检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2006年第3期22卷 477-482页

作者：徐丽慧刘毅何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

以克隆的CD40cDNA为模板,经多步PCR构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6标签的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表达载体,在大肠杆菌中获得高效表达,分子量为27kD,与理论大小相符,表达产物主要存在于... 详细信息

以克隆的CD40cDNA为模板,经多步PCR构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6标签的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表达载体,在大肠杆菌中获得高效表达,分子量为27kD,与理论大小相符,表达产物主要存在于包涵体中,对包涵体蛋白进行稀释复性和纯化得到可溶性的sCD40IZ重组蛋白,该蛋白在溶液中的分子量为91kD,表明最有可能以三聚体形式存在。活性分析显示该蛋白能够与细胞上的CD40L结合,并且其结合活性与不含IZ基序的可溶性CD40相比明显提高。这些结果表明,在可溶性CD40羧基端融合IZ基序能够促进形成三聚体,并且具有增强的配基结合活性。

关键词： CD40,三聚化,异亮氨酸拉链,原核表达,包涵体复性

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雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用

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中药材 2005年第6期28卷 499-502页

作者：俞瑜曾耀英刘良季煜华肇静娴暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(C... 详细信息

目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RTPCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL2、IFNγmRNA的表达的影响。结果TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL2及IFNγmRNA的表达。结论TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一。

关键词：雷公藤甲素小鼠体外活化 IFN-γmRNA表达 RT-PCR技术免疫抑制作用流式细胞仪检测 CD69 IL-2 CD25 细胞因子表达活化标志 T淋巴细胞分子药理学淋巴结细胞 T细胞活化 TRD 无菌分离不同浓度刀豆蛋白单克隆体荧光标记

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NK细胞对小鼠异基因骨髓移植造血及免疫重建的影响

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中华血液学杂志 2004年第12期25卷 713-716页

作者：杨志刚曾耀英何贤辉王青江逊暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

目的　研究自然杀伤 (NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)中对造血及免疫重建的影响。方法　以近交系小鼠C5 7BL/ 6 (H 2 b)为供鼠、BALB/c(H 2 d)为受鼠 ,在allo BMT同时输入供鼠外周T细胞和 (或 )NK细胞 ,计数受鼠移植后不同时... 详细信息

目的　研究自然杀伤 (NK)细胞在小鼠异基因骨髓移植 (allo BMT)中对造血及免疫重建的影响。方法　以近交系小鼠C5 7BL/ 6 (H 2 b)为供鼠、BALB/c(H 2 d)为受鼠 ,在allo BMT同时输入供鼠外周T细胞和 (或 )NK细胞 ,计数受鼠移植后不同时间的白细胞数 ;用流式细胞仪检测骨髓CD34+ 细胞和外周淋巴细胞中CD3+ 和CD19+ 细胞及表达供鼠基因的H 2Kb + 细胞百分率 ,比较不同移植组存活率、植入水平、造血及免疫重建等。结果　输入供鼠外周NK细胞移植组与不输入NK细胞组比较 ,存活率显著增高 (6 0d存活率为 70 %vs 0 % ) ;白细胞计数、CD19+ 细胞及骨髓CD34+ 细胞计数恢复快 ;H 2Kb + 细胞表达水平高 (86 .6 8± 4 .4 5vs 4 .6 8± 0 .32 )。移植后第 2 8天 (+2 8天 )输入NK细胞组CD3+ 细胞水平 [(33.6 9± 3.36 ) % ]低于未输入NK细胞组 [(5 0 .4 0± 5 .0 6 ) % ](P <0 .0 1) ,在 +6 0天两组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　在小鼠allo BMT中 ,同种异基因反应性NK细胞可以提高造血干细胞的植入水平、促进造血及免疫重建、增高移植受鼠的生存率。

关键词： NK细胞免疫重建造血近交系小鼠异基因骨髓移植 BMT CD19 BALB/c 细胞水平细胞表达

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紫杉醇对小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖作用的流式细胞术分析

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中国药理学通报 2005年第6期21卷 705-707页

作者：彭桉平曾耀英俞瑜肇静娴狄静芳暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的研究紫杉醇对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖的影响,并探讨其机制。方法利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的... 详细信息

目的研究紫杉醇对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖的影响,并探讨其机制。方法利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDASE)标记技术结合流式细胞术分析PDB+Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖指数。结果PTX无论对ConA或PDB刺激组T细胞CD69表达均无抑制作用(P>0.05),而对T细胞CD25表达有明显抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系;PTX无论对ConA或PDB+Ion刺激组T细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系。但在ConA及PDB+Ion刺激初立即或是24h后加入不同浓度的PTX,PTX抑制T细胞增殖作用无差异(P>0.05)。结论PTX可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞中后期活化及增殖,其作用机制可能与早期活化相关蛋白PTK及PKCθ无关,而与PKCθ下游活化信号相关。

关键词：紫杉醇 T淋巴细胞 CD69 CD25 增殖流式细胞术

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脂多糖诱发的同基因妊娠BALB/c和NOD/SCID小鼠早产模型

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第1期23卷 32-35页

作者：林羿刘兆宇狄静芳曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:研究脂多糖(LPS)诱发同基因妊娠BALB/c小鼠和非肥胖性糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠早产的机制。方法:在预先阻断或未阻断Toll样受体4(TLR4)的条件下采用LPS刺激,并比较各组BALB/c和NOD/SCID小鼠的早产率和胚胎死亡率。... 详细信息

目的:研究脂多糖(LPS)诱发同基因妊娠BALB/c小鼠和非肥胖性糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠早产的机制。方法:在预先阻断或未阻断Toll样受体4(TLR4)的条件下采用LPS刺激,并比较各组BALB/c和NOD/SCID小鼠的早产率和胚胎死亡率。由于预实验显示预期的早产均发生于孕16d,因此,实验中在早产发生之前处死小鼠,收集每只孕鼠的胎盘。采用流式细胞术检测胎盘CD45+细胞表面TLR4、CD80和细胞内TNF-α的表达率。结果:采用LPS可诱发BALB/c小鼠早产,而NOD/SCID小鼠则对LPS的诱导有抵抗。经LPS刺激后,TLR4的表达在BALB/c和NOD/SCID小鼠均无显著改变,但是两组小鼠CD45+CD80+细胞的百分率均升高。相反,LPS刺激后仅BALB/c小鼠CD45+TNF-α+细胞的百分率升高,而NOD/SCID小鼠则否。通过预先阻断TLR4的表达可消除LPS对BALB/c小鼠CD80和TNF-α表达的影响,并显著降低LPS诱发的早产率。结论:虽然LPS未能改变TLR4的表达,但是二者相互作用,可激发CD45+CD80+细胞的动员,导致炎性细胞因子产生增多,并最终导致早产。BALB/c和NOD/SCID小鼠对LPS刺激的敏感性存在差异,提示NOD/SCID小鼠缺乏功能正常的T细胞和NK细胞,可能是这种小鼠对LPS诱发的早产有抵抗的原因之一。

关键词：免疫缺陷妊娠耐受早产啮齿动物模型

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胸腺细胞和细胞器水平的线粒体膜电势研究

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分子细胞生物学报 2006年第2期39卷 132-138页

作者：王通曾耀英邢飞跃梁佩燕梁兆端贺芳暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510630

以地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡；利用PI和AnneXin V/PI流式细胞术分别检测细胞晚期和早期凋亡；利用JC-1和DiOC_6(3)/PI在细胞水平检测凋亡中线粒体膜电势(△ψm)变化：抽提线粒体,利用JC-1直接染色技术检测现存线粒体△ψm情况... 详细信息

以地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡；利用PI和AnneXin V/PI流式细胞术分别检测细胞晚期和早期凋亡；利用JC-1和DiOC_6(3)/PI在细胞水平检测凋亡中线粒体膜电势(△ψm)变化：抽提线粒体,利用JC-1直接染色技术检测现存线粒体△ψm情况。实验结果显示,DEX显著诱导胸腺细胞早期和晚期凋亡,凋亡细胞主要来自G_0/G_1期；细胞水平可见DEX介导与△ψm相关的J-aggregate和DiOC_6(3)可染性降低,同时介导线粒体数量显著降低,6h细胞膜完整性无显著变化：单纯线粒体检测结果显示,多数线粒体维持正常△ψm。提示,DEX介导胸腺细胞凋亡中线粒体数量降低,现存线粒体多保持着正常△ψm以维持凋亡过程细胞能量供给。

关键词：凋亡细胞水平线粒体膜电势单纯线粒体功能

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活体染料CFDA-SE在淋巴细胞增殖研究中的应用

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细胞与分子免疫学杂志 2003年第2期19卷 109-111页

作者：肇静娴曾耀英何贤辉王南狄静芳曾山暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB +ion omycin或C... 详细信息

目的 :探讨活体染料CFDA SE在淋巴细胞增殖研究中的应用价值。方法 :利用CFDA SE染色、荧光抗体标记和流式细胞术 ,检测淋巴细胞及其亚群在多克隆刺激剂作用下荧光强度的变化 ,并应用相关软件分析其增殖情况。结果 :PDB +ion omycin或ConA刺激 4 8h后均出现淋巴细胞分裂 ,表现为CFSE荧光强度的系列减半。环孢菌素A(CsA)可抑制ConA促进淋巴细胞增殖的作用 ,CFSE荧光无减半。ConA刺激4 8h后 ,出现CD4 + T细胞和CD8+ T细胞增殖不同步的现象 ,72h后这一现象更加明显。经ModFitTM 软件拟合后 ,得到的各项增殖指标显示 ,ConA对CD8+ T细胞的促增殖作用强于对CD4 + T细胞的作用。结论 :CFDA SE染色结合荧光抗体标记和流式细胞术。

关键词：活体染料羧基荧光素乙酰乙酸 CFDA-SE 淋巴细胞细胞增殖荧光抗体标记流式细胞术

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异黄酮Genistein对T细胞体外活化CD69表达的影响

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中国免疫学杂志 2002年第11期18卷 779-782页

作者：肇静娴曾洁铭曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

目的 :研究异黄酮Genistein对T淋巴细胞活化的影响 ,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性。方法 :应用荧光标记的单克隆抗体和流式细胞技术 ,在全血培养体系中于 2h和 6h时间点检测分别经 10 ,5 0或 10 0 μmol L浓度Genistein预培养的 ... 详细信息

目的 :研究异黄酮Genistein对T淋巴细胞活化的影响 ,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性。方法 :应用荧光标记的单克隆抗体和流式细胞技术 ,在全血培养体系中于 2h和 6h时间点检测分别经 10 ,5 0或 10 0 μmol L浓度Genistein预培养的 ,PHA或PDB诱导活化的T细胞的CD6 9表达百分率。结果 :培养 2h后 ,Genistein对PHA活化组的抑制作用要强于PDB活化组 ,P <0 0 5 ;培养 6h后 ,Genistein对PHA活化组的抑制作用同样强于PDB活化组 ,P <0 0 5 ,但较之 2h时间点均有所降低 ;无论PHA活化组或PDB活化组 ,Genistein对T细胞CD6 9表达率的抑制效应均随作用浓度的升高而增强。结论 :Genistein对PHA和PDB诱导活化的T细胞的CD6 9表达率均有明显的抑制作用 ,这种抑制作用存在浓度依赖关系。Genistein有潜力发展成一种免疫干预药物。

关键词： Genistein T淋巴细胞活化

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HLA-A2^+供者外周血hCMV特异性CTL的定量及其表型分析

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 247-251页

作者：查庆兵何贤辉徐丽慧迟晓云曾耀英暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:利用加载人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽NLV(pp65495-503)的HLA-A0201(A2-NLV)四聚体,探讨四聚体染色条件的优化及其在特异性CTL表型分析中的应用。方法:取HLA-A2+供者外周血,以A2-NLV四聚体/PE在不同条件下染色,然后以... 详细信息

目的:利用加载人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽NLV(pp65495-503)的HLA-A0201(A2-NLV)四聚体,探讨四聚体染色条件的优化及其在特异性CTL表型分析中的应用。方法:取HLA-A2+供者外周血,以A2-NLV四聚体/PE在不同条件下染色,然后以anti-CD3-FITC和anti-CD8-APC标记,流式细胞术分析染色结果,寻找四聚体最佳染色条件,并分析特异性CTL的表型和活化抗原表达。结果:以全血样进行四聚体染色结果优于分离的PBMC。A2-NLV四聚体用量为0.3μg时,与100μL全血于4℃温育1h,特异性染色效果最佳,而与CD8-T细胞非特异性结合很低。以此优化条件进行特异性CTL表型分析,结果显示CD28阳性的A2-NLV四聚体特异性CTL的百分率较非特异性CTL低,表达CD57的百分率较非特异性CTL高,CD25分子只表达于活化的特异性CTL上。结论:通过对染色条件进行优化可明显提高四聚体染色的特异性,降低非特异性结合,优化的四聚体染色法能用于抗原特异性CTL的表型和功能分析。

关键词： HLA-A2四聚体巨细胞病毒 CTL 四聚体染色

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CD4^+、CD8^+、CD25^+、CD69^+淋巴细胞在种间、同种胚胎植入期母体及同期假孕小鼠淋巴结中的差异

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中国免疫学杂志 2007年第8期23卷 714-720页

作者：王希朝曾耀英刑飞跃肇静娴狄静芳冯铮曾山暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

目的:研究种间胚胎植入期母体淋巴结中表达CD4+、CD8+、CD25+、CD69+T细胞的百分比变化,并探讨这种变化对种间胚胎植入的影响。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测种间、同种胚胎移植以及同时期假孕母体淋巴结中表达... 详细信息

目的:研究种间胚胎植入期母体淋巴结中表达CD4+、CD8+、CD25+、CD69+T细胞的百分比变化,并探讨这种变化对种间胚胎植入的影响。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测种间、同种胚胎移植以及同时期假孕母体淋巴结中表达CD4+、CD8+、CD25+、CD69+的T淋巴细胞对应CD3+细胞的百分率。结果:与同种胚胎移植后的植入相比,种间胚胎移植后植入期母体淋巴结中,CD3+CD4+、CD3+CD25+淋巴细胞占CD3+淋巴细胞的比例均极显著低于同种胚胎移植的植入期受体(P<0.01);而CD3+CD8+淋巴细胞占CD3+淋巴细胞的比例显著低于同种胚胎移植的植入期受体(P<0.05);CD3+CD69+淋巴细胞在种间、同种胚胎植入期母体淋巴结中的比例却无显著差异(P>0.05)。种间胚胎植入时母体淋巴结中CD4+/CD8+的比例,与同种胚胎植入受体和假孕小鼠相比,三者之间均无统计学意义上的显著差异(P>0.05)。结论:种间胚胎移植后从植入期开始,母体淋巴结中的淋巴细胞就发生了不利于胚胎植入的全身免疫反应。

关键词：大鼠小鼠种间妊娠胚胎植入流式细胞术

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