检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2004年第10期20卷 1801-1805页

作者：李岩邢飞跃李明四川大学华西医学中心感染免疫研究室四川成都610041 暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

目的 :研究CpGODN在BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞 (BMDC)抗肝癌免疫中的作用。方法 :CpGODN联合肿瘤抗原 (TAg)体外刺激BMDC ,流式细胞术检测受刺激BMDC表达CD80的阳性率 ,ELISA检测受刺激BMDC分泌IL - 12 (p70 )的水平 ,MTT法检测活化... 详细信息

目的 :研究CpGODN在BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞 (BMDC)抗肝癌免疫中的作用。方法 :CpGODN联合肿瘤抗原 (TAg)体外刺激BMDC ,流式细胞术检测受刺激BMDC表达CD80的阳性率 ,ELISA检测受刺激BMDC分泌IL - 12 (p70 )的水平 ,MTT法检测活化BMDC刺激T细胞的增殖能力 ,联合CpGODN和TAg体内预激小鼠获得CTL ,检测CTL对肝癌细胞株Hca-F的特异性杀伤作用。结果 :CpGODN联合TAg体外可明显激活BMDC ,诱导BMDC膜表面CD80的表达 ,刺激BMDC分泌高水平IL - 12 ,促进BMDC刺激T淋巴细胞增殖 ;体内联合应用CpGODN和TAg诱导的CTL对Hca -F具有强大的特异性杀伤作用 ,其诱导作用明显强于TAg ,与细菌脂多糖和金黄色葡萄球菌肠毒素B相近。结论 :CpGODN体外能有效促进小鼠BMDC的分化、增殖和成熟。

关键词：胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡二核苷类树突状细胞 T淋巴细胞细胞毒性

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加载HCMV抗原肽的HLA-A*0201单体及其四聚体制备和鉴定

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生物工程学报 2004年第3期20卷 382-388页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学广州510632 暨南大学生物工程研究所广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广州510632 郑州大学第一附属医院皮肤科郑州450052

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免... 详细信息

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序 ,利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒 (HCMV)抗原肽的HLA_A2四聚体 ,具有特异性结合CTL活性。HLA_A 0 2 0 1重链基因是通过RT_PCR方法从HLA_A2 + 供者白细胞中克隆 ,进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽 (BSP)的HLA_A 0 2 0 1(A2 )重链胞外区原核表达载体 ,A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达 ,主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链 β2 微球蛋白和HLA_A2限制性HCMVpp6 5 495_50 3抗原肽 (NLVPMVATV ,NLV)存在时通过稀释法复性获得 ,以BirA对其进行生物素化 ,然后以阴离子交换树脂纯化 ,得到的纯化A2_NLV单体与Streptavidin_PE按 4 :0 8比例混合形成四聚体 ,结合程度在 85 %以上 ,流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA_A2 + 供者的特异性CTL结合活性。总之 ,这种简化的四聚体制备程序 ,不仅有利于该技术的推广 ,为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台。

关键词：人类白细胞抗原四聚体细胞毒T淋巴细胞包涵体人巨细胞病毒

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PKCθ在T细胞活化和IL-2表达中的作用

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国外医学（免疫学分册） 2004年第6期27卷 346-350页

作者：杜丽蕊何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室（硕士研究生），广州510632 广东省暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

蛋白激酶C作为一种丝氨酸苏氨酸激酶在T细胞活化过程中起重要作用。然而,是PKC家族中哪个成员起主要作用,以及具体的作用机制都不清楚。90年代初,随着新型PKC异构型PKCθ的克隆成功,对于PKCθ在T细胞功能活化中的重要作用的认识也逐步... 详细信息

蛋白激酶C作为一种丝氨酸苏氨酸激酶在T细胞活化过程中起重要作用。然而,是PKC家族中哪个成员起主要作用,以及具体的作用机制都不清楚。90年代初,随着新型PKC异构型PKCθ的克隆成功,对于PKCθ在T细胞功能活化中的重要作用的认识也逐步加深。本文将主要就PKCθ在T细胞活化及IL2表达过程中作用的研究进展作一综述,并简要提及PKCθ在T细胞中的其他作用。

关键词： PKCθ 免疫突触 IL-2 核因子—κB 活化蛋白—1

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HIV病发病学和治疗学的新概念

HIV病发病学和治疗学的新概念

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中华中医药学会防治艾滋病分会2004年年会

作者：曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

一、HIV/AIDS的研究进晨简介艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）无疑是人类空前最严重的疾病,这不仅仅是因为它是一种流行范围最广的传染病,而且它还是一种死亡率几乎高达100%的疾病。自从1983年证实人类免疫缺陷病毒（... 详细信息

一、HIV/AIDS的研究进晨简介艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）无疑是人类空前最严重的疾病,这不仅仅是因为它是一种流行范围最广的传染病,而且它还是一种死亡率几乎高达100%的疾病。自从1983年证实人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）是AIDS的病因以来,20多年过去了,HIV病（从HIV感染到AIDS发病整个病程称作"HIV病",即"HIV disease"）的流行还

关键词： HIV 免疫系统宿主细胞基因组细胞凋亡免疫活化 HAART 发病学治疗学

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PD-L2剪切异构体与EGFP融合蛋白的表达及其亚细胞定位研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第11期24卷 878-882页

作者：何贤辉徐丽慧曾耀英刘毅蔡小嫦暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 暨南大学生物工程研究所郑州大学第一附属医院皮肤科暨南大学第一附属医院皮肤科

目的　探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法　以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞... 详细信息

目的　探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法　以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果　从活化的人白细胞中克隆到常规剪切体PD L2Ⅰ和新型剪切异构体PD L2Ⅱ的cDNA ,后者删除了编码胞外区Ig C结构域的外显子 3。进而构建了PD L2Ⅰ EGFP和PD L2Ⅱ EGFP融合蛋白表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞。流式细胞仪分析显示 ,转染前者的细胞中既可检测到EGFP的表达又可在细胞膜上检测到PD L2表达 ;而转染后者的细胞中只能检测到EGFP的表达 ,在其细胞膜上不能检测到PD L2表达。共聚焦显微镜观察显示 ,PD L2Ⅰ EGFP主要分布于细胞膜表面 ,PD L2Ⅱ EGFP则主要分布于细胞内。结论　常规剪切体PD L2Ⅰ能正确定位于细胞膜表面 ,而新型剪切异构体PD L2Ⅱ则位于细胞内 ,不能运输至细胞膜 ,提示不同PD

关键词： PD 表达载体 EGFP 转染剪切体细胞膜融合蛋白亚细胞定位结构域哺乳动物细胞

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增强型绿色荧光蛋白在人软骨细胞中的表达及修复重建人软骨示踪方法的研究

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中国临床康复 2004年第20期8卷 3981-3983页

作者：江逊曾耀英何贤辉徐丽慧狄静芳冯铮肇静娴史剑波暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东省广州市510632 中山大学附属第一医院耳鼻喉科广东省广州市510080

目的:检测增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)基因在原代培养的人鼻中隔软骨细胞的转染效率及瞬时表达,建立原代培养的人鼻中隔软骨细胞的示踪方法,为用组织工程法修复重建人软骨寻求示踪方法提供依据。方法:... 详细信息

目的:检测增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP)基因在原代培养的人鼻中隔软骨细胞的转染效率及瞬时表达,建立原代培养的人鼻中隔软骨细胞的示踪方法,为用组织工程法修复重建人软骨寻求示踪方法提供依据。方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP-N1质粒,通过Amaxa细胞核转染仪将pEGFP-N1质粒转入原代培养的人鼻中隔软骨细胞,应用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其转染过程及瞬时表达情况,流式细胞仪检测其转染效率。结果:增强型绿色荧光蛋白在基因转染24h后得到了明显表达,48h后流式细胞仪检测其转化率为35.37%,且未影响软骨细胞的贴壁过程。结论:经pEGFP-N1质粒转染的原代培养的人软骨细胞仍能在体外存活,pEGFP-N1是转染原代培养的人软骨细胞较为理想的瞬时表达载体,也是组织工程化软骨形成过程的良好示踪剂。

关键词：生物医学工程软骨细胞荧光抗体技术基因表达转染

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HLA-A*0207重链胞外区原核表达载体的构建及表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2004年第4期25卷 413-419页

作者：何贤辉徐丽慧曾耀英刘毅蔡小嫦暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :克隆HLA -A 0 2 0 7(A2 )重链基因 ,构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BirAsubstratepeptide ,BSP)的A2重链胞外区原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT-PCR方法从HLA -A2 + 供者白细胞中克隆A2基因并进行DNA测... 详细信息

目的 :克隆HLA -A 0 2 0 7(A2 )重链基因 ,构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BirAsubstratepeptide ,BSP)的A2重链胞外区原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT-PCR方法从HLA -A2 + 供者白细胞中克隆A2基因并进行DNA测序 ,并以PCR方法构建在羧基端融合BSP的A2重链胞外区表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达。结果 :从 31名HLA -A2 + 供者白细胞中克隆到的基因经DNA测序显示 ,只有从供者 2得到的基因是HLA -A 0 2 0 7。将编码该基因编码重链胞外区 1- 2 75的序列和编码BSP的序列融合 ,构建融合蛋白表达载体 ,并以测序验证。融合蛋白在BL2 1(ED3)中获得高效表达 ,产物相对分子质量为 35 0 0 0 ,约占菌体总蛋白的 30 % ,主要存在于包涵体中 ,对包涵体进行洗涤后得到纯度为 80 %的重组蛋白。结论 :成功克隆HLA -A 0 2 0 7基因。

关键词：人类白细胞抗原 cDNA克隆融合蛋白包涵体

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CBA/N小鼠肝癌移植瘤的建立及重建SCID免疫的B淋巴细胞抗癌作用

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第四军医大学学报 2004年第11期25卷 998-1001页

作者：江逊张志培曾耀英王文亮黄立军施新猷暨南大学组织移植与免疫学教育部重点实验室广东广州510632 第四军医大学唐都医院儿科陕西西安710038 第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710033

目的 :研究CBA/N ,nude,SCID小鼠建立人肝癌模型和重建SCID免疫的特点 ,初步探讨B淋巴细胞及其抗体对肝癌细胞生长的排斥作用 .方法 :将体外培养的人肝癌细胞接种到B细胞缺陷的CBA/N ,T细胞缺陷的BALB/c nu ,T ,B细胞缺陷的SCID小鼠及... 详细信息

目的 :研究CBA/N ,nude,SCID小鼠建立人肝癌模型和重建SCID免疫的特点 ,初步探讨B淋巴细胞及其抗体对肝癌细胞生长的排斥作用 .方法 :将体外培养的人肝癌细胞接种到B细胞缺陷的CBA/N ,T细胞缺陷的BALB/c nu ,T ,B细胞缺陷的SCID小鼠及免疫重建的SCID小鼠中 ,观察瘤细胞生长特点 ;取实验小鼠血清 ,测定荷瘤鼠抗体Ig含量的变化 ,取小鼠血清与肝癌细胞作抗原抗体凝集试验 .结果 :CBA/N和用BALB/c小鼠外周血淋巴细胞重建的SCID(B PBL SCID)小鼠不成瘤 ,nude ,SCID和用CBA/N外周血淋巴细胞重建的SCID (C PBL SCID)小鼠 1 0 0 %成瘤 ;有B淋巴细胞的实验鼠 (包括B PBL SCID)测到的Ig达到mg/mL水平 ,血清能与肝癌产生凝集反应 .结论 :SCID小鼠是建立肿瘤模型和免疫重建及其肿瘤免疫研究的理想的实验动物 ;

关键词：肝癌细胞接种免疫缺陷小鼠 SCID免疫重建抗体

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通痹灵总碱对T细胞内Th1型细胞因子表达的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第1期20卷 113-116页

作者：李晓娟陈光星刘良王培训胡英杰曾耀英陈纪藩广州中医药大学免疫研究室广东广州510405 广州中医药大学第一附属医院广东广州510405 香港浸会大学中医药学院广州中医药大学热带病研究所广东广州510405 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

目的 :研究通痹灵总碱 (TBL)对T细胞中Th1型细胞因子表达的影响 ,并揭示其抗炎机制 ,为临床用药提供理论依据。方法 :分离小鼠肠系膜淋巴结细胞 ,加入不同浓度的TBL作用 1h ,再加多克隆刺激剂佛波醇酯 (PDB)和离子酶素 ,继续培养 4h收... 详细信息

目的 :研究通痹灵总碱 (TBL)对T细胞中Th1型细胞因子表达的影响 ,并揭示其抗炎机制 ,为临床用药提供理论依据。方法 :分离小鼠肠系膜淋巴结细胞 ,加入不同浓度的TBL作用 1h ,再加多克隆刺激剂佛波醇酯 (PDB)和离子酶素 ,继续培养 4h收获细胞 ,进行双色荧光素标记 ,以流式细胞术对Th1型细胞因子INF γ和TNF α的表达进行分析。结果 :2 0 0mg/L 和 10 0mg/L的TBL ,能显著抑制T细胞内INF γ和TNF α的表达。结论 :TBL可抑制Th1型炎症性细胞因子的表达。

关键词：通痹灵总碱 INF-γ TNF-α Th1细胞类风湿关节炎

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人骨髓间质干细胞作为软骨组织工程种子细胞的鉴定

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中国临床康复 2004年第2期8卷 236-237,T003页

作者：江逊崔鹏程曹云新陈文弦暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东省广州市510632 解放军第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科陕西省西安市710038 解放军第四军医大学免疫学教研室陕西省西安市710038

目的:为软骨组织工程寻求一种新的种子细胞来源,对从人骨髓中所分离培养的骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)进行鉴定。方法:利用流式细胞仪对所分离培养的细胞表面标志物(CD29,CD44,CD14,CD34,CD45)进行分析鉴定。结果:细胞... 详细信息

目的:为软骨组织工程寻求一种新的种子细胞来源,对从人骨髓中所分离培养的骨髓间质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)进行鉴定。方法:利用流式细胞仪对所分离培养的细胞表面标志物(CD29,CD44,CD14,CD34,CD45)进行分析鉴定。结果:细胞表面抗原抗CD29,CD44抗体为阳性,抗CD14,CD34,CD45抗体为阴性。结论:采用流式细胞仪对人MSCs鉴定结果可为组织工程种子细胞的获得提供基础。

关键词：人骨髓间质干细胞软骨组织工程种子细胞 MSCs 流式细胞仪 FACS

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