Khan 林羿 Robbert Benner 芦春斌暨南大学生殖免疫研究所广州510632 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 荷兰鹿特丹Erasmus医学中心荷兰

研究寡肽蛋-苏-精-缬(MTRV)抑制多聚次黄苷酸-胞苷酸(poly I∶C)诱发的小鼠胚胎吸收的免疫机制。给予异基因妊娠BALB/c×C57BL/6小鼠腹腔注射poly I∶C建立诱发性胚胎吸收模型;在孕期多个时点腹腔注射MTRV,观察其对胚胎吸收率的影响... 详细信息

研究寡肽蛋-苏-精-缬(MTRV)抑制多聚次黄苷酸-胞苷酸(poly I∶C)诱发的小鼠胚胎吸收的免疫机制。给予异基因妊娠BALB/c×C57BL/6小鼠腹腔注射poly I∶C建立诱发性胚胎吸收模型;在孕期多个时点腹腔注射MTRV,观察其对胚胎吸收率的影响,并采用流式细胞术检测妊娠9.5 d和13.5 d妊娠子宫内各种免疫活性细胞的百分率。结果显示,MTRV不能显著改变poly I∶C所引起的Toll样受体3阳性细胞和CD80阳性细胞增多,但是可显著抑制poly I∶C所引起的IFN-γ阳性细胞增多和转化生长因子-β阳性细胞减少,并降低流产率。提示寡肽MTRV可纠正poly I∶C所引起的妊娠子宫内细胞因子表达紊乱,从而抑制poly I∶C所诱发的流产。

关键词：流产母-胎界面免疫调节免疫耐受

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