检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2004年第3期20卷 382-388页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学广州510632 暨南大学生物工程研究所广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广州510632 郑州大学第一附属医院皮肤科郑州450052

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免... 详细信息

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序 ,利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒 (HCMV)抗原肽的HLA_A2四聚体 ,具有特异性结合CTL活性。HLA_A 0 2 0 1重链基因是通过RT_PCR方法从HLA_A2 + 供者白细胞中克隆 ,进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽 (BSP)的HLA_A 0 2 0 1(A2 )重链胞外区原核表达载体 ,A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达 ,主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链 β2 微球蛋白和HLA_A2限制性HCMVpp6 5 495_50 3抗原肽 (NLVPMVATV ,NLV)存在时通过稀释法复性获得 ,以BirA对其进行生物素化 ,然后以阴离子交换树脂纯化 ,得到的纯化A2_NLV单体与Streptavidin_PE按 4 :0 8比例混合形成四聚体 ,结合程度在 85 %以上 ,流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA_A2 + 供者的特异性CTL结合活性。总之 ,这种简化的四聚体制备程序 ,不仅有利于该技术的推广 ,为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台。

关键词：人类白细胞抗原四聚体细胞毒T淋巴细胞包涵体人巨细胞病毒

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SARS-CoV Sars7a和EGFP融合蛋白真核表达载体构建及其表达

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中国病毒学 2004年第3期19卷 209-213,i001页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

根据SARS-CoVsars7a基因设计并化学合成部分重叠引物,经二轮PCR获得sars7a基因片段,以此片段为模板并利用一对带有Kozak序列及删除终止密码的引物进行PCR,获得产物与pEGFP-N1载体连接,使sars7a基因位于EGFP的基因上游,得到含编码Sars7a-... 详细信息

根据SARS-CoVsars7a基因设计并化学合成部分重叠引物,经二轮PCR获得sars7a基因片段,以此片段为模板并利用一对带有Kozak序列及删除终止密码的引物进行PCR,获得产物与pEGFP-N1载体连接,使sars7a基因位于EGFP的基因上游,得到含编码Sars7a-EGFP融合蛋白基因的哺乳动物细胞表达载体。采用细胞核转染技术将重组表达载体转染K562细胞,以流式细胞仪和共聚焦显微镜分析,可检测到EGFP的绿色荧光,表明Sars7a-EGFP得到表达,该蛋白分布于整个细胞,提示Sars7a并非膜蛋白,更可能是胞浆蛋白。此外,该蛋白的表达对K562细胞凋亡无明显影响。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒 Sars7a 绿色荧光蛋白融合蛋白表达

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一氧化氮及谷氨酸在内皮素-1诱导神经元凋亡中的作用

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中国神经精神疾病杂志 2004年第4期30卷 288-289页

作者：徐安定吴宜娟苗海锋狄静芳卓文燕曾子华谭少华余科陈明星暨南大学附属第一医院神经内科广州510630 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心暨南大学附属第三医院神经内科暨南大学医学院病理学教研室

目的　观察一氧化氮 (NO)和谷氨酸在内皮素 (ET) 1诱导培养神经元凋亡中的作用。方法　神经元培养取自新生SD大鼠大脑皮质。培养 5天后分 4组 :对照组、ET 1组 (2 0nM)、ET 1 +L NAME(N 硝基左旋精氨酸甲酯 ,NO合酶抑制剂 ,1 0 0mM)组... 详细信息

目的　观察一氧化氮 (NO)和谷氨酸在内皮素 (ET) 1诱导培养神经元凋亡中的作用。方法　神经元培养取自新生SD大鼠大脑皮质。培养 5天后分 4组 :对照组、ET 1组 (2 0nM)、ET 1 +L NAME(N 硝基左旋精氨酸甲酯 ,NO合酶抑制剂 ,1 0 0mM)组和ET 1 +APV组 (N 甲基 D 天冬氨酸型受体拮抗剂 ,1 0 0 μM)。培养 2 4h后 ,收集细胞用流式细胞仪定量检测凋亡率。上清液中NO水平通过硝酸还原酶法检测亚硝酸盐浓度反映 ,谷氨酸浓度测定用高压液相法。结果　 2 0nMET 1处理后 2 4h,培养神经元凋亡率较对照组显著增高 (P <0 0 0 1 )。L NAME和APV分别明显阻断ET 1诱导神经元凋亡的作用 ,与ET 1组比较 ,凋亡率降幅分别为 40 % (P<0 0 5)和 80 % (P <0 0 0 1 )。ET 1作用 2 4h后。神经元培养液中NO和谷氨酸浓度较对照组显著增高 (P <0 0 0 1 ) ,L NAME完全抑制了ET 1引起的培养液中NO的升高。结论　NO和谷氨酸参与了ET 1诱导培养大鼠大脑神经元凋亡过程。

关键词：内皮素-1 神经元凋亡一氧化氮谷氨酸

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CpG ODN对树突状细胞抗肝癌作用的影响

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中国病理生理杂志 2004年第10期20卷 1801-1805页

作者：李岩邢飞跃李明四川大学华西医学中心感染免疫研究室四川成都610041 暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

目的 :研究CpGODN在BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞 (BMDC)抗肝癌免疫中的作用。方法 :CpGODN联合肿瘤抗原 (TAg)体外刺激BMDC ,流式细胞术检测受刺激BMDC表达CD80的阳性率 ,ELISA检测受刺激BMDC分泌IL - 12 (p70 )的水平 ,MTT法检测活化... 详细信息

目的 :研究CpGODN在BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞 (BMDC)抗肝癌免疫中的作用。方法 :CpGODN联合肿瘤抗原 (TAg)体外刺激BMDC ,流式细胞术检测受刺激BMDC表达CD80的阳性率 ,ELISA检测受刺激BMDC分泌IL - 12 (p70 )的水平 ,MTT法检测活化BMDC刺激T细胞的增殖能力 ,联合CpGODN和TAg体内预激小鼠获得CTL ,检测CTL对肝癌细胞株Hca-F的特异性杀伤作用。结果 :CpGODN联合TAg体外可明显激活BMDC ,诱导BMDC膜表面CD80的表达 ,刺激BMDC分泌高水平IL - 12 ,促进BMDC刺激T淋巴细胞增殖 ;体内联合应用CpGODN和TAg诱导的CTL对Hca -F具有强大的特异性杀伤作用 ,其诱导作用明显强于TAg ,与细菌脂多糖和金黄色葡萄球菌肠毒素B相近。结论 :CpGODN体外能有效促进小鼠BMDC的分化、增殖和成熟。

关键词：胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡二核苷类树突状细胞 T淋巴细胞细胞毒性

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无排卵型功血患者子宫内膜VEGF和雌、孕激素受体的表达

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基础医学与临床 2004年第2期24卷 196-200页

作者：罗璐朱凤川曾耀英马炎辉暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广州510632 福建医科大学附属第一医院妇产科福州350004

研究无排卵型功血患者子宫内膜血管内皮生长因子 (VEGF)、雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)的表达 ,探讨其与子宫内膜血管形成的关系 ,以求从蛋白水平阐明无排卵型功血的出血机制。采用免疫组化方法 ,检测VEGF、ER和PR在 2 0例正常增... 详细信息

研究无排卵型功血患者子宫内膜血管内皮生长因子 (VEGF)、雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)的表达 ,探讨其与子宫内膜血管形成的关系 ,以求从蛋白水平阐明无排卵型功血的出血机制。采用免疫组化方法 ,检测VEGF、ER和PR在 2 0例正常增殖期和 6 0例无排卵型功血患者子宫内膜的表达。选用微血管密度标记物CD34,测定子宫内膜微血管密度 (MVD)。无排卵型功血患者单纯性增生和复合性增生子宫内膜腺上皮VEGF蛋白和MVD明显低于正常增殖期 (P <0 0 5和P <0 0 1 ) ;而单纯性增生和复合性增生子宫内膜腺上皮PR蛋白明显高于正常增殖期 (P <0 0 5和P <0 0 1 )。相关分析显示 ,子宫内膜腺上皮VEGF与MVD呈显著性正相关 (r =0 6 6 6 ,P <0 0 5 ) ;与腺上皮PR呈显著性负相关 (r=- 0 6 2 9,P <0 0 5 )。正常增殖期内膜与功血增殖期内膜比较 ,腺上皮VEGF和PR蛋白差异无显著性意义。首次指出病理表现为单纯性增生和复合性增生的无排卵型功血患者 ,其子宫异常出血与子宫内膜VEGF和PR的表达失调有关。PR间接作用于无排卵型功血子宫内膜腺上皮VEGF ,使后者分泌减少 ,微血管形成障碍。

关键词：无排卵型功血子宫内膜 VEGF 雌激素受体表达孕激素受体功能性子宫出血

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小檗碱联用环孢素对受体肾功能的影响(英文)

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中国现代应用药学 2004年第S1期21卷 1-3页

作者：倪兴华何芬芬狄静芳梁佩燕林羿曾山冯铮曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 广东公安边防总队深圳医院深圳518029

目的研究小檗碱联用环孢素诱导同种异基因移植免疫耐受后对受体肾功能的影响。方法采用Ono's方法建立同种异基因大鼠心脏异位移植免疫耐受模型,将实验动物分为5组。对照组(Wistar-Wistar):每天注射生理盐水共21d;安慰剂组(SD-Wista... 详细信息

目的研究小檗碱联用环孢素诱导同种异基因移植免疫耐受后对受体肾功能的影响。方法采用Ono's方法建立同种异基因大鼠心脏异位移植免疫耐受模型,将实验动物分为5组。对照组(Wistar-Wistar):每天注射生理盐水共21d;安慰剂组(SD-Wistar):每天注射生理盐水共21d;CsA组(SD-Wistar):每天按2mg·kg^(-1)剂量注射环孢素A(Cyclosporine,CsA)共21d;Ber组(SD-Wistar)每天按16mg·kg^(-1)剂量灌服小檗碱(Berberine,Ber)共21d;CsA+Ber组(SD-Wistar):每天按2mg·kg^(-1)剂量注射CsA,16mg·kg^(-1)剂量灌服Ber共21d,观察受体血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)指标水平的变化。结果联用Bet后,降低了受体长时间使用CsA后的尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平。结论联用Ber有助于减轻长期使用CsA后对受体肾功能的影响。

关键词：小檗碱环孢素心脏异位移植免疫耐受肾功

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PD-L2剪切异构体与EGFP融合蛋白的表达及其亚细胞定位研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第11期24卷 878-882页

作者：何贤辉徐丽慧曾耀英刘毅蔡小嫦暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 暨南大学生物工程研究所郑州大学第一附属医院皮肤科暨南大学第一附属医院皮肤科

目的　探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法　以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞... 详细信息

目的　探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法　以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果　从活化的人白细胞中克隆到常规剪切体PD L2Ⅰ和新型剪切异构体PD L2Ⅱ的cDNA ,后者删除了编码胞外区Ig C结构域的外显子 3。进而构建了PD L2Ⅰ EGFP和PD L2Ⅱ EGFP融合蛋白表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞。流式细胞仪分析显示 ,转染前者的细胞中既可检测到EGFP的表达又可在细胞膜上检测到PD L2表达 ;而转染后者的细胞中只能检测到EGFP的表达 ,在其细胞膜上不能检测到PD L2表达。共聚焦显微镜观察显示 ,PD L2Ⅰ EGFP主要分布于细胞膜表面 ,PD L2Ⅱ EGFP则主要分布于细胞内。结论　常规剪切体PD L2Ⅰ能正确定位于细胞膜表面 ,而新型剪切异构体PD L2Ⅱ则位于细胞内 ,不能运输至细胞膜 ,提示不同PD

关键词： PD 表达载体 EGFP 转染剪切体细胞膜融合蛋白亚细胞定位结构域哺乳动物细胞

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地塞米松影响小鼠胸腺细胞c-Myc表达以及凋亡研究

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中国病理生理杂志 2004年第4期20卷 550-555页

作者：王通曾耀英李校堃肇静娴王青付小兵暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632 暨南大学医药生物技术研究开发中心广东广州510632 解放军304医院全军创伤修复重点实验室北京100000

目的 :研究在地塞米松 (DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中c -Myc信号变化特点及其与下游caspase - 3变化的相关性 ,以进一步探讨c -Myc在小鼠胸腺细胞凋亡过程中的作用机制。方法 :以终浓度 1μmol/L地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,通... 详细信息

目的 :研究在地塞米松 (DEX)诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程中c -Myc信号变化特点及其与下游caspase - 3变化的相关性 ,以进一步探讨c -Myc在小鼠胸腺细胞凋亡过程中的作用机制。方法 :以终浓度 1μmol/L地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡 ,通过AnnexinV -FITC/PI双染流式细胞术测定 30min、3h、6h和 9h凋亡和坏死细胞比率 ,在 6h时点电镜观察细胞形态 ,利用SDS -PAGE及Westernblot检测 0min、30min、1h和 3h细胞内c -Myc和caspase - 3信号变化特点。结果 :在 1μmol/LDEX诱导下 ,小鼠胸腺细胞在 30min、3h、6h和 9h凋亡比率分别为(5 70± 0 4 6 ) %、(35 79± 1 13) %、(5 0 6 1± 2 15 ) %和 (35 5 2± 1 6 6 ) % ,对照组分别为 (5 97± 0 2 5 ) %、(10 2 0±0 71) %、(12 10± 0 6 6 ) %和 (15 4 5± 0 5 1) % ,组间差异显著 (P <0 0 1)。相应DEX组坏死比率分别为 (4 5 8±0 5 1) %、(4 6 6± 0 6 7) %、(2 5 36± 1 6 4 ) %和 (46 99± 2 6 7) % ,对照组分别为 (4 38± 0 39) %、(4 19± 0 73) %、(9 6 3± 1 2 5 ) %和 (13 38± 0 72 ) % ,组间差异显著 (P <0 0 1) ;电镜观察结果显示DEX处理 6h见较多典型凋亡细胞。对照组在 0min即可检测到c -Myc的明显表达 ,30min略见增多 ,1h?

关键词：地塞米松胸腺细胞细胞凋亡 c-Myc表达半胱氨酸灭冬氨酸蛋白酶3

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增强型绿色荧光蛋白基因转染对原代培养的人软骨细胞细胞周期的影响

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中国病理生理杂志 2004年第6期20卷 924-928页

作者：江逊曾耀英何贤辉徐丽慧狄静芳冯铮肇静娴王青王通史剑波暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 中山大学附属第一医院耳鼻咽喉科广东广州510080

目的 :观察转染增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因后原代培养的人鼻中隔软骨细胞的细胞周期的变化 ,建立原代培养的人鼻中隔软骨细胞的示踪方法。方法 :在大肠杆菌中扩增pEGFP -N1质粒 ,通过Amaxa细胞核转染仪将pEGFP -N1质粒转入原代培养... 详细信息

目的 :观察转染增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因后原代培养的人鼻中隔软骨细胞的细胞周期的变化 ,建立原代培养的人鼻中隔软骨细胞的示踪方法。方法 :在大肠杆菌中扩增pEGFP -N1质粒 ,通过Amaxa细胞核转染仪将pEGFP -N1质粒转入原代培养的人鼻中隔软骨细胞 ,应用激光共聚焦显微镜观察其转染过程及瞬时表达情况 ,流式细胞仪检测其转染效率和细胞周期的变化。结果 :增强型绿色荧光蛋白基因在转染 2 4h后得到了明显表达 ,4 8h后流式细胞仪检测其表达率为 35 37% ,细胞周期没有明显的改变 ,且未影响软骨细胞的贴壁过程。结论 :经pEGFP -N1质粒转染的原代培养的人鼻中隔软骨细胞仍能在体外存活 ,对软骨细胞的生长没有明显的影响 ,pEGFP -N1是转染原代培养的人鼻中隔软骨细胞较为理想的瞬时表达载体 ,也是组织工程化软骨形成过程的良好示踪剂。

关键词：工程生物医学软骨细胞绿色荧光蛋白基因转移技术细胞周期

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CpG寡脱氧核苷酸序列的设计与筛选

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2004年第2期25卷 159-163页

作者：郑梅珍蒋建伟徐春光曾耀英狄静芳刘誉暨南大学医学院生化教研室暨南大学组织移植与免疫研究中心

　目的:根据CpG寡脱氧核苷酸(CpGODN)的设计原则,设计和筛选对新生儿脐血单个核细胞免疫刺激作用较强的CpGODN;从中探求CpGODN的结构与免疫刺激活性之间的关系。方法:根据目前有关CpGODN免疫刺激活性的研究资料,设计合成15条不同结构特... 详细信息

　目的:根据CpG寡脱氧核苷酸(CpGODN)的设计原则,设计和筛选对新生儿脐血单个核细胞免疫刺激作用较强的CpGODN;从中探求CpGODN的结构与免疫刺激活性之间的关系。方法:根据目前有关CpGODN免疫刺激活性的研究资料,设计合成15条不同结构特点的硫代及非硫代修饰的CpGODN,MTT法检测CpGODN对脐血中单个核细胞的刺激作用,分别筛选出作用较强的CpGODN,然后以CpG2006和T8为阳性对照,无关序列CpG17为阴性对照,再次比较这些CpGODN对单个核细胞的刺激增殖作用。结果:设计的2条CpGODN吸光度A值(CpG1:0 280±0 0612;CpG6:0 277±0 0562)高于T8(0 241±0 0438),而与CpG2006(0 283±0 0794)相当。结论:用MTT法筛选出了2条对新生儿免疫作用较强的CpGODN;CpGODN的结构与其免疫活性密切相关,这些关系特点利于指导CpGODN的设计。

关键词： CpG寡脱氧核苷酸单个核细胞新生儿

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