检索结果-内蒙古大学图书馆

中华风湿病学杂志 2005年第5期9卷 284-287页

作者：陈光星刘良赵诗哲刘清平童娟简任佑曾耀英陈纪藩广州中医药大学第一附属医院六内科风湿专科 510405 香港浸会大学中医药学院暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的研究青藤碱对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症,滑膜增生、凋亡及突变型p53的影响,揭示青藤碱抗类风湿关节炎(RA)可能的作用途径。方法采用牛Ⅱ型胶原混合弗氏不完全佐剂于W istar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组... 详细信息

目的研究青藤碱对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症,滑膜增生、凋亡及突变型p53的影响,揭示青藤碱抗类风湿关节炎(RA)可能的作用途径。方法采用牛Ⅱ型胶原混合弗氏不完全佐剂于W istar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组、甲氨蝶呤(M TX)治疗组和青藤碱(SIN O)治疗组,采用容积法和计分法分别评价后肢肿胀度和四肢关节炎症程度;左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(H E)染色,评价中性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜细胞增生和纤维组织增生的情况;对足肿胀和病理各项指标进行回归性分析。碱性磷酸酶标记法检测大鼠滑膜细胞凋亡;免疫组织化学法检测突变型p53的表达。比较M TX和SINO灌胃治疗后各项指标的差异。结果CIA大鼠造模后,炎症迅速发展,1周内即可达到肿胀高峰,然后逐渐消退,在第21～25天后又出现第2个炎症高峰。药物治疗17d后抑制CIA肢炎症的作用逐渐显现出来。M TX和SIN O都可明显抑制第2个炎症高峰,后肢肿胀度和四肢肿胀积分在35d与造模加生理盐水组差异有统计学意义(P<0.01);病理结果中,CIA大鼠关节表现为单个核炎症细胞浸润(包括中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞的浸润),滑膜细胞增生、纤维组织增生;足肿与淋巴细胞浸润,滑膜增生呈直线回归关系,其中以滑膜增生为主(P<0.

关键词：滑膜细胞增殖青藤碱影响的研究突变型p53 滑膜细胞增生滑膜细胞凋亡 CIA大鼠胶原诱导型关节炎纤维组织增生抗类风湿关节炎弗氏不完全佐剂免疫组织化学法生理盐水组中性粒细胞滑膜增生 Wistar 苏木素-伊红炎症细胞浸润

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NK细胞对小鼠异基因骨髓移植造血及免疫重建的影响

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中华血液学杂志 2004年第12期25卷 713-716页

作者：杨志刚曾耀英何贤辉王青江逊暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

目的　研究自然杀伤 (NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)中对造血及免疫重建的影响。方法　以近交系小鼠C5 7BL/ 6 (H 2 b)为供鼠、BALB/c(H 2 d)为受鼠 ,在allo BMT同时输入供鼠外周T细胞和 (或 )NK细胞 ,计数受鼠移植后不同时... 详细信息

目的　研究自然杀伤 (NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)中对造血及免疫重建的影响。方法　以近交系小鼠C5 7BL/ 6 (H 2 b)为供鼠、BALB/c(H 2 d)为受鼠 ,在allo BMT同时输入供鼠外周T细胞和 (或 )NK细胞 ,计数受鼠移植后不同时间的白细胞数 ;用流式细胞仪检测骨髓CD34+ 细胞和外周淋巴细胞中CD3+ 和CD19+ 细胞及表达供鼠基因的H 2Kb + 细胞百分率 ,比较不同移植组存活率、植入水平、造血及免疫重建等。结果　输入供鼠外周NK细胞移植组与不输入NK细胞组比较 ,存活率显著增高 (6 0d存活率为 70 %vs 0 % ) ;白细胞计数、CD19+ 细胞及骨髓CD34+ 细胞计数恢复快 ;H 2Kb + 细胞表达水平高 (86 .6 8± 4 .4 5vs 4 .6 8± 0 .32 )。移植后第 2 8天 (+2 8天 )输入NK细胞组CD3+ 细胞水平 [(33.6 9± 3.36 ) % ]低于未输入NK细胞组 [(5 0 .4 0± 5 .0 6 ) % ](P <0 .0 1) ,在 +6 0天两组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　在小鼠allo BMT中 ,同种异基因反应性NK细胞可以提高造血干细胞的植入水平、促进造血及免疫重建、增高移植受鼠的生存率。

关键词： NK细胞免疫重建造血近交系小鼠异基因骨髓移植 BMT CD19 BALB/c 细胞水平细胞表达

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小檗碱对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响

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中国免疫学杂志 2004年第10期20卷 687-692页

作者：杜丽蕊何贤辉徐丽慧曾耀英王青暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

目的 :分析小檗碱 (Ber)对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响 ,探讨其免疫抑制作用的机制。方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,以CFSE染色 ,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白 (ConA)或者佛波醇酯 (PDB)和离子霉素 (Ion)进行刺激 ,以流式细胞仪分... 详细信息

目的 :分析小檗碱 (Ber)对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响 ,探讨其免疫抑制作用的机制。方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,以CFSE染色 ,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白 (ConA)或者佛波醇酯 (PDB)和离子霉素 (Ion)进行刺激 ,以流式细胞仪分析小檗碱对淋巴细胞增殖率的影响 ;以WST 1检测淋巴细胞的增殖情况 ;用碘化丙锭 (PI)染色分析细胞周期分布 ;细胞凋亡以Annexin V染色进行分析。结果 :CFSE染色分析显示 ,当浓度为 10 0、30和 10 μmol L时 ,Ber无论对ConA或PDB +Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖 ,都具有明显的抑制作用 (P <0 0 5 )。以WST 1分析细胞增殖情况 ,也获得相似的结果。对细胞周期分析表明 ,随着小檗碱浓度的增加 ,处于亚二倍体峰的细胞数增加 ,处于S和G2 M期的细胞数则减少 ,而G0 G1 期的细胞数基本不变。Annexin V染色法结果表明 ,30 μmol LBer组Annexin V单阳性区域的百分率为 ( 7 13± 1 0 8) % ,与PDB +Ion阴性组的百分率 ( 2 4 9± 0 2 5 ) %比较有显著的差异 (P <0 0 1)。结论 :小檗碱对小鼠淋巴细胞的增殖有明显抑制作用 ,它能抑制淋巴细胞进入细胞分裂周期 ,这种抑制作用表现出明显的周期特异性。同时 ,Ber可以诱导体外培养的小鼠淋巴细胞发生凋亡。

关键词：小檗碱淋巴细胞细胞周期细胞凋亡

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T细胞识别同种异型移植抗原的研究进展

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中国免疫学杂志 2004年第3期20卷 149-152页

作者：曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

移植是末期组织、器官功能衰竭最彻底的治疗措施.同种异体移植(allogeneic transplantation)是临床最常见的移植类型.在本质上,人类的同种异体移植排斥反应是由受者的T细胞介导的、针对移植抗原的免疫应答.这一免疫应答是通过受者T细胞... 详细信息

移植是末期组织、器官功能衰竭最彻底的治疗措施.同种异体移植(allogeneic transplantation)是临床最常见的移植类型.在本质上,人类的同种异体移植排斥反应是由受者的T细胞介导的、针对移植抗原的免疫应答.这一免疫应答是通过受者T细胞表面的T细胞受体(T cell receptor,TCR)识别移植物细胞的同种异型抗原引发的.受者T细胞可以通过直接识别(direct recognition)和间接识别(indirect recognition)移植物细胞的同种异型MHC分子而被激活.在移植免疫领域里,有些问题一直困扰着学者们,近年的研究进展使这些问题在一定程度上得到阐明.

关键词： T细胞同种异型移植抗原免疫应答 T细胞受体 TCR 移植物基因编码

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人β_2-微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

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生物工程学报 2004年第1期20卷 99-103页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅曾耀英组织移植与免疫教育部重点实验室(暨南大学) 广州510632

β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大... 详细信息

β2 微球蛋白 (β2 m)是主要组织相容性复合体 (MHC)Ⅰ类分子的轻链部分 ,为制备MHCⅠ类分子四聚体的必要成分。根据已报道的序列设计特异引物 ,利用RT PCR方法从人白细胞中克隆了 β2 m基因 ,并构建了成熟β2 m的原核表达载体 ,在大肠杆菌中得到高效表达。表达的β2 m大部分在包涵体中 ,经洗涤、变性和复性 ,并以强阴离子交换柱层析纯化 ,获得SDS PAGE纯的人重组 β2 m ,Western印迹法分析表明该蛋白具有与抗人天然 β2 m抗体反应的特性。此工作为制备MHCⅠ类分子四聚体奠定基础。

关键词： β2-微球蛋白基因克隆大肠杆菌表达基因克隆重组蛋白包涵体

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维生素C对大鼠肋骨生长板软骨细胞增殖和胶原合成的影响

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基础医学与临床 2004年第6期24卷 629-632页

作者：季煜华曾耀英暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广州510632

探讨不同浓度的维生素C(AscorbicAcid ,Asc)对培养大鼠肋生长板软骨细胞 (ratcostochondralgrowthplatechondrocyte,RGC)增殖和胶原合成的影响。分离、培养RGC ,以组织化学和免疫组织化学的方法鉴定第 2代RGC的表型 ;分别用3 H TdR和3 H... 详细信息

探讨不同浓度的维生素C(AscorbicAcid ,Asc)对培养大鼠肋生长板软骨细胞 (ratcostochondralgrowthplatechondrocyte,RGC)增殖和胶原合成的影响。分离、培养RGC ,以组织化学和免疫组织化学的方法鉴定第 2代RGC的表型 ;分别用3 H TdR和3 H Proline掺入法检测 2 5、5 0和 10 0mg/LAsc对第 2代RGC增殖和胶原合成的影响。3种浓度的Asc均能促进RGC胶原合成 (P <0 0 5 ) ,2 5mg/L和 5 0mg/LAsc的促胶原合成作用明显强于 10 0mg/L(P <0 0 5 ) ;2 5mg/L和 5 0mg/L的Asc促进RGC增殖 (P <0 0 5 ) ,10 0mg/L的Asc抑制RGC的增殖 (P <0 0 5 )。因此一定浓度的Asc具有促进RGC增殖和胶原合成的作用 ,2 5mg/L～ 5 0mg/L是较为合适的添加浓度。

关键词： RGC 胶原合成软骨细胞增殖大鼠维生素C 肋骨骨生长促进影响作用

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NK细胞在小鼠异基因骨髓移植中的作用

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中国病理生理杂志 2004年第9期20卷 1563-1567页

作者：杨志刚曾耀英何贤辉王通王青暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的研究自然杀伤(NK)细胞在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、骨髓植入及造血重建的影响。方法以近交系小鼠C57/6j(H-2b)为供鼠、BALB/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和/或NK细胞进行异基因骨髓移植,... 详细信息

目的研究自然杀伤(NK)细胞在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、骨髓植入及造血重建的影响。方法以近交系小鼠C57/6j(H-2b)为供鼠、BALB/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和/或NK细胞进行异基因骨髓移植,用流式细胞仪检测受鼠的CD34+细胞计数和H-2Kb+细胞表达水平,血细胞自动分析仪检测外周血白细胞计数,并结合临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率、GVHD、植入水平及造血重建等。结果增加NK细胞组的小鼠存活率显著大于不增加NK细胞组,小鼠出现GVHD的数量少、程度轻,外周血白细胞及骨髓CD34+细胞恢复快、H-2Kb+细胞表达水平高。结论NK细胞抑制小鼠异基因骨髓移植中的GVHD和移植排斥,促进骨髓植入及造血重建。

关键词：杀伤细胞天然异基因骨髓移植同种异基因反应性移植物抗宿主病

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染料木黄酮对小鼠T细胞体外活化及增殖的影响

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中国病理生理杂志 2004年第2期20卷 186-190页

作者：王青何贤辉肇静娴杨志刚曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的 :研究染料木黄酮 (Gen)对T细胞体外活化及增殖的影响 ,并探讨其机制。方法 :利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术 ,检测多克隆刺激剂佛波醇酯 (PDB)或刀豆蛋白 (ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD6 9、CD2 5的百分率 ;... 详细信息

目的 :研究染料木黄酮 (Gen)对T细胞体外活化及增殖的影响 ,并探讨其机制。方法 :利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术 ,检测多克隆刺激剂佛波醇酯 (PDB)或刀豆蛋白 (ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD6 9、CD2 5的百分率 ;以羧基荧光素乙酰乙酸 (CFSE)标记技术结合流式细胞术 ,分析PDB +Ion (Iono mycin)或ConA刺激下T细胞增殖相关指数。结果 :Gen对ConA刺激组T细胞CD6 9、CD2 5表达有明显抑制作用 (P<0 0 5 ) ,且呈剂量依赖关系 ,而对PDB刺激组T细胞CD6 9及CD2 5表达的抑制需要较高浓度 (>5 0 μmol/L) ;Gen无论对ConA或PDB +Ion刺激组T细胞增殖均有显著抑制作用 (P <0 0 1) ,且均呈剂量依赖关系。结论 :Gen可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞体外活化及增殖 ,其作用机制可能是抑制早期活化相关蛋白酪氨酸激酶活性。

关键词：染料木黄酮抗原 CD69 受体白细胞介素2 T淋巴细胞流式细胞术

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小鼠眼内移植性黑色素瘤诱导免疫偏离的表达

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眼科研究 2004年第2期22卷 128-131页

作者：张翼飞李志杰李辰暨南大学第一附属医院眼科广州510630 暨南大学组织移植与免疫中心广州510630

目的　观察小鼠前房和玻璃体腔的移植性黑色素瘤是否具有诱导免疫偏离的能力。方法　将雄性昆明小鼠 60只随机分为实验组及其相应的对照组共 5组。分别于实验组小鼠的前房或玻璃体腔接种黑色素瘤B16F10细胞 ,然后观察测量和比较其抗原... 详细信息

目的　观察小鼠前房和玻璃体腔的移植性黑色素瘤是否具有诱导免疫偏离的能力。方法　将雄性昆明小鼠 60只随机分为实验组及其相应的对照组共 5组。分别于实验组小鼠的前房或玻璃体腔接种黑色素瘤B16F10细胞 ,然后观察测量和比较其抗原特异性迟发型超敏反应 (DTH)的程度。结果　 ( 1)小鼠前房和玻璃体腔移植性黑色素瘤均可进行性生长。 ( 2 )各组小鼠右耳DTH反应的肿胀值为前房组 ( 3 4± 3 5 ) μm ,玻璃体腔组 ( 3 6± 96) μm ,前房对照组 ( 194± 99) μm ,玻璃体腔对照组 ( 186± 5 5 ) μm以及空白对照组 ( 165± 118) μm。实验组与其相应对照组的差异具有显著性意义 (前房组t =-5 2 0 9,P =0 0 0 0 ;玻璃体腔组t =-3 871,P =0 0 0 2 )。 ( 3 )病理观察实验组“二免”后右耳未见炎性细胞浸润 ,而对照组则相反。结论　同种异体的昆明小鼠前房和玻璃体腔的移植性黑色素瘤均具有诱导其相关免疫偏离的能力。

关键词：小鼠眼内移植性黑色素瘤诱导免疫偏离表达疾病模型

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CTLA4-EGFP融合蛋白在K562细胞中的表达及其亚细胞定位研究

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第2期20卷 135-139页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦... 详细信息

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与CTLA4融合蛋白真核表达载体 ,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT PCR方法克隆人CTLA4基因 ,构建CTLA4 EGFP融合蛋白的表达载体。以其转染K562细胞后 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从人外周血细胞中克隆到CTLA4基因的cDNA。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞 2 4h后 ,CTLA4和EGFP双阳性细胞的百分率为 16%。表达的融合蛋白主要分布于胞内 ,细胞膜上分布较少。相反 ,转染空载体的细胞仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。以佛波醇酯加离子霉素刺激后 ,CTLA4 EGFP融合蛋白在细胞表面表达水平升高到 2 9% ,且分布于胞内的融合蛋白向细胞膜靠近并与质膜融合 ;而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变。结论 :成功地构建CTLA4 EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K562细胞中得到表达。

关键词： CTLA4 绿色荧光蛋白融合蛋白共聚焦显微术

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