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第四军医大学学报 2006年第13期27卷 1163-1165页

作者：曾祥凤曾耀英李海仙林长乐赵令斋李莉平肇静娴暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨穿琥宁粉针剂在体外是否具有抗H IV作用.方法:采用荧光染料Calc ien AM标记H IV感染的慢性H9细胞(H9/H IV-1ⅢB)与不同稀释浓度的穿琥宁药物作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/H IV-1ⅢB融合细胞的变化;MTT法检测... 详细信息

目的:探讨穿琥宁粉针剂在体外是否具有抗H IV作用.方法:采用荧光染料Calc ien AM标记H IV感染的慢性H9细胞(H9/H IV-1ⅢB)与不同稀释浓度的穿琥宁药物作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/H IV-1ⅢB融合细胞的变化;MTT法检测穿琥宁对H IV感染细胞的保护作用;H IV-1P24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清P24抗原含量的变化.结果:穿琥宁粉针剂能够抑制MT-2和H9/H IV-1ⅢB细胞融合(其抑制融合的EC50为5.49 mg/L,选择指数SI为327.6);能够保护H IV感染细胞的死亡(EC50为64.57 mg/L,SI为27.85)和减少HIV-1 P24抗原的表达(EC50为194.67 mg/L,SI为9.23).结论:穿琥宁粉针剂在体外具有抗HIV-1的作用.

关键词：穿琥宁粉针剂艾滋病病毒细胞融合钙黄绿素

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腺病毒介导ERK-2基因在生长板软骨细胞中的表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第4期27卷 503-508页

作者：季煜华曾耀英邢飞跃俞瑜王会营江颖娟暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:构建ERK-2基因重组腺病毒载体,检测构建的腺病毒感染原代大鼠生长板软骨细胞的效率以及目的基因的表达。方法:将ERK-2 cDNA亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转染***.i B J5183,将筛选... 详细信息

目的:构建ERK-2基因重组腺病毒载体,检测构建的腺病毒感染原代大鼠生长板软骨细胞的效率以及目的基因的表达。方法:将ERK-2 cDNA亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转染***.i B J5183,将筛选、鉴定的重组腺病毒质粒线性化后转染HEK293细胞进行病毒颗粒的包装;流式细胞术检测不同感染复数(MO I)ERK-2重组腺病毒感染原代培养的大鼠肋生长板软骨细胞的效率,W estern b lot检测腺病毒感染的生长板软骨细胞中ERK-2蛋白的表达。结果:成功构建ERK-2重组腺病毒,MO I 50的腺病毒感染原代生长板软骨细胞的效率大于90%,感染的生长板软骨细胞中ERK-2表达显著增加。结论:构建的重组腺病毒可介导ERK-2基因在原代大鼠生长板软骨细胞中高表达。

关键词： ERK-2基因生长板软骨细胞腺病毒

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脾脏在不同种类动物前房相关免疫偏离诱导和维持中的作用

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眼科学报 1999年第4期15卷 221-224,237页

作者：李志杰彭广华李辰暨南大学组织移植与免疫实验中心眼科学教研室广州510632

目的:脾脏在小鼠前房相关免疫偏离(anterior chamber-associated immune deviation,ACAID)的诱导中起着重要的作用。在前房接种抗原4天内摘除脾脏可以消除免疫偏离而导致免疫反应。本研究旨在观察脾脏在其他种类动物ACAID的诱导和维持... 详细信息

目的:脾脏在小鼠前房相关免疫偏离(anterior chamber-associated immune deviation,ACAID)的诱导中起着重要的作用。在前房接种抗原4天内摘除脾脏可以消除免疫偏离而导致免疫反应。本研究旨在观察脾脏在其他种类动物ACAID的诱导和维持中的作用。方法:在脾脏切除和假性脾脏切除后,使用牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)作为可溶性抗原分别接种于Wistar大鼠、新西兰白兔和猕猴的眼前房。使用BSA和完全弗氏佐剂混合乳剂免疫动物。通过抗原刺激皮肤测定抗原特异性迟发型超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH),并定时评估免疫偏离的维持时间。结果:假性脾脏切除眼内抗原接种组和脾脏切除眼内抗原接种组所有动物均显示抗原特异性DTH抑制,且维持时间无显著差异。相反,单纯假脾脏切除组和单纯脾脏切除组动物均显示阳性抗原特异性DTH反应。结论:脾脏对于大鼠、兔和灵长目动物ACAID的诱导和维持不具有重要作用。这些发现提示随着进化程度的进阶,脾脏的功能可能被其他的淋巴器官所代替。眼科学报1999;15:221-224。

关键词：免疫郝免前房免疫偏离迟发型超敏反应脾脏

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喜树碱诱导的HL-60细胞凋亡过程中线粒体的变化

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 144-147页

作者：贺芳曾耀英王通邢飞跃林羿梁佩燕肇静娴暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:研究喜树碱(CPT)诱导的人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60凋亡过程中线粒体的质量和膜电势的变化。方法:以CPT诱导HL-60细胞凋亡为模型,利用膜联蛋白V(annexinV)-FITC/PI双染流式细胞术,研究HL-60细胞的凋亡和坏死。用DiOC6(3)染色流... 详细信息

目的:研究喜树碱(CPT)诱导的人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60凋亡过程中线粒体的质量和膜电势的变化。方法:以CPT诱导HL-60细胞凋亡为模型,利用膜联蛋白V(annexinV)-FITC/PI双染流式细胞术,研究HL-60细胞的凋亡和坏死。用DiOC6(3)染色流式细胞术,检测线粒体的膜电势(△ψm)。用NAO染色流式细胞术,检测线粒体的质量。结果:在4×10-6mol/LCPT的诱导下,HL-60细胞(12h)早期的凋亡率为(12.75±4.61)%,对照组为(2.88±2.49)%,二者相比较差异显著(P<0.01);CPT组坏死比率为(3.48±1.67)%,对照组为(0.71±1.10)%(P<0.01)。PI染色的结果显示,HL-60细胞(12h)晚期凋亡细胞的百分率,CPT组为(3.52±1.07)%,对照组为(0.46±1.06)%(P<0.01)。同时观察到,G2/M期细胞出现阻滞,G2/M期细胞的百分率,对照组为(22.46±2.19)%,CPT组为(13.45±1.91)%(P<0.01)。在12h时间点,CPT组线粒体的质量显著低于对照组(P<0.01),低线粒体质量的细胞所占百分率,对照组为(4.53±1.26)%,CPT组为(25.74±2.09)%。同时,CPT组线粒体的膜电势显著下降(P<0.01),CPT组线粒体膜电势降低的比率为(17.71±5.23)%,对照组为(1.64±2.00)%。结论:CPT诱导HL-60细胞凋亡过程中,线粒体的质量和膜电势均有所下降,但其去极化作用增强。

关键词：喜树碱人HL-60细胞凋亡线粒体

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妊娠激素对HIV-1体外感染MT-2细胞及复制的影响

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哈尔滨医科大学学报 2006年第1期40卷 6-9页

作者：李海仙曾耀英曾祥凤肇静娴王通林羿暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的研究妊娠激素对HIV-1体外感染MT-2细胞及复制的影响。方法检测终浓度为1×106U/L的重组人绒毛膜促性腺激素(hCG)和终浓度为10-7mol/L(相当于妇女分泌期外周血水平)、10-6mol/L(相当于妊娠妇女外周血水平)和10-5mol/L(相当于母... 详细信息

目的研究妊娠激素对HIV-1体外感染MT-2细胞及复制的影响。方法检测终浓度为1×106U/L的重组人绒毛膜促性腺激素(hCG)和终浓度为10-7mol/L(相当于妇女分泌期外周血水平)、10-6mol/L(相当于妊娠妇女外周血水平)和10-5mol/L(相当于母胎界面局部浓度)的雌二醇(E2)和孕酮(P4)对HIV-1介导荧光标记的HIV-1ⅢB/H9与未标记荧光的MT-2细胞融合的影响;ELISA法检测感染HIV的MT-2细胞培养上清p24抗原含量来探讨妊娠激素对HIV-1复制的影响。结果10-5mol/L的E2和P4可以明显抑制HIV-1介导的细胞融合,合胞体形成数分别为14.87±2.18和16.52±3.20,与对照组(28.93±4.22)比较有极显著性差异(P<0.01),hCG和10-6mol/L的E2也能抑制HIV-1ⅢB/H9和MT-2细胞的融合,融合数分别为22.18±3.87和24.16±4.25,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。hCG及10-5mol/L E2和P4能明显降低感染细胞培养上清中p24抗原含量,依次为(42.61±2.97)pg/ml(、44.28±3.42)pg/ml和(45.37±2.88)pg/ml,与对照组(57.22±3.10)pg/ml比较有显著性差异(P<0.05)。结论妊娠激素hCG、E2和P4体外可以抑制HIV-1感染MT-2细胞及在其内复制。

关键词：妊娠激素人类免疫缺陷病毒细胞融合复制

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小鼠NKT细胞体外扩增的初步研究

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哈尔滨医科大学学报 2007年第6期41卷 541-543页

作者：郭蓉姣黄秀艳梁兆端曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术... 详细信息

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术和流式细胞术(FACS)检测NKT细胞纯度,并用MTT法检测其对靶细胞K562的杀伤活性。结果脾NKT细胞在第0、4、8、12天计数细胞总数为0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107和(2.2±0.2)×107,第0、4、8、12天纯度分别为(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%和(21.36±4.34)%;α-Gal-cer和rhIL-2作用下,纯化的NKT细胞较脾新鲜分离的单个核细胞对靶细胞K562的杀伤作用强。在效靶比20∶1时,培养时间为4、8,12天的NKT细胞杀伤率分别为52.7%、71.2%和85.7%,明显高于脾MNC33.8%(P<0.05)。结论在α-Galcer和rhIL-2作用下,小鼠NKT细胞得到扩增,细胞纯度约为22%。在效靶比20∶1时,NKT细胞对K562细胞杀伤率约为86%。

关键词： NKT细胞 α-Galcer IL-2

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CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第2期20卷 135-139页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦... 详细信息

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞 2 4h后 ,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为 16%。表达的融合蛋白主要分布于胞内 ,细胞膜上分布较少。相反 ,转染空载体的细胞仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。以佛波醇酯加离子霉素刺激后 ,CTLA4 EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到 2 9% ,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合 ;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变。结论 :成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K562细胞中得到表达。

关键词： CTLA4 绿色荧光蛋白融合蛋白共聚焦显微术

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人PD-L1 cDNA的克隆及其胞外区蛋白在大肠杆菌中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 659-663页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表... 详细信息

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果 :克隆到PD L1cDNA编码区的全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。同时构建了在羧基端带有His6标签的PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。免疫印迹分析表明 ,在IPTG诱导后表达的PD L1胞外区蛋白 ,相对分子质量 (Mr)为 2 50 0 0 ,与理论值的大小相符。该重组蛋白能与抗His6标签的单抗 (mAb)特异性反应。结论 :成功地克隆PD L1基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为利用PD L1转基因修饰移植物或以PD

关键词： PD-L1 cDNA克隆淋巴细胞重组蛋白

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小鼠同种异基因皮肤移植模型的建立

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2005年第2期26卷 221-223页

作者：刘德许曾耀英狄静芳王曦林弈季煜华暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:为移植免疫及药物免疫机理研究建立小鼠同种异基因皮肤移植动物模型。方法:受体BALB/c分为A～E共5组,即对照组,5 0、7 5、10、2 0mg/kg环孢菌素A(CsA)剂量组,通过背-背法进行C5 7BL/ 6的全厚皮皮片移植,以探求通过较小剂量CsA及... 详细信息

目的:为移植免疫及药物免疫机理研究建立小鼠同种异基因皮肤移植动物模型。方法:受体BALB/c分为A～E共5组,即对照组,5 0、7 5、10、2 0mg/kg环孢菌素A(CsA)剂量组,通过背-背法进行C5 7BL/ 6的全厚皮皮片移植,以探求通过较小剂量CsA及优化实验条件和护理方式建立供免疫机理研究的动物试验平台。结果:5 0、7 5、10mg/kg组相对于对照组皮片排斥时间无明显差别,而2 0mg/kg组植皮能较长时间存活。结论:2 0mg/kg的CsA剂量可以经济。

关键词：同种异基因皮片移植环孢菌素A

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重组人bFGF的原核表达及其高效价抗血清的制备

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免疫学杂志 2005年第3期21卷 186-189页

作者：徐丽慧洪岸何贤辉汪炬暨南大学生物工程研究所暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

目的以重组人碱性成纤维生长因子为免疫原,制备高效价抗hbFGF抗血清。方法通过PCR方法改造5’编码区的12个密码子,构建hbFGF原核表达载体并在大肠杆菌(***)中表达,以纯化的hbFGF免疫新西兰兔,制备高效价抗血清,用于重组hbFGF的免疫印迹... 详细信息

目的以重组人碱性成纤维生长因子为免疫原,制备高效价抗hbFGF抗血清。方法通过PCR方法改造5’编码区的12个密码子,构建hbFGF原核表达载体并在大肠杆菌(***)中表达,以纯化的hbFGF免疫新西兰兔,制备高效价抗血清,用于重组hbFGF的免疫印迹分析。结果经过改造的hbFGF基因在***中获得较高水平表达。从可溶性部分纯化得到纯度95%以上的重组hbFGF,以该重组蛋白免疫兔子,在二次加强后以间接ELISA检测抗血清效价可达1∶512000。免疫印迹分析显示该抗血清与***中表达的重组hbFGF和标准hbFGF均有特异性反应,但与某些细菌蛋白存在弱交叉反应,经***菌体蛋白吸附的抗血清,与菌体蛋白的弱交叉反应消失。结论以纯化的重组hbFGF为免疫原制备了高效价的特异性抗血清,经菌体蛋白吸附可消除存在的交叉反应性。

关键词：碱性成纤维生长因子可溶性表达抗血清交叉反应性

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