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中国免疫学会第四届学术大会

作者：肇静娴曾耀英何贤辉王南狄静芳曾山暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

活细胞染料羧基荧光素乙酰乙酸Carboxyfluo—rescein diacetate,succinimidyl ester(CFDA,SE)自从1994年被引介给广大免疫学工作者以来[1],利用CFSE荧光强度的系列减半特征通过流式细胞术分析淋巴细胞增殖的技术已越来越广泛地被应用。... 详细信息

活细胞染料羧基荧光素乙酰乙酸Carboxyfluo—rescein diacetate,succinimidyl ester(CFDA,SE)自从1994年被引介给广大免疫学工作者以来[1],利用CFSE荧光强度的系列减半特征通过流式细胞术分析淋巴细胞增殖的技术已越来越广泛地被应用。这项技术能够实现对体外或体内的8至10个不同细胞分裂周期的可视化。

关键词：淋巴细胞增殖活细胞 CFDA,SE

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氧化苦参碱对刀豆蛋白A刺激的小鼠淋巴细胞增殖影响的研究

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中国现代医学杂志 2005年第7期15卷 1005-1008页

作者：伍斌蔡小嫦曾耀英王通王希朝曾翔凤暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的应用荧光染料C FD A-SE(C arboxyfluorescein diacetate,succinim idyl ester)染色检测氧化苦参碱(O xym atrine,O M T)对刀豆蛋白A(C on A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法利用C FD A-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多... 详细信息

目的应用荧光染料C FD A-SE(C arboxyfluorescein diacetate,succinim idyl ester)染色检测氧化苦参碱(O xym atrine,O M T)对刀豆蛋白A(C on A)刺激的小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法利用C FD A-SE染色,流式细胞术检测小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂C on A和O M T的共同作同下荧光强度的变化,并应用相关软件分析O M T对小鼠淋巴细胞增殖的影响程度。结果培养48h,流式细胞仪检测的淋巴细胞C FSE荧光强度,对照组未出现子代峰,即淋巴细胞没有增殖。C on A组明显的出现3个峰,说明C on A刺激后48h细胞出现了明显的细胞增殖,与对照组相比荧光强度减半明显。在C on A+O M T各剂量组中,高剂量组即O M T500μg/m L组,原代峰显著高于C on A组,各子代峰显著低于C on A组,但与对照组比较差异无显著性,说明O M T明显抑制了淋巴细胞的增殖,中剂量组即O M T125μg/m L组和高剂量组结果一致,说明这一剂量的O M T仍然明显抑制小鼠淋巴细胞的增值,O M T低剂量组即O M T31μg/m L组和C on A组比较差异没有显著性,和对照组比较,各代细胞荧光强度差异有显著性,即这一剂量的O M T对淋巴细胞增殖抑制作用不明显。培养72h后,各组之间荧光强度变化情况与48h的情况基本一致。经C ELLQ uest软件拟合后得到各项增殖指标显示,O M T在500?

关键词： CFDA—SE OMT 淋巴细胞增殖

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SARS-CoV Sars7a和EGFP融合蛋白真核表达载体构建及其表达

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中国病毒学 2004年第3期19卷 209-213,i001页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

根据SARS-CoVsars7a基因设计并化学合成部分重叠引物,经二轮PCR获得sars7a基因片段,以此片段为模板并利用一对带有Kozak序列及删除终止密码的引物进行PCR,获得产物与pEGFP-N1载体连接,使sars7a基因位于EGFP的基因上游,得到含编码Sars7a-... 详细信息

根据SARS-CoVsars7a基因设计并化学合成部分重叠引物,经二轮PCR获得sars7a基因片段,以此片段为模板并利用一对带有Kozak序列及删除终止密码的引物进行PCR,获得产物与pEGFP-N1载体连接,使sars7a基因位于EGFP的基因上游,得到含编码Sars7a-EGFP融合蛋白基因的哺乳动物细胞表达载体。采用细胞核转染技术将重组表达载体转染K562细胞,以流式细胞仪和共聚焦显微镜分析,可检测到EGFP的绿色荧光,表明Sars7a-EGFP得到表达,该蛋白分布于整个细胞,提示Sars7a并非膜蛋白,更可能是胞浆蛋白。此外,该蛋白的表达对K562细胞凋亡无明显影响。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒 Sars7a 绿色荧光蛋白融合蛋白表达

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人外周血T细胞活化状态对血卟啉单甲醚吸收的影响

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中国病理生理杂志 2006年第2期22卷 234-238页

作者：邱海霞顾瑛刘凡光曾耀英黄秀艳肇静娴曾晶中国人民解放军总医院激光医学科北京100853 暨南大学组织移植与免疫实验室广东广州516032

目的:观察健康人外周血T细胞的活化状态对其吸收新型光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)的影响。以期为进一步研究HMME-PDT对活化T细胞选择性作用提供实验依据。方法:以流式细胞仪检测孵育浓度和孵育时间对活化T细胞吸收HMME的影响。密度梯度法... 详细信息

目的:观察健康人外周血T细胞的活化状态对其吸收新型光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)的影响。以期为进一步研究HMME-PDT对活化T细胞选择性作用提供实验依据。方法:以流式细胞仪检测孵育浓度和孵育时间对活化T细胞吸收HMME的影响。密度梯度法常规分离人外周血淋巴细胞,分别以多克隆刺激剂PHA和PDB+Ion刺激T细胞活化,同时设立未加刺激剂的静止T细胞作对照。在评价孵育浓度对T细胞吸收HMME的影响时,将上述处理的淋巴细胞分别与0、5、10、20、30和40mg/L的HMME孵育1h,经CD3抗体染色后进行T细胞HMME吸收分析。在评价T细胞活化状态对HMME吸收量与孵育时间相关性的影响时,将培养的淋巴细胞与10mg/L的HMME分别孵育0-160min后进行检测。结果:T细胞的活化使其HMME吸收量的孵育浓度相关曲线以及孵育时间相关曲线较静止T细胞右移和上移。在一定孵育浓度范围内(5-20mg/L),活化T细胞对HMME的吸收量明显大于静止T细胞,差别具有统计学意义。然而,随着孵育浓度的进一步增加,活化T细胞与静止T细胞对HMME吸收量的差异逐渐减小。在10mg/L HMME孵育浓度的条件下,不论活化与否,随着孵育时间的延长,T细胞内HMME的吸收量在逐渐增强。在15-60min之间,活化T细胞HMME吸收量明显高于静止T细胞。结论:活化T细胞与静止T细胞HMME吸收量的差别取决于其孵育浓度和孵育时间,在一定孵育浓度和孵育时间范围内,活化T细胞HMME的吸收量明显高于静止T细胞,提示这可能有助于形成选择性删除活化T细胞的剂量关联和时间关联的HMME-PDT治疗窗口。

关键词： T淋巴细胞血卟啉类光化学疗法

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通痹灵对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69表达影响的血清免疫药理评价

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中国免疫学杂志 2002年第5期18卷 330-333页

作者：全世明曾耀英陈纪藩胡英杰暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 广州中医药大学第一附属医院广州510405

目的：应用血清免疫药理方法探讨通痹灵对T细胞体外活化的影响，以进一步揭示通痹灵的免疫调节分子机理，为临床用药提供理论依据。方法：分离小鼠淋巴结细胞，分别与CHX、5％CHX血清、CsA、5％CsA血清、5％通痹灵血清预孵后加入多克隆... 详细信息

目的：应用血清免疫药理方法探讨通痹灵对T细胞体外活化的影响，以进一步揭示通痹灵的免疫调节分子机理，为临床用药提供理论依据。方法：分离小鼠淋巴结细胞，分别与CHX、5％CHX血清、CsA、5％CsA血清、5％通痹灵血清预孵后加入多克隆刺激剂继续培养，总计培养24h后收获细胞，进行双色免疫荧光标记，以流式细胞术对T细胞的CD69分子表达情况进行分析。结果：5％通痹灵作用下ConA活化的T细胞CD69表达百分率为（54．67±6．69）％，与相应对照［（64．35 ±10．13）%］比较有显著差异（P<0．05）；药物作用下PDB活化的T细胞CD69表达的百分率为（80．99±6．18）%，与相应对照［（79．68±4．17）％］比较无显著差异（P>0．05）。结论：通痹灵含药血清选择性地抑制ConA刺激的T细胞活化，而对PDB刺激的T细胞活化无影响；推测抑制类风湿关节炎疾病启动与发展中异常的T细胞活化，是通痹灵治疗类风湿关节炎重要机制之一；。

关键词：中药复方 CD69 T淋巴细胞血清免疫药理学类风湿关节炎通痹灵动物实验

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加载HCMV抗原肽的HLA-A*0201单体及其四聚体制备和鉴定

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生物工程学报 2004年第3期20卷 382-388页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学广州510632 暨南大学生物工程研究所广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广州510632 郑州大学第一附属医院皮肤科郑州450052

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免... 详细信息

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序 ,利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒 (HCMV)抗原肽的HLA_A2四聚体 ,具有特异性结合CTL活性。HLA_A 0 2 0 1重链基因是通过RT_PCR方法从HLA_A2 + 供者白细胞中克隆 ,进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽 (BSP)的HLA_A 0 2 0 1(A2 )重链胞外区原核表达载体 ,A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达 ,主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链 β2 微球蛋白和HLA_A2限制性HCMVpp6 5 495_50 3抗原肽 (NLVPMVATV ,NLV)存在时通过稀释法复性获得 ,以BirA对其进行生物素化 ,然后以阴离子交换树脂纯化 ,得到的纯化A2_NLV单体与Streptavidin_PE按 4 :0 8比例混合形成四聚体 ,结合程度在 85 %以上 ,流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA_A2 + 供者的特异性CTL结合活性。总之 ,这种简化的四聚体制备程序 ,不仅有利于该技术的推广 ,为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台。

关键词：人类白细胞抗原四聚体细胞毒T淋巴细胞包涵体人巨细胞病毒

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大鼠心脏异位移植模型的建立

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2003年第6期24卷 46-48页

作者：倪兴华曾耀英狄静芳何贤辉王青曾山冯铮王幼萍暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

　目的:为研究移植免疫建立大鼠心脏异位移植模型。方法:采用Ono's方法建立大鼠心脏异位移植模型,用大鼠的升主动脉和肺主动脉分别与大鼠的腹主动脉和下腔静脉作端侧吻合,同时使用两台单道心电图机描记受体双心和移植心脏的心电图... 详细信息

　目的:为研究移植免疫建立大鼠心脏异位移植模型。方法:采用Ono's方法建立大鼠心脏异位移植模型,用大鼠的升主动脉和肺主动脉分别与大鼠的腹主动脉和下腔静脉作端侧吻合,同时使用两台单道心电图机描记受体双心和移植心脏的心电图。结果:从2001年11月到2003月1月共进行了248例大鼠心脏异位移植,其中179例手术供受体均用SD大鼠;69例手术供体为SD大鼠,受体为Wistar大鼠。开始的56例同种移植手术时间超过3h,受体均死亡;随后的82例同种移植手术时间在80～150min,受体存活13例,但移植心脏复跳的只有3例;最后手术时间缩短至45～65min时,手术成功率达到85%。同种移植心脏存活时间为(57±33)d,异种移植心脏存活天数(未使用免疫抑制剂治疗)为(7±1 53)d。结论:缩短手术时间是提高心脏移植成功率的关键。

关键词：移植免疫心脏移植模型端侧吻合

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双氢青蒿素对小鼠T细胞的免疫抑制作用

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中国病理生理杂志 2010年第3期26卷 417-423页

作者：叶燕霞曾耀英黄秀艳陆晓宇曾祥凤王希朝暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 华南师范大学激光生命科学教育部重点实验室广东广州510631

目的:研究双氢青蒿素(DHA)在体外对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,探讨其可能的免疫作用机制。方法:加入不同浓度DHA,以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)诱导T细胞活化增殖,用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色法分析T细胞增殖... 详细信息

目的:研究双氢青蒿素(DHA)在体外对ConA诱导的小鼠T细胞增殖的影响,探讨其可能的免疫作用机制。方法:加入不同浓度DHA,以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)诱导T细胞活化增殖,用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色法分析T细胞增殖情况;利用流式细胞术(FCM)结合双色免疫荧光染色技术检测CD3+T细胞早、中、晚期活化标志CD69、CD25、CD71表达情况;用Fluo-4/AM荧光钙离子探针技术检测细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度的变化;以碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布;运用流式细胞术(FCM)结合三色荧光染色技术检测CD4+CD25highTreg早期活化抗原CD69表达情况。结果:CFDA-SE染色结果显示,DHA能有效抑制ConA诱导的T细胞增殖,并呈时间-剂量依赖性;DHA对ConA刺激的CD3+T细胞CD69、CD25的表达有促进作用,而对CD71的表达有抑制作用,均呈剂量依赖性;DHA单独作用不能引起T细胞[Ca2+]i的升高,在ConA的刺激下能引起[Ca2+]i浓度升高;PI染色流式分析结果显示,DHA阻滞细胞于G0/G1期,阻止细胞进入S期和G2/M期;DHA能够下调CD4+CD25highTreg细胞CD69的表达。结论:DHA对小鼠淋巴细胞的增殖有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。

关键词：双氢青蒿素免疫抑制 T淋巴细胞 CD4+CD25highTreg 流式细胞术

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MMP-2、TIMP-2和VEGF-C在肝细胞性肝癌中的表达及其与淋巴结转移关系的研究

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中国病理生理杂志 2005年第7期21卷 1336-1339页

作者：朱彩荣曾祥凤陈亚进陈积圣中山大学附属第二医院肝胆外科广东广州510120 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:本实验旨在探讨MMP-2、TIMP-2和VEGF-C与HCC淋巴结转移的关系,寻找诊断HCC淋巴结转移的指标,为HCC治疗方式选择提供有意义指导。方法:选取临床手术切除、病理确诊、石蜡包埋的HCC有/无淋巴结转移癌组织标本各22例,4μm厚连续切片,... 详细信息

目的:本实验旨在探讨MMP-2、TIMP-2和VEGF-C与HCC淋巴结转移的关系,寻找诊断HCC淋巴结转移的指标,为HCC治疗方式选择提供有意义指导。方法:选取临床手术切除、病理确诊、石蜡包埋的HCC有/无淋巴结转移癌组织标本各22例,4μm厚连续切片,用鼠抗人MMP-2单抗、TIMP-2单抗和兔抗人VEGF-C多抗,免疫组化SP法检测,并比较其在癌组织中的表达情况。结果:MMP-2、TIMP-2和VEGF-C在HCC有淋巴结转移组总阳性表达率分别为81.8%、13.6%和72.7%;在无淋巴结转移组则分别为54.5%、40.9%和36.4%。HCC有淋巴结转移组MMP-2和VEGF-C的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),而TIMP-2的阳性表达率则相反,低于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论:MMP-2和VEGF-C的过量表达及TIMP-2的低表达可能与HCC发生淋巴结转移有关;VEGF-C可能是促进HCC淋巴结转移的重要因素。联合检测MMP-2、TIMP-2和VEGF-C的表达情况可能对判断淋巴结转移和临床预后有重要价值。

关键词：癌,肝细胞明胶酶A 淋巴转移内皮生长因子

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HIV感染发病学的新概念

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河南中医学院学报 2005年第4期20卷 1-5页

作者：曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

AIDS的发病学目前仍在探索中。研究表明AIDS的发展取决于病毒和宿主的相互作用。AIDS的进程,也就是免疫缺陷的进程,将决定于CD4+T细胞的绝对数目减少的速率,而后者取决于病毒存在的数量和持续时间、CD4+T细胞的死亡易感性以及CD4+T细胞... 详细信息

AIDS的发病学目前仍在探索中。研究表明AIDS的发展取决于病毒和宿主的相互作用。AIDS的进程,也就是免疫缺陷的进程,将决定于CD4+T细胞的绝对数目减少的速率,而后者取决于病毒存在的数量和持续时间、CD4+T细胞的死亡易感性以及CD4+T细胞的补充速率等因素。AIDS的发展过程实质上是HIV对宿主免疫系统的不断破坏和宿主的免疫应答失去清除感染的HIV的动力学过程。

关键词：艾滋病 HIV感染发病机制免疫系统

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