检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 659-663页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表... 详细信息

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果 :克隆到PD L1cDNA编码区的全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。同时构建了在羧基端带有His6标签的PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。免疫印迹分析表明 ,在IPTG诱导后表达的PD L1胞外区蛋白 ,相对分子质量 (Mr)为 2 50 0 0 ,与理论值的大小相符。该重组蛋白能与抗His6标签的单抗 (mAb)特异性反应。结论 :成功地克隆PD L1基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为利用PD L1转基因修饰移植物或以PD

关键词： PD-L1 cDNA克隆淋巴细胞重组蛋白

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HLA—A0201与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在K562细胞的表达和定位

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中国病理生理杂志 2004年第5期20卷 705-710页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与HLA -A 0 2 0 1(A 0 2 0 1)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体 ,分析其在K5 6 2细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT -PCR方法克隆A 0 2 0 1cDNA ,构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,转染K5 6 2... 详细信息

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与HLA -A 0 2 0 1(A 0 2 0 1)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体 ,分析其在K5 6 2细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT -PCR方法克隆A 0 2 0 1cDNA ,构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,转染K5 6 2细胞 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从两个HLA -A2阳性供者外周血细胞中克隆到A 0 2 0 1cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K5 6 2细胞 ,5h后A 0 2 0 1和EGFP的表达百分率分别为 2 5 12± 2 2 6、2 7 37± 3 5 9,2 4h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上 ,胞内分布较少。相反 ,转染空载体的细胞不表达A 0 2 0 1分子 ,仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。结论 :成功构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K5 6 2细胞中得到表达 ,表达产物主要分布于细胞膜表面 ,提示表达该融合蛋白的K5 6 2细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。

关键词： HKA—A2抗原绿色荧光蛋白质类融合蛋白质类显微镜检查共焦

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IDO-EGFP表达载体的构建及其在人软骨细胞中的表达

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免疫学杂志 2004年第3期20卷 172-176页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅江逊蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的　克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法　利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞... 详细信息

目的　克隆人吲哚胺双加氧酶 (IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法　利用RT PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转入人软骨细胞进行瞬时表达 ,以共聚焦显微镜对表达的绿色荧光进行分析。结果　从活化的人白细胞中克隆到IDO基因编码区全长 ,并构建了IDO EGFP融合蛋白表达载体。以该表达载体转染原代人软骨细胞 ,表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞。结论　成功构建了IDO EGFP哺乳动物细胞表达载体。

关键词：吲哚胺双加氧酶绿色荧光蛋白融合蛋白软骨细胞共聚焦显微术

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小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立

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中国病理生理杂志 2004年第10期20卷 1947-1949页

作者：杨志刚曾耀英王青王通曾蕙兰暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院血液科广东广州510632

目的 :建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病 (GVHD)模型 ;为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法 :以C5 7BL/6 (H - 2 b)小鼠为供鼠、BALB/c(H - 2 d)小鼠为受鼠 ,在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴... 详细信息

目的 :建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病 (GVHD)模型 ;为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法 :以C5 7BL/6 (H - 2 b)小鼠为供鼠、BALB/c(H - 2 d)小鼠为受鼠 ,在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴细胞以引起不同程度的GVHD。根据临床表现、存活期及病理检查等判断GVHD程度。结果 :单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现急性GVHD ,2 0 %的小鼠长期存活 (超过 12 0d) ,无急性GVHD表现 ;混合不同比例外周淋巴细胞的异基因骨髓移植小鼠出现GVHD的时间和程度均有差异 ,其中骨髓与外周淋巴细胞 1∶1混合组小鼠全部在移植后 5 - 14d出现典型的弓背体位 ,存活期 6 - 2 4d ,临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论 :以供鼠骨髓与外周淋巴细胞 1∶1混合进行的异基因骨髓移植 ,10 0 %引出致死性的急性GVHD。

关键词：小鼠骨髓移植移植物抗宿主病动物模型

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人PD-L2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

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免疫学杂志 2004年第5期20卷 346-349页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的　克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法　以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定... 详细信息

目的　克隆人PD L2基因并构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法　以RT PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD L2基因的cDNA ,构建PD L2胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果　克隆到PD L2基因cDNA编码区全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。进而构建了PD L2胞外区的原核表达载体 ,并在大肠杆菌表达 ,免疫印迹分析表明在IPTG诱导后表达PD L2胞外区蛋白 ,相对分子质量Mr 为 2 2 0 0 0 ,与理论值大小相符。结论　成功克隆PD L2基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为进一步研究PD L2功能提供了条件。

关键词： PD-L2 基因克隆大肠杆菌重组蛋白

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HIV母婴传播机制研究进展

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国外医学（妇幼保健分册） 2004年第5期15卷 276-279页

作者：李海仙曾耀英暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒引起的人类空前最严重的传染性疾病。母婴垂直传播是该病毒传播的一个重要方式 ,被感染的孕妇可以在宫内经胎盘、经阴道分娩以及产后经母乳感染胎儿和新生儿。该文通过对人类免疫缺陷病毒母婴传播的影响因素... 详细信息

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒引起的人类空前最严重的传染性疾病。母婴垂直传播是该病毒传播的一个重要方式 ,被感染的孕妇可以在宫内经胎盘、经阴道分娩以及产后经母乳感染胎儿和新生儿。该文通过对人类免疫缺陷病毒母婴传播的影响因素和各期传播机制进行综述。

关键词：人类免疫缺陷病毒母婴传播胎盘屏障

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胎儿皮肤无瘢痕愈合的主要影响因素

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中华整形外科杂志 2004年第5期20卷 388-390页

作者：曾山黄锦桃林羿暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 中山大学基础医学院组织学胚胎学教研室

30年前人们发现,在人类和高等脊椎动物较早期的胚胎或胎儿,即使涉及皮肤全层的创伤也能够无瘢痕愈合.这一现象提示,如果能模拟早期胚胎愈合条件,儿童和成年创伤愈合有可能达到皮肤再生而非纤维化.目前对无瘢痕愈合过程中所涉及的众多影... 详细信息

30年前人们发现,在人类和高等脊椎动物较早期的胚胎或胎儿,即使涉及皮肤全层的创伤也能够无瘢痕愈合.这一现象提示,如果能模拟早期胚胎愈合条件,儿童和成年创伤愈合有可能达到皮肤再生而非纤维化.目前对无瘢痕愈合过程中所涉及的众多影响因素已经有所认识,简述如下。

关键词：无瘢痕愈合胎儿皮肤影响因素创伤愈合皮肤再生纤维化早期胚胎脊椎动物胚胎人类

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多种羧化酶缺陷病患者尿液标志物的GC-MS分析

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基础医学与临床 2004年第2期24卷 213-216页

作者：宋元宗吴本清王自能暨南大学附属第一医院围产医学中心及组织移植与免疫研究中心广州510632 暨南大学附属第二医院新生儿科深圳518020

本文旨在探讨乳酸、3 羟基异戊酸、甲基枸橼酸和 3 甲基巴豆酰甘氨酸等多种羧化酶缺陷病 (multiplecarboxy lasedeficiency,MCD) 4个尿液标志物的气相色谱质谱法定性和定量分析特征。结果显示 ,乳酸和 3 羟基异戊酸在总离子流图上有明... 详细信息

本文旨在探讨乳酸、3 羟基异戊酸、甲基枸橼酸和 3 甲基巴豆酰甘氨酸等多种羧化酶缺陷病 (multiplecarboxy lasedeficiency,MCD) 4个尿液标志物的气相色谱质谱法定性和定量分析特征。结果显示 ,乳酸和 3 羟基异戊酸在总离子流图上有明显的信号 ,其绝对保留时间分别是 5 0 2和 6 1 9min ,相对保留时间分别为 0 4 0 3和 0 4 97,而其特征离子 (m z,TMS)分别为M 1 5 (2 1 9,2 )和M 1 5 (2 4 7,2 )。甲基枸橼酸 (双峰 )和 3 甲基巴豆酰甘氨酸的绝对保留时间分别是 1 0 83、1 0 87和 8 94min ,相对保留时间分别为 0 86 9、0 872和 0 71 7min ,特征离子 (m z ,TMS)分别为M 1 5 (4 79,4 )和M (2 2 9,1 ) ,以上两种物质的定性定量分析可借助提取离子色谱图进行。本文结果对于MCD的疗效监测 ,及其症前。

关键词：气相色谱-质谱法多种羧化酶缺陷病遗传性代谢病尿液标志物

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地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡和ERK1/2 MAPK及钙离子浓度关系的研究

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中国药科大学学报 2004年第1期35卷 77-81页

作者：王通曾耀英李校堃何贤辉肇静娴吴晓萍付小兵暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632 解放军304医院全军创伤修复重点实验室北京100000

目的 :研究胸腺细胞凋亡和ERK1/ 2途径及钙离子内流之间关系 ,以进一步探讨细胞凋亡可能的信号通路机制。方法 :以地塞米松 (DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型 ,通过流式细胞术和电镜测定模型的稳定性 ,利用激光扫描共聚焦分析测定细胞内... 详细信息

目的 :研究胸腺细胞凋亡和ERK1/ 2途径及钙离子内流之间关系 ,以进一步探讨细胞凋亡可能的信号通路机制。方法 :以地塞米松 (DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡为模型 ,通过流式细胞术和电镜测定模型的稳定性 ,利用激光扫描共聚焦分析测定细胞内 [Ca2 + ] i、SDS PAGE及Westernblot检测细胞内总量和磷酸化ERK1/ 2MAPK。结果 :仅在完全RMPI 1640培养基培养条件下 ,小鼠胸腺细胞自发凋亡百分率为 (2 90±0 62 ) % ,而在 2 5× 10 -6mol/LDEX诱导下 ,3h培养组 (12 70± 2 44) %、6h培养组 (53 55± 4 59) %发生了细胞凋亡 ,细胞内Fluo 3绿色荧光明显增强 ;正常细胞ERK1/ 2总量随时间变化不明显 ,而DEX刺激下 ,ERK1/ 2总量随时间呈递减趋势。结论 :DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡过程中 ,磷酸化ERK1/ 2信号被迅速抑制 ,细胞内 [Ca2 + ] i迅速上升 ,推论磷酸化ERK1/ 2信号阻断与 [Ca2 + ]

关键词：地塞米松钙离子 ERK 线粒体膜电势

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尿素酶预处理-气相色谱-质谱法诊断琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病

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基础医学与临床 2004年第3期24卷 327-330页

作者：宋元宗柳国胜张霆王自能暨南大学第一医院围产医学中心及组织移植与免疫研究中心广州510632 首都儿科研究所北京100020

本文探讨琥珀酸半醛脱氢酶 (succinicsemialdehydedehydrogenase ,SSADH)缺陷病各尿液标志物的气相色谱质谱法 (GasChromatography MassSpectrometry,GC MS)分析特征。收集SSADH患儿的尿液标本 ,经去尿素、加内标 (正十七酸 )、除蛋... 详细信息

本文探讨琥珀酸半醛脱氢酶 (succinicsemialdehydedehydrogenase ,SSADH)缺陷病各尿液标志物的气相色谱质谱法 (GasChromatography MassSpectrometry,GC MS)分析特征。收集SSADH患儿的尿液标本 ,经去尿素、加内标 (正十七酸 )、除蛋白、真空干燥处理 ,残余物进行三甲基硅烷化衍生后进样行GC MS法分析。尿液中可检测到明显的 4 羟基丁酸、2 ,4 二羟基丁酸、3,4 二羟基丁酸和 4 ,5 二羟基己酸信号。在TIC图上 ,其绝对保留时间 (相对保留时间 )分别是 6 32min(0 4 34) ,7 80min(0 5 36 ) ,7 94min(0 5 4 6 ) ,8 80min ,8 90min(0 6 0 5 ,0 6 12 )。在质谱图上 ,其特征离子 (m z,TMS)分别是M 15 (2 33,2 ) ,M 15 (32 1,3) ,M 15 (32 1,3) ,M 15 (349,3)。GC MS法分离鉴定尿液代谢成分 ,可作为诊断该病的一种可靠手段。

关键词：琥珀酸半醛脱氢酶缺陷病尿素酶气相色谱-质谱法遗传性代谢病

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