检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2004年第6期20卷 659-663页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表... 详细信息

目的 :克隆人PD L1基因的cDNA并构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中进行表达。方法 :以RT PCR法从活化的人淋巴细胞总RNA中 ,扩增并克隆PD L1的cDNA ,构建PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(ED3)中进行表达并鉴定。结果 :克隆到PD L1cDNA编码区的全长序列 ,经DNA测序证明其与已报道的序列一致。同时构建了在羧基端带有His6标签的PD L1胞外区基因的原核表达载体 ,并在大肠杆菌中表达。免疫印迹分析表明 ,在IPTG诱导后表达的PD L1胞外区蛋白 ,相对分子质量 (Mr)为 2 50 0 0 ,与理论值的大小相符。该重组蛋白能与抗His6标签的单抗 (mAb)特异性反应。结论 :成功地克隆PD L1基因 ,其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达 ,为利用PD L1转基因修饰移植物或以PD

关键词： PD-L1 cDNA克隆淋巴细胞重组蛋白

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小檗碱对DNFB诱导的小鼠迟发型超敏反应的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第4期21卷 418-421页

作者：杜丽蕊何贤辉徐丽慧曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的:研究小檗碱(Ber)对二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:BALB/c小鼠分为对照组、DTH组与Ber处理的DTH组。对照组以不含DNFB的溶剂处理,DTH组以5g/LDNFB腹部致敏、耳廓激发的方法... 详细信息

目的:研究小檗碱(Ber)对二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:BALB/c小鼠分为对照组、DTH组与Ber处理的DTH组。对照组以不含DNFB的溶剂处理,DTH组以5g/LDNFB腹部致敏、耳廓激发的方法建立模型,Ber处理的DTH组每天腹腔注射(i.p)Ber,连续7d,总剂量为30mg/kg体质量。激发后48h,取小鼠双耳称重了解Ber对炎症抑制率的影响。镜下观察耳廓局部组织的变化;以结晶紫法检查Ber对脾脏T淋巴细胞与细胞外基质(ECM)黏附作用的影响;以膜联蛋白V(AnnexinV)染色检查淋巴结细胞的凋亡率。结果:双耳称重的结果显示,Ber处理的DTH组与DTH组具有显著的差异(P<0.05),能明显抑制DNFB引起的炎症反应;耳廓局部组织学检测也表明,Ber能够抑制DNFB诱导的DTH,明显减少淋巴细胞的浸润。Ber处理的DTH组的T细胞与ECM的黏附能力明显降低(P<0.05)。Ber处理的DTH组与DTH组和对照组的细胞凋亡率均无明显差异(P>0.05)。结论:Ber对DNFB诱导的小鼠DTH具有明显的抑制作用,降低小鼠T细胞与ECM的黏附能力可能是其抑制DTH的机制之一。

关键词：小檗碱淋巴细胞细胞黏附迟发型超敏反应

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喜树碱诱导的HL-60细胞凋亡过程中线粒体的变化

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 144-147页

作者：贺芳曾耀英王通邢飞跃林羿梁佩燕肇静娴暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:研究喜树碱(CPT)诱导的人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60凋亡过程中线粒体的质量和膜电势的变化。方法:以CPT诱导HL-60细胞凋亡为模型,利用膜联蛋白V(annexinV)-FITC/PI双染流式细胞术,研究HL-60细胞的凋亡和坏死。用DiOC6(3)染色流... 详细信息

目的:研究喜树碱(CPT)诱导的人早幼粒细胞性白血病细胞HL-60凋亡过程中线粒体的质量和膜电势的变化。方法:以CPT诱导HL-60细胞凋亡为模型,利用膜联蛋白V(annexinV)-FITC/PI双染流式细胞术,研究HL-60细胞的凋亡和坏死。用DiOC6(3)染色流式细胞术,检测线粒体的膜电势(△ψm)。用NAO染色流式细胞术,检测线粒体的质量。结果:在4×10-6mol/LCPT的诱导下,HL-60细胞(12h)早期的凋亡率为(12.75±4.61)%,对照组为(2.88±2.49)%,二者相比较差异显著(P<0.01);CPT组坏死比率为(3.48±1.67)%,对照组为(0.71±1.10)%(P<0.01)。PI染色的结果显示,HL-60细胞(12h)晚期凋亡细胞的百分率,CPT组为(3.52±1.07)%,对照组为(0.46±1.06)%(P<0.01)。同时观察到,G2/M期细胞出现阻滞,G2/M期细胞的百分率,对照组为(22.46±2.19)%,CPT组为(13.45±1.91)%(P<0.01)。在12h时间点,CPT组线粒体的质量显著低于对照组(P<0.01),低线粒体质量的细胞所占百分率,对照组为(4.53±1.26)%,CPT组为(25.74±2.09)%。同时,CPT组线粒体的膜电势显著下降(P<0.01),CPT组线粒体膜电势降低的比率为(17.71±5.23)%,对照组为(1.64±2.00)%。结论:CPT诱导HL-60细胞凋亡过程中,线粒体的质量和膜电势均有所下降,但其去极化作用增强。

关键词：喜树碱人HL-60细胞凋亡线粒体

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免疫突触形成过程中T细胞受体的重定向运动:涡旋驱动模型

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中国免疫学杂志 2005年第11期21卷 818-821,825页

作者：刘顺会韩博平曾耀英何贤辉广东药学院广州510224 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510623

目的:建立T细胞受体(TCR)在免疫突触形成过程中作重定向(reorientation)运动的机制模型.方法:基于经典流体力学环境中的双分子反应传能原理,提出了T细胞受体的涡旋驱动模型,利用免疫突触内耦合的受体或配体分子作为涡源驱动T细胞受体分... 详细信息

目的:建立T细胞受体(TCR)在免疫突触形成过程中作重定向(reorientation)运动的机制模型.方法:基于经典流体力学环境中的双分子反应传能原理,提出了T细胞受体的涡旋驱动模型,利用免疫突触内耦合的受体或配体分子作为涡源驱动T细胞受体分子的募集.结果:模型计算的结果表明,在强度及作用频率同时具备一定范围的涡旋连续驱动下,TCR重定向运动速度可达到实验测定的范围(0.04～0.1 μm/s).结论:本模型证明突触内受体/配体对耦合时通过将其结合自由能转化为细胞内外流体涡旋运动的机械能可能直接提供了TCR重定向运动的驱动力.

关键词：免疫突触 T细胞受体重定向运动涡旋

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HLA—A0201与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在K562细胞的表达和定位

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中国病理生理杂志 2004年第5期20卷 705-710页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与HLA -A 0 2 0 1(A 0 2 0 1)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体 ,分析其在K5 6 2细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT -PCR方法克隆A 0 2 0 1cDNA ,构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,转染K5 6 2... 详细信息

目的 :构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)与HLA -A 0 2 0 1(A 0 2 0 1)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体 ,分析其在K5 6 2细胞中的表达和亚细胞定位。方法 :以RT -PCR方法克隆A 0 2 0 1cDNA ,构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,转染K5 6 2细胞 ,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果 :从两个HLA -A2阳性供者外周血细胞中克隆到A 0 2 0 1cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码 ,成功构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K5 6 2细胞 ,5h后A 0 2 0 1和EGFP的表达百分率分别为 2 5 12± 2 2 6、2 7 37± 3 5 9,2 4h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上 ,胞内分布较少。相反 ,转染空载体的细胞不表达A 0 2 0 1分子 ,仅表达EGFP ,且其在细胞内呈弥散样分布。结论 :成功构建A 0 2 0 1-EGFP融合蛋白表达载体 ,并在K5 6 2细胞中得到表达 ,表达产物主要分布于细胞膜表面 ,提示表达该融合蛋白的K5 6 2细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。

关键词： HKA—A2抗原绿色荧光蛋白质类融合蛋白质类显微镜检查共焦

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尿酸钠对BALB/c小鼠抗体应答及树突状细胞和迟发型超敏反应的影响

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中国病理生理杂志 2010年第3期26卷 424-429页

作者：刘春永王飞鹏郭贺高琦何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨尿酸钠作为佐剂对BALB/c小鼠体液和细胞免疫应答的影响。方法:利用尿酸钠悬浮液为佐剂、天花粉蛋白(TCS)为免疫原对BALB/c小鼠进行免疫,以酶联免疫测定法检测特异性抗体IgG的效价。体外诱导小鼠树突状细胞(DC),流式细胞术分析D... 详细信息

目的:探讨尿酸钠作为佐剂对BALB/c小鼠体液和细胞免疫应答的影响。方法:利用尿酸钠悬浮液为佐剂、天花粉蛋白(TCS)为免疫原对BALB/c小鼠进行免疫,以酶联免疫测定法检测特异性抗体IgG的效价。体外诱导小鼠树突状细胞(DC),流式细胞术分析DC表型,评价尿酸钠体外对DC成熟的效应。以二硝基氟苯建立迟发型超敏反应(DTH)模型,分析尿酸钠在体内对细胞免疫应答的影响。结果:传统弗氏佐剂可极大地增强小鼠对TCS的抗体应答,尿酸钠佐剂对抗体应答不但没有促进,与单独使用免疫原相比,抗体应答反而明显降低。流式细胞术分析显示,尿酸钠对DC表达CD11c和CD83没有影响,但可明显提高MHCII的表达水平。DTH模型中,尿酸钠增强致敏原引发的耳廓肿胀程度,并促进DTH小鼠淋巴细胞的体外增殖能力。结论:尿酸钠悬浮液作为佐剂,对细胞免疫有显著增强作用,而对体液免疫应答却有一定的抑制作用,提示该佐剂在疫苗研究中有潜在应用前景。

关键词：尿酸钠体液免疫应答树突细胞迟发型超敏反应

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染料木黄酮抑制小鼠变应性接触性皮炎的实验研究

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中国病理生理杂志 2006年第5期22卷 885-888页

作者：丛林曾耀英蔡小嫦易敏施军暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨染料木黄酮(Gen)对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用。方法:建立二硝基氟苯(DNFB)诱发的小鼠ACD模型,观测不同剂量Gen对小鼠耳廓肿胀程度、鼠耳皮肤组织病理变化、体重及胸腺指数、脾指数的影响。结果:各剂量Gen组均能明... 详细信息

目的:探讨染料木黄酮(Gen)对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用。方法:建立二硝基氟苯(DNFB)诱发的小鼠ACD模型,观测不同剂量Gen对小鼠耳廓肿胀程度、鼠耳皮肤组织病理变化、体重及胸腺指数、脾指数的影响。结果:各剂量Gen组均能明显抑制DNFB诱发的小鼠耳廓肿胀,抑制炎症细胞浸润,降低胸腺指数,且不影响小鼠体重增长。低剂量Gen组增加脾指数,高剂量Gen组降低脾指数。结论:Gen对DNFB诱发的小鼠ACD有明显抑制作用。

关键词：染料木黄酮变应性接触性皮炎实验

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麒麟菜中蕨藻红素抗肿瘤活性研究

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中国病理生理杂志 2002年第7期18卷 851-852页

作者：杨宜婷岑颖洲肇静娴狄静芳暨南大学化学系广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的 :探讨把蕨红藻素 (caulerpin)发展成为抗肿瘤药物的可能性。方法 :检测caulerpin对细胞株HL6 0的细胞毒作用及诱导细胞凋亡作用。结果 :Caulerpin对HL6 0细胞有一定的细胞毒和细胞诱导凋亡作用。结论

关键词：麒麟菜抗肿瘤活性蕨藻红素药物筛选试验细胞凋亡

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一种分离、培养扩增小鼠NK细胞方法的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 379-381,389页

作者：杨志刚曾耀英何贤辉王通江逊唐德燊暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 广东医学院附属医院广东湛江524001

目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法。方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC抗小鼠CD3和PE抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪... 详细信息

目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法。方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC抗小鼠CD3和PE抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪(FACS)检测NK细胞的纯度。以YAC -1为靶细胞,用MTT比色法检测NK细胞的杀伤活性。结果:将两步黏附分离法分离的2×107个脾MNC培养5、10、15、20d,计数细胞的总数并检测CD3-NK1.1+细胞百分率,分别为0.5×107、1.4×107、2.6×107、3.0×107和18.36%、43.44%、55.68%、60.03%。效靶细胞25∶1时,NK细胞的杀伤率分别为54.38%、66.54%、79.38%和83.86%,明显高于脾MNC(41.93%)(P<0.01)。MACS法纯化前后细胞的总数和CD3-NK1.1+细胞的百分率,分别为1.0×108、1.5×106和2.54%、93.60%;但纯化后的细胞在体外培养20d时,只扩增到1.9×106个。结论:用两步黏附分离法分离的小鼠NK细胞,培养2～3wk可获得大量的NK细胞,纯度可达55%～60%;在效靶细胞为25∶1时,NK细胞对YAC1细胞的杀伤率约为80%。

关键词： NK细胞分离培养扩增增殖 IL-2

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白藜芦醇对小鼠T细胞活化、增殖及细胞因子分泌的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第6期21卷 697-699,703页

作者：俞瑜曾耀英季煜华肇静娴刘良暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 香港浸会大学中医药学院

目的:研究白藜芦醇(RSV)对小鼠T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响,为阐明其免疫抑制作用提供实验依据。方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的RSV预先孵育1h,用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化增殖。采用3H-TdR掺... 详细信息

目的:研究白藜芦醇(RSV)对小鼠T淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响,为阐明其免疫抑制作用提供实验依据。方法:无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的RSV预先孵育1h,用多克隆刺激剂佛波醇酯和离子霉素刺激T细胞活化增殖。采用3H-TdR掺入法检测RSV对T细胞增殖的影响;用RT-PCR检测IL-2及IFN-γmRNA的表达;用胞内细胞因子染色法分析IL-2和IFN-γ的分泌。结果:RSV能抑制T细胞增殖,也能在mRNA水平及蛋白水平上抑制IL-2及IFN-γ的分泌。结论:RSV对T细胞的免疫抑制作用,可能与其抑制T细胞的活化、增殖和细胞因子的分泌有关。

关键词：白藜芦醇活化增殖细胞因子

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