检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2008年第10期28卷 899-903页

作者：贺芳曾耀英王通肇静娴臧宁林长乐暨南大学组织移植与免疫实验室广州510632

目的利用腺病毒系统研究HIV-1Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性。方法将表达目的蛋白Vpr的重组腺病毒rAd—vpr和空白载体病毒rAd—vector分别感染对数生长期的C8166细胞，流式细胞术（FCM）检测细... 详细信息

目的利用腺病毒系统研究HIV-1Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性。方法将表达目的蛋白Vpr的重组腺病毒rAd—vpr和空白载体病毒rAd—vector分别感染对数生长期的C8166细胞，流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布、凋亡和坏死。用Hoechst—PI荧光染色观察细胞的凋亡和坏死，JC-1荧光染色测定线粒体膜电势。结果An—nexinV—PI染色及Hoechst—PI染色一致显示HIV-1Vpr能显著诱导C8166细胞凋亡和坏死；PI细胞周期结果表明HIV-1Vpr能阻滞C8166细胞于G2期；JC—1荧光染色法测定HIV-1Vpr致C8166线粒体膜电势下降。结论细胞内HIV-1Vpr介导的T细胞毒性包括线粒体功能障碍、细胞周期的G2期阻滞和细胞的死亡。

关键词：重组腺病毒 HIV-1 Vpr C8166细胞细胞死亡

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可溶性三聚化CD40-异亮氨酸拉链融合蛋白的制备及鉴定

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生物工程学报 2006年第3期22卷 477-482页

作者：徐丽慧刘毅何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

以克隆的CD40cDNA为模板,经多步PCR构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6标签的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表达载体,在大肠杆菌中获得高效表达,分子量为27kD,与理论大小相符,表达产物主要存在于... 详细信息

以克隆的CD40cDNA为模板,经多步PCR构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6标签的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表达载体,在大肠杆菌中获得高效表达,分子量为27kD,与理论大小相符,表达产物主要存在于包涵体中,对包涵体蛋白进行稀释复性和纯化得到可溶性的sCD40IZ重组蛋白,该蛋白在溶液中的分子量为91kD,表明最有可能以三聚体形式存在。活性分析显示该蛋白能够与细胞上的CD40L结合,并且其结合活性与不含IZ基序的可溶性CD40相比明显提高。这些结果表明,在可溶性CD40羧基端融合IZ基序能够促进形成三聚体,并且具有增强的配基结合活性。

关键词： CD40,三聚化,异亮氨酸拉链,原核表达,包涵体复性

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基于聚苯胺纳米纤维复合膜界面构建电化学细胞传感器及其对癌细胞的识别检测

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分析化学 2012年第2期40卷 184-190页

作者：王辉汪甜叶燕霞张亚兴杨培慧蔡怀鸿蔡继业暨南大学化学系暨南大学药学院暨南大学组织移植与免疫实验中心光电信息与传感技术广东普通高校重点实验室(暨南大学)

合成了聚苯胺纳米纤维,直径在50～70 nm之间;基于静电作用构建聚苯胺纳米纤维-纳米金复合膜界面,并在此界面上层层组装修饰叶酸分子,构建叶酸功能化传感界面,基于叶酸分子与癌细胞表面过量表达的叶酸受体之间的特异性识别作用,将此传感... 详细信息

合成了聚苯胺纳米纤维,直径在50～70 nm之间;基于静电作用构建聚苯胺纳米纤维-纳米金复合膜界面,并在此界面上层层组装修饰叶酸分子,构建叶酸功能化传感界面,基于叶酸分子与癌细胞表面过量表达的叶酸受体之间的特异性识别作用,将此传感界面应用于对癌细胞的识别和捕获。结果表明:叶酸功能化传感界面能够特异性识别和捕获叶酸受体过量表达的癌细胞。采用电化学阻抗技术,以HeLa细胞为模型,应用于对癌细胞的识别和检测,细胞在1.0×104～6.4×106cells/mL浓度范围内与阻抗变化值ΔRct呈良好的线性关系;检出限为2000 cells/mL。本方法简单、快速灵敏、重现性和稳定性良好;制备的传感器可以再生使用。

关键词：细胞传感器聚苯胺纳米纤维纳米金癌细胞

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NK细胞对小鼠异基因骨髓移植造血及免疫重建的影响

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中华血液学杂志 2004年第12期25卷 713-716页

作者：杨志刚曾耀英何贤辉王青江逊暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

目的　研究自然杀伤 (NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)中对造血及免疫重建的影响。方法　以近交系小鼠C5 7BL/ 6 (H 2 b)为供鼠、BALB/c(H 2 d)为受鼠 ,在allo BMT同时输入供鼠外周T细胞和 (或 )NK细胞 ,计数受鼠移植后不同时... 详细信息

目的　研究自然杀伤 (NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)中对造血及免疫重建的影响。方法　以近交系小鼠C5 7BL/ 6 (H 2 b)为供鼠、BALB/c(H 2 d)为受鼠 ,在allo BMT同时输入供鼠外周T细胞和 (或 )NK细胞 ,计数受鼠移植后不同时间的白细胞数 ;用流式细胞仪检测骨髓CD34+ 细胞和外周淋巴细胞中CD3+ 和CD19+ 细胞及表达供鼠基因的H 2Kb + 细胞百分率 ,比较不同移植组存活率、植入水平、造血及免疫重建等。结果　输入供鼠外周NK细胞移植组与不输入NK细胞组比较 ,存活率显著增高 (6 0d存活率为 70 %vs 0 % ) ;白细胞计数、CD19+ 细胞及骨髓CD34+ 细胞计数恢复快 ;H 2Kb + 细胞表达水平高 (86 .6 8± 4 .4 5vs 4 .6 8± 0 .32 )。移植后第 2 8天 (+2 8天 )输入NK细胞组CD3+ 细胞水平 [(33.6 9± 3.36 ) % ]低于未输入NK细胞组 [(5 0 .4 0± 5 .0 6 ) % ](P <0 .0 1) ,在 +6 0天两组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　在小鼠allo BMT中 ,同种异基因反应性NK细胞可以提高造血干细胞的植入水平、促进造血及免疫重建、增高移植受鼠的生存率。

关键词： NK细胞免疫重建造血近交系小鼠异基因骨髓移植 BMT CD19 BALB/c 细胞水平细胞表达

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胸腺细胞和细胞器水平的线粒体膜电势研究

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分子细胞生物学报 2006年第2期39卷 132-138页

作者：王通曾耀英邢飞跃梁佩燕梁兆端贺芳暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510630

以地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡；利用PI和AnneXin V/PI流式细胞术分别检测细胞晚期和早期凋亡；利用JC-1和DiOC_6(3)/PI在细胞水平检测凋亡中线粒体膜电势(△ψm)变化：抽提线粒体,利用JC-1直接染色技术检测现存线粒体△ψm情况... 详细信息

以地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡；利用PI和AnneXin V/PI流式细胞术分别检测细胞晚期和早期凋亡；利用JC-1和DiOC_6(3)/PI在细胞水平检测凋亡中线粒体膜电势(△ψm)变化：抽提线粒体,利用JC-1直接染色技术检测现存线粒体△ψm情况。实验结果显示,DEX显著诱导胸腺细胞早期和晚期凋亡,凋亡细胞主要来自G_0/G_1期；细胞水平可见DEX介导与△ψm相关的J-aggregate和DiOC_6(3)可染性降低,同时介导线粒体数量显著降低,6h细胞膜完整性无显著变化：单纯线粒体检测结果显示,多数线粒体维持正常△ψm。提示,DEX介导胸腺细胞凋亡中线粒体数量降低,现存线粒体多保持着正常△ψm以维持凋亡过程细胞能量供给。

关键词：凋亡细胞水平线粒体膜电势单纯线粒体功能

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α-Galcer对小鼠NKT细胞超微结构的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第3期29卷 311-314页

作者：郭蓉姣黄秀艳梁兆端曾耀英暨南大学组织移植与免疫中心实验室广东广州510632

本实验观察在α-半乳糖神经鞘胺醇（α-Galcer）诱导下，小鼠NKT细胞超微结构的改变．分离小鼠脾脏单个核细胞，MTT法观察细胞对α-Galcer的药物敏感性，流式细胞术分选活化和未活化的NKT细胞，并用透射电镜观察NKT细胞超微结构．研究... 详细信息

本实验观察在α-半乳糖神经鞘胺醇（α-Galcer）诱导下，小鼠NKT细胞超微结构的改变．分离小鼠脾脏单个核细胞，MTT法观察细胞对α-Galcer的药物敏感性，流式细胞术分选活化和未活化的NKT细胞，并用透射电镜观察NKT细胞超微结构．研究发现在24h，50～100ng／mL的α-Galcer作用下，实验组NKT细胞的增殖活性显著高于对照组（P〈0．05）．流式细胞术结果显示实验组活化NKT细胞百分率明显高于对照组（P〈0．05）．电子显微镜观察显示，活化的NKT细胞呈典型细胞活化改变，凋亡的NKT细胞，核固缩，致密形成新月小体，核膜破裂，凋亡小体形成．说明α-Galeer可促使小鼠NKT细胞活化，且活化的NKT细胞产生大量分泌小泡．

关键词： NKT细胞 α-Galcer 流式细胞术超微结构

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重组腺病毒HIV-1 vpr基因的构建和表达

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免疫学杂志 2008年第1期24卷 86-89页

作者：贺芳曾耀英王通吴晓萍季煜华林长乐暨南大学组织移植与免疫实验室广州510632

目的构建携带HIV-1 vpr基因的重组腺病毒,使CD4+T淋巴细胞C8166内源性的高表达Vpr蛋白。方法利用AdEasy-1系统,通过将含有目的基因片段的穿梭载体pAdTrack-CMV-vpr和骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组的方法构建重组腺病毒质粒Ad... 详细信息

目的构建携带HIV-1 vpr基因的重组腺病毒,使CD4+T淋巴细胞C8166内源性的高表达Vpr蛋白。方法利用AdEasy-1系统,通过将含有目的基因片段的穿梭载体pAdTrack-CMV-vpr和骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组的方法构建重组腺病毒质粒Ad-vpr,用脂质体法将重组质粒转染至HEK293A细胞包装,获得重组腺病毒Ad-vpr,荧光显微镜观察Ad-vpr感染C8166细胞GFP的表达,Western blotting鉴定Vpr在C8166细胞内的特异性表达,流式细胞术检测Ad-vpr感染C8166细胞的效率。结果成功构建携带HIV-1vpr基因的重组腺病毒,Western blotting结果表明重组腺病毒Ad-vpr感染的C8166细胞内源性的高表达Vpr蛋白,流式细胞术检测结果表明Ad-vpr感染C8166细胞效率高(44.07±3.62)%。结论成功构建出携带HIV-1vpr基因的重组腺病毒,使C8166细胞内源性的高表达Vpr蛋白。

关键词：重组腺病毒 HIV-1 vpr基因 C8166细胞

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三氧化二砷诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化

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中国病理生理杂志 2008年第8期24卷 1600-1603页

作者：贺芳曾耀英王通肇静娴暨南大学组织移植与免疫实验室广东广州510632

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化特点。方法:以As2O3诱导Jurkat细胞凋亡为模型,利用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞凋亡和坏死,DiOC6(3)/PI染色流式细胞术检测线粒体膜电势(△ψm),壬基酚丫啶... 详细信息

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体的变化特点。方法:以As2O3诱导Jurkat细胞凋亡为模型,利用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞凋亡和坏死,DiOC6(3)/PI染色流式细胞术检测线粒体膜电势(△ψm),壬基酚丫啶橙(NAO)/PI染色流式细胞术检测线粒体质量,利用2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFH-DA)染色流式细胞术检测细胞内活性氧的变化。结果:在4×10-6mol/LAs2O3诱导下,Jurkat细胞在48h凋亡比率为(18.98±1.40)%,对照组为(5.17±0.80)%,组间差异显著(P<0.01);As2O3组坏死比率为(8.56±0.70)%,对照组为(1.53±0.55)%,组间差异显著(P<0.01)。As2O3组在48h时点的线粒体膜电势低于对照组(P<0.05),线粒体膜电势下降的Jurkat细胞比率分别为(23.07±3.62)%和(6.63±1.46)%。同时Jurkat细胞As2O3组线粒体质量显著低于对照组(P<0.01),线粒体质量下降的细胞比率分别为(25.90±1.80)%和(6.37±1.04)%。As2O3组自由基产生明显高于对照组(P<0.01),DCFDA平均荧光强度分别为24.41±0.75和17.06±0.48。结论:As2O3诱导Jurkat细胞凋亡过程中,线粒体膜电势和质量均下降,细胞内氧自由基水平升高。

关键词：三氧化二砷 Jurkat细胞细胞凋亡线粒体

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活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第2期19卷 109-111页

作者：肇静娴曾耀英何贤辉王南狄静芳曾山暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB +ion omycin或C... 详细信息

目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB +ion omycin或ConA刺激 4 8h后均出现淋巴细胞分裂 ,表现为CFSE荧光强度的系列减半。环孢菌素A(CsA)可抑制ConA促进淋巴细胞增殖的作用 ,CFSE荧光无减半。ConA刺激4 8h后 ,出现CD4 + T细胞和CD8+ T细胞增殖不同步的现象 ,72h后这一现象更加明显。经ModFitTM 软件拟合后 ,得到的各项增殖指标显示 ,ConA对CD8+ T细胞的促增殖作用强于对CD4 + T细胞的作用。结论 :CFDA SE染色结合荧光抗体标记和流式细胞术。

关键词：活体染料羧基荧光素乙酰乙酸 CFDA-SE 淋巴细胞细胞增殖荧光抗体标记流式细胞术

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雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用

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中药材 2005年第6期28卷 499-502页

作者：俞瑜曾耀英刘良季煜华肇静娴暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(C... 详细信息

目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RTPCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL2、IFNγmRNA的表达的影响。结果TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL2及IFNγmRNA的表达。结论TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一。

关键词：雷公藤甲素小鼠体外活化 IFN-γmRNA表达 RT-PCR技术免疫抑制作用流式细胞仪检测 CD69 IL-2 CD25 细胞因子表达活化标志 T淋巴细胞分子药理学淋巴结细胞 T细胞活化 TRD 无菌分离不同浓度刀豆蛋白单克隆体荧光标记

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