检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2006年第5期26卷 471-475页

作者：王会营曾耀英季煜华邢飞跃暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的利用带有ERK-2基因的腺病毒载体感染成角质细胞系HaCaT,探讨ERK信号途径在EGF对HaCaT细胞增殖影响中的作用。方法用3H-TdR掺入法检测HaCaT细胞增殖及PD98059对EGF促HaCaT细胞增殖的影响。腺病毒载体转染HaCaT细胞,流式细胞仪检测转... 详细信息

目的利用带有ERK-2基因的腺病毒载体感染成角质细胞系HaCaT,探讨ERK信号途径在EGF对HaCaT细胞增殖影响中的作用。方法用3H-TdR掺入法检测HaCaT细胞增殖及PD98059对EGF促HaCaT细胞增殖的影响。腺病毒载体转染HaCaT细胞,流式细胞仪检测转染率,W estern b lot检测ERK-2蛋白的表达。结果1μg/L和10μg/L EGF可促进HaCaT细胞增殖,而100μg/L EGF促增殖作用反下降。PD98059抑制EGF引起的HaCaT细胞增殖,且具有浓度依赖性。腺病毒载体具有高转染率,感染Ad-ERK2的HaCaT细胞高表达ERK-2。EGF抑制转染的HaCaT细胞增殖。结论ERK信号途径在EGF促HaCaT细胞增殖中具有双向调节作用。

关键词： ERK EGF 腺病毒载体 HaCaT 增殖

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NOD/SCID孕鼠淋巴细胞表型检测和NK细胞活性分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第10期25卷 781-785页

作者：林羿王通狄静芳曾山黄锦桃冯铮曾耀英暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 中山大学组织学与胚胎学教研室

目的观察NOD/SCID小鼠免疫状况和生育力特征,并分析NK细胞亚群对同基因交配组合NOD/SCID×NOD/SCID妊娠结局的影响。方法采用流式细胞术对未孕和孕13.5 d的NOD/SCID小鼠进行淋巴细胞表型分析,并系统地观察和比较NOD/SCID×NOD/S... 详细信息

目的观察NOD/SCID小鼠免疫状况和生育力特征,并分析NK细胞亚群对同基因交配组合NOD/SCID×NOD/SCID妊娠结局的影响。方法采用流式细胞术对未孕和孕13.5 d的NOD/SCID小鼠进行淋巴细胞表型分析,并系统地观察和比较NOD/SCID×NOD/SCID和BALB/c×BALB/c小鼠的生育力特征。分别采用多聚次黄苷酸-胞苷酸(polyinosinic-polycytidylic acid,poly I∶C)或抗asialoGM1单抗(anti-asialo GM1)刺激或抑制NK细胞活性,并分别观察这些因素对妊娠结局的影响。结果与对照组NOD/SCID小鼠相比,poly I∶C处理组NOD/SCID×NOD/SCID小鼠平均每窝产仔数增多,而注射抗asialo GM1单抗则使胚胎吸收率增高,进而平均每窝产仔数显著减少。结论在NOD/SCID小鼠孕期母-胎界面保持适当水平的NK细胞活性对妊娠结局有利。

关键词：流产动物模型细胞表面标志物免疫耐受

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T细胞识别同种异型移植抗原的研究进展

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中国免疫学杂志 2004年第3期20卷 149-152页

作者：曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

移植是末期组织、器官功能衰竭最彻底的治疗措施.同种异体移植(allogeneic transplantation)是临床最常见的移植类型.在本质上,人类的同种异体移植排斥反应是由受者的T细胞介导的、针对移植抗原的免疫应答.这一免疫应答是通过受者T细胞... 详细信息

移植是末期组织、器官功能衰竭最彻底的治疗措施.同种异体移植(allogeneic transplantation)是临床最常见的移植类型.在本质上,人类的同种异体移植排斥反应是由受者的T细胞介导的、针对移植抗原的免疫应答.这一免疫应答是通过受者T细胞表面的T细胞受体(T cell receptor,TCR)识别移植物细胞的同种异型抗原引发的.受者T细胞可以通过直接识别(direct recognition)和间接识别(indirect recognition)移植物细胞的同种异型MHC分子而被激活.在移植免疫领域里,有些问题一直困扰着学者们,近年的研究进展使这些问题在一定程度上得到阐明.

关键词： T细胞同种异型移植抗原免疫应答 T细胞受体 TCR 移植物基因编码

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小鼠派氏集合淋巴结T细胞活化和调节性T细胞的分析

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中国病理生理杂志 2006年第3期22卷 537-542页

作者：黄秀艳曾耀英肇静娴王通暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:通过对小鼠派氏集合淋巴结(PPs)、肠系膜淋巴结(MLNs)和腹股沟淋巴结(ILNs)的比较性研究,以分析PPsT细胞活化和调节性T细胞的功能特点。方法:无菌分离小鼠PPs、MLNs和ILNs,分别制备单个淋巴细胞悬液,运用流式细胞术结合荧光抗体染... 详细信息

目的:通过对小鼠派氏集合淋巴结(PPs)、肠系膜淋巴结(MLNs)和腹股沟淋巴结(ILNs)的比较性研究,以分析PPsT细胞活化和调节性T细胞的功能特点。方法:无菌分离小鼠PPs、MLNs和ILNs,分别制备单个淋巴细胞悬液,运用流式细胞术结合荧光抗体染色技术来检测CD3+T细胞、CD3+CD4+辅助性T细胞和CD4+CD25+调节性T细胞的比例;用多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)、佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)刺激活化淋巴细胞,随后运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术来检测T细胞早期活化标志CD69的表达水平。结果:PPs内CD3+T细胞所占比例明显低于MLNs和ILNs,然而CD4+CD25+调节性T细胞的比例明显高于MLNs和ILNs;在没有加入刺激剂的培养条件下,PPs来源的T细胞CD69的表达水平明显高于MLNs和ILNs来源的T细胞,MLNs来源的T细胞CD69的表达水平明显高于ILNs来源的T细胞;而在加入ConA或者单纯PDB的培养条件下,PPs来源的T细胞却表现出低反应性;在加入PDB+Ion的培养条件下,3者来源的T细胞CD69的表达水平没有明显差别。结论:PPs内CD3+T细胞所占比例较低,CD4+CD25+调节性T细胞的比例较高,这可能是PPs整体T细胞低反应性的原因之一;PPs来源T细胞的高基础活化率可能与其不断接触小肠来源的食物和共生菌抗原有关;PPs来源T细胞选择性地对某些刺激剂表现出低反应性,提示这群细胞处于某种程度的无能状态。上述特征的生物学意义在于避免因为不断接受小肠来源的食物和共生菌抗原的刺激而发生病理性炎症的同时还保留对病原微生物抗原的应答。

关键词：淋巴集结 T淋巴细胞淋巴细胞转化小鼠

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阻断p38途径对地塞米松诱导的胸腺细胞凋亡的影响

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第三军医大学学报 2006年第16期28卷 1667-1670页

作者：王通曾耀英何贤辉邢飞跃梁佩燕贺芳暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510630

目的研究阻断p38途径对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导的胸腺细胞凋亡的影响。方法WesternBlott检测DEX对p38途径的阻断作用。以SB203580(SB)阻断BALB/c小鼠胸腺细胞p38途径,在3、5和7h,利用An-nexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;利用DiOC6(3)/PI双染流式细胞术检测线粒体膜电势(△ψm)和细胞膜完整性变化。结果DEX显著减少了胸腺细胞p38蛋白含量;阻断p38后DEX诱导小鼠胸腺细胞晚期凋亡率显著增加(P<0.01);DEX诱导了胸腺细胞△ψm降低,同时阻断p38途径后,DiOC6(3)阴性PI阳性细胞显著增多(P<0.01)。结论阻断p38后加速了DEX介导的小鼠胸腺细胞凋亡中细胞膜完整性的破坏,该现象可能与线粒体功能有关。

关键词： p38 胸腺细胞细胞膜完整性线粒体

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自然杀伤细胞对小鼠异基因骨髓移植中移植物抗宿主病效应的影响

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第二军医大学学报 2005年第3期26卷 267-270页

作者：杨志刚曾耀英王通江逊王青暨南大学组织移植与免疫学教育部重点实验室

目的:研究自然杀伤细胞(NK)在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)的影响。方法:以近交系小鼠C57BL/6 (H 2b)为供鼠、BALB/c (H 2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和(或)NK细胞进行异基因骨髓移植,根据临床表现和病理检查,... 详细信息

目的:研究自然杀伤细胞(NK)在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)的影响。方法:以近交系小鼠C57BL/6 (H 2b)为供鼠、BALB/c (H 2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和(或)NK细胞进行异基因骨髓移植,根据临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率和GVHD发生情况。结果:增加1×106供鼠NK细胞的移植组中40%小鼠出现GVHD,增加2×106 供鼠NK细胞的移植组中仅30%出现GVHD;与单纯异基因骨髓移植组(80%急性GVHD、20%慢性GVHD)和骨髓+T细胞组(100%急性GVHD)比较,GVHD发生率显著下降(P<0.01),30、60 和120 d存活率显著增高(P<0.01)。结论:在小鼠异基因骨髓移植中,同种异基因反应性NK细胞可抑制GVHD效应,延长存活期。

关键词：自然杀伤细胞骨髓移植移植物抗宿主病

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细胞外信号调节激酶1/2的阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞增殖的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第2期23卷 102-105页

作者：滕振平邢飞跃王通李莉平暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的特异性阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞体外增殖的影响。方法分离小鼠淋巴结细胞,藉羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,用多克隆刺激剂刀豆A蛋白(ConA)或者佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺... 详细信息

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的特异性阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞体外增殖的影响。方法分离小鼠淋巴结细胞,藉羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,用多克隆刺激剂刀豆A蛋白(ConA)或者佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激,以流式细胞术分析PD98059对淋巴细胞增殖的影响;利用碘化丙锭(PI)染色分析PD98059对细胞周期的影响。结果CFDA-SE染色分析显示,当浓度为5、10、20、30、40μmol/L时,PD98059对ConA诱导的淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用,并呈现明显的剂量依赖关系(r=0.985,P<0.01)。选择最佳浓度30μmol/L的PD98059,观察其对不同时间淋巴细胞增殖的影响,结果发现,随着时间的延长,PD98059对淋巴细胞增殖的抑制作用明显降低(P<0.01),但抑制率随时间的延长而明显升高。细胞周期分析进一步表明,PD98059可阻止ConA刺激的淋巴细胞进入S期和G2/M期,而亚二倍体峰变化并不明显。PD98059对PDB+Ion刺激的淋巴细胞细胞周期的影响与ConA刺激相似,不同的是S期和G2/M期的变化较ConA的作用更明显。结论PD98059对小鼠淋巴细胞的增殖有明显地抑制作用,并可阻止其进入S期和G2/M期,提示ERK1/2信号通路的活化在淋巴细胞增殖中起重要作用。

关键词：细胞外信号调节激酶1/2 淋巴细胞增殖细胞周期

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人β_2-微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

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生物工程学报 2004年第1期20卷 99-103页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅曾耀英组织移植与免疫教育部重点实验室(暨南大学) 广州510632

β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大... 详细信息

β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大肠杆菌中得到高效表达。表达的β2 m大部分在包涵体中 ,经洗涤、变性和复性 ,并以强阴离子交换柱层析纯化 ,获得SDS PAGE纯的人重组 β2 m ,Western印迹法分析表明该蛋白具有与抗人天然 β2 m抗体反应的特性。此工作为制备MHCⅠ类分子四聚体奠定基础。

关键词： β2-微球蛋白基因克隆大肠杆菌表达基因克隆重组蛋白包涵体

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酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制Jurkat T细胞增殖

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第3期26卷 214-217页

作者：毛成全邢飞跃郭中峰方志远暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响,探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制。方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat ... 详细信息

目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响,探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制。方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat T细胞表面分子CD69和CD25表达的影响;利用噻唑蓝(MTT)比色法观察AG490对Jurkat T细胞增殖的影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测AG490对Jur-kat T细胞周期的影响;应用Annexin V-FITC和PI双染色检测AG490对Jurkat T细胞凋亡的影响;Western blot检测AG490对Jurkat T细胞中ICBP90蛋白表达的影响以确定其与AG490抑制Jurkat T细胞增殖的关系。结果:随着AG490浓度从1 mmol/L增至30 mmol/L,细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期和G2/M期,导致Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达显著降低;AG490对细胞的抑制作用于24 h最为明显,抑制率可达27.37%,呈剂量依赖关系;AG490不能明显抑制Jurkat T细胞的活化或促进其凋亡。结论:AG490能明显抑制Jurkat T细胞的生长,其抑制作用可能通过下调Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达与细胞周期阻滞有关,而不是通过促进细胞凋亡而实现。

关键词： AG490 Jurkat T细胞增殖周期 ICBP90

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人EGF受体L2结构域在大肠杆菌中表达、包涵体柱上复性及纯化

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生物工程学报 2005年第4期21卷 597-603页

作者：徐丽慧洪岸何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 暨南大学生物工程研究所

以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码EGFR_L2结构域的DNA片段,在其3′端加入编码His6标签的序列,与pET_3c连接构建EGFR_L2原核表达载体。该蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,免疫印迹分析表明表达产物全部以包涵体形式存在... 详细信息

以PCR方法从克隆的EGFR胞外区cDNA中扩增编码EGFR_L2结构域的DNA片段,在其3′端加入编码His6标签的序列,与pET_3c连接构建EGFR_L2原核表达载体。该蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,免疫印迹分析表明表达产物全部以包涵体形式存在,分步透析法和稀释法都不能获得可溶性复性产物,而Ni2+_NTA柱上复性法不仅能够获得可溶性的EGFR_L2蛋白,而且产物同时得到高度纯化,纯度>95%,复性的EGFR_L2与其配基EGF具有特异性的结合活性,但亲和力较低。这表明His6标签不但便于纯化目标蛋白,而且可利用Ni2+_NTA柱进行柱上复性,适用于不易通过常规方法复性的重组蛋白的制备。

关键词：表皮生长因子受体 L2结构域原核表达包涵体重折叠

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