检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2007年第10期27卷 878-882页

作者：林羿仲艳敏 Nisar Khan 刘兆宇狄静芳曾山 Robbert Benner 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 荷兰鹿特丹Erasmus医学中心

目的观察hCG来源的寡肽缬-亮-脯-丙-亮-脯-谷胺(Val-Leu-Pro-Ala-Leu-Pro-Gln,VL- PALPQ)对双链RNA(dsRNA)诱导建立的小鼠流产模型妊娠结局的影响,并通过对淋巴细胞亚群及细胞内IL-12水平的分析研究其免疫调节机制。方法在BALB/c×c... 详细信息

目的观察hCG来源的寡肽缬-亮-脯-丙-亮-脯-谷胺(Val-Leu-Pro-Ala-Leu-Pro-Gln,VL- PALPQ)对双链RNA(dsRNA)诱导建立的小鼠流产模型妊娠结局的影响,并通过对淋巴细胞亚群及细胞内IL-12水平的分析研究其免疫调节机制。方法在BALB/c×c57BL/6小鼠孕7.5 d注射dsRNA以建立诱发性流产模型,孕期多次腹腔注射VLPALPQ进行干预,对照组以PBS代替。分别计算孕9 d和13 d胚胎吸收率,并用4色流式细胞术分析外周血和胎盘中多种淋巴细胞亚群及CD45+细胞内IL-12的变化。结果VLPALPQ处理组孕9 d时胚胎吸收率较诱发性流产组有明显下降(P<0.05),孕13 d时下降更为显著(P<0.01)。与此相应,外周血和胎盘中CD45+细胞内IL-12的表达均显著下降(P< 0.01),胎盘中活化型淋巴细胞比率也显著下降。另外,孕13 d时共刺激因子CD86的表达也明显减少。结论VLPALPQ可通过抑制免疫细胞的活性,减弱IL-12的表达,阻断dsRNA所引起的TH1型免疫反应的增强,从而降低小鼠的流产率。

关键词：动物模型免疫耐受免疫调节诱发性流产妊娠

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激光共聚焦显微镜在细胞内ROS研究中的激光干扰问题

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哈尔滨医科大学学报 2007年第1期41卷 8-10页

作者：钱中清曾耀英季煜华何贤辉肇静娴狄静芳暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

目的对激光共聚焦显微镜在细胞内ROS研究中的激光干扰问题进行探讨。方法ROS探针标记ECV- 304及RAW264．7细胞后,激光共聚焦显微镜488nm波长检测器分别进行连续和间隔观测1200s,比较两种观测方式下细胞荧光强度的变化;外源性加入H2O2,... 详细信息

目的对激光共聚焦显微镜在细胞内ROS研究中的激光干扰问题进行探讨。方法ROS探针标记ECV- 304及RAW264．7细胞后,激光共聚焦显微镜488nm波长检测器分别进行连续和间隔观测1200s,比较两种观测方式下细胞荧光强度的变化;外源性加入H2O2,证实间隔观测时系统的灵敏性。结果在连续观测方式下,细胞荧光强度短时间内显著增强,改为间隔观测后细胞荧光强度变化缓慢,但维持在低水平且在外源性加入H2O2后细胞荧光强度迅速增强。结论激光共聚焦显微镜激发激光可引起细胞大量产生ROS,对检测系统造成干扰,采用间隔观测的方法可显著改善系统自身的这种缺陷,并能保持系统的检测灵敏性。

关键词：激光共聚焦显微镜活性氧 ECV-304 RAW264.7

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染料木黄酮抑制生长板软骨细胞的增殖与基质合成

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中国病理生理杂志 2007年第8期23卷 1590-1592页

作者：季煜华曾耀英俞瑜暨南大学组织移植与免疫研究中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨染料木黄酮对大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)的形态、增殖和胞外基质成分合成的影响。方法:原代培养RGC,1×10-6μmol/L-1×10-4μmol/L染料木黄酮处理第1代RGC 24 h,观察RGC形态,同位素掺入检测RGC增殖、胶原和蛋白多糖合... 详细信息

目的:探讨染料木黄酮对大鼠肋生长板软骨细胞(RGC)的形态、增殖和胞外基质成分合成的影响。方法:原代培养RGC,1×10-6μmol/L-1×10-4μmol/L染料木黄酮处理第1代RGC 24 h,观察RGC形态,同位素掺入检测RGC增殖、胶原和蛋白多糖合成,RT-PCR检测collagenⅡ和aggrecan基因表达。结果:染料木黄酮改变了RGC的形态,随着浓度的升高,突起和漂浮细胞的数量增加。染料木黄酮剂量依赖性地抑制RGC的增殖、胶原和蛋白多糖的合成(P<0.05),以及collagenⅡ和aggrecan mRNA的转录。结论:染料木黄酮抑制RGC的增殖和胞外基质的合成。

关键词：染料木黄酮软骨细胞生长面胶原Ⅱ型基因,aggrecan

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小鼠NKT细胞体外扩增的初步研究

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哈尔滨医科大学学报 2007年第6期41卷 541-543页

作者：郭蓉姣黄秀艳梁兆端曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术... 详细信息

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术和流式细胞术(FACS)检测NKT细胞纯度,并用MTT法检测其对靶细胞K562的杀伤活性。结果脾NKT细胞在第0、4、8、12天计数细胞总数为0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107和(2.2±0.2)×107,第0、4、8、12天纯度分别为(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%和(21.36±4.34)%;α-Gal-cer和rhIL-2作用下,纯化的NKT细胞较脾新鲜分离的单个核细胞对靶细胞K562的杀伤作用强。在效靶比20∶1时,培养时间为4、8,12天的NKT细胞杀伤率分别为52.7%、71.2%和85.7%,明显高于脾MNC33.8%(P<0.05)。结论在α-Galcer和rhIL-2作用下,小鼠NKT细胞得到扩增,细胞纯度约为22%。在效靶比20∶1时,NKT细胞对K562细胞杀伤率约为86%。

关键词： NKT细胞 α-Galcer IL-2

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氧化苦参碱对淋巴细胞增殖和调节性T细胞(Tr)数量的影响

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中国病理生理杂志 2007年第7期23卷 1368-1372页

作者：伍斌曾耀英蔡小嫦施军丛林王通曾祥凤中南大学湘雅一医院皮肤科湖南长沙410008 暨南大学组织移植和免疫中心教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632

目的:分析氧化苦参碱(OMT)对小鼠外周血调节性T细胞(Tr细胞)数量及其对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学机制。方法:建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,腹腔注射(ip)不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HC... 详细信息

目的:分析氧化苦参碱(OMT)对小鼠外周血调节性T细胞(Tr细胞)数量及其对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学机制。方法:建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,腹腔注射(ip)不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT),在实验的第1d、7d、14d、21d、28d小鼠尾静脉采血,应用抗-CD3、抗-CD4、抗-CD25单抗进行免疫荧光标记,流式细胞术检测各组CD4+CD25+T细胞数量。利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响。结果:500、125和31mg/LOMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而16、8、4、2mg/LOMT可促进小鼠淋巴结T细胞增殖,但剂量依赖关系不明显。腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量,与HCT组、PBS组比较(P<0.01)。结论:OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈双向作用;腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量;提示:OMT是一种双向免疫调节剂。

关键词：苦参碱 T淋巴细胞

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晚孕期胎盘因子对小鼠淋巴细胞增殖的影响

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现代免疫学 2007年第2期27卷 125-128页

作者：李莉平林羿康佳丽夏薇王自能广州市第一人民医院妇产科广州510180 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学第一临床医学院妇产科教研室广州510632

通过晚孕期胎盘因子(PF)对小鼠淋巴细胞体外增殖的作用,探讨PF对正常机体免疫系统和免疫功能的效应。分离小鼠淋巴细胞,用ConA刺激其增殖,并分别与晚孕期不同浓度的PF作用,于48 h和72 h用活体染料羧基荧光素乙酰乙琥珀酰亚胺酯(CFSE)标... 详细信息

通过晚孕期胎盘因子(PF)对小鼠淋巴细胞体外增殖的作用,探讨PF对正常机体免疫系统和免疫功能的效应。分离小鼠淋巴细胞,用ConA刺激其增殖,并分别与晚孕期不同浓度的PF作用,于48 h和72 h用活体染料羧基荧光素乙酰乙琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,流式细胞术检测增殖。于48 h碘化丙啶染色,流式细胞术检测细胞周期分布。结果显示,晚孕期PF在48 h和72 h时间点均能显著促进ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应,且效应与剂量呈正相关。晚孕期各浓度PF组G0期所占比率均显著低于对照组,且浓度越大,比率越低,组间两两比较有统计学意义。各浓度PF组S期所占比率均显著高于对照组,各浓度PF组G2/M期所占比率均显著高于对照组,25%PF组G2/M期所占比率均显著高于5%PF组和15%PF组。晚孕期PF通过促进小鼠淋巴细胞由G1期向S和G2/M期而促进ConA刺激小鼠淋巴细胞的增殖反应,提示PF具有免疫调节的功能,可以提高机体的免疫功能。

关键词：胎盘因子人免疫缺陷病毒 CFSE 淋巴细胞增殖细胞周期分布

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可溶性三聚化CD40-异亮氨酸拉链融合蛋白的制备及鉴定

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生物工程学报 2006年第3期22卷 477-482页

作者：徐丽慧刘毅何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室

以克隆的CD40cDNA为模板,经多步PCR构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6标签的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表达载体,在大肠杆菌中获得高效表达,分子量为27kD,与理论大小相符,表达产物主要存在于... 详细信息

以克隆的CD40cDNA为模板,经多步PCR构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper,IZ)三聚化基序和His6标签的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表达载体,在大肠杆菌中获得高效表达,分子量为27kD,与理论大小相符,表达产物主要存在于包涵体中,对包涵体蛋白进行稀释复性和纯化得到可溶性的sCD40IZ重组蛋白,该蛋白在溶液中的分子量为91kD,表明最有可能以三聚体形式存在。活性分析显示该蛋白能够与细胞上的CD40L结合,并且其结合活性与不含IZ基序的可溶性CD40相比明显提高。这些结果表明,在可溶性CD40羧基端融合IZ基序能够促进形成三聚体,并且具有增强的配基结合活性。

关键词： CD40,三聚化,异亮氨酸拉链,原核表达,包涵体复性

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胸腺细胞和细胞器水平的线粒体膜电势研究

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分子细胞生物学报 2006年第2期39卷 132-138页

作者：王通曾耀英邢飞跃梁佩燕梁兆端贺芳暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510630

以地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡；利用PI和AnneXin V/PI流式细胞术分别检测细胞晚期和早期凋亡；利用JC-1和DiOC_6(3)/PI在细胞水平检测凋亡中线粒体膜电势(△ψm)变化：抽提线粒体,利用JC-1直接染色技术检测现存线粒体△ψm情况... 详细信息

以地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡；利用PI和AnneXin V/PI流式细胞术分别检测细胞晚期和早期凋亡；利用JC-1和DiOC_6(3)/PI在细胞水平检测凋亡中线粒体膜电势(△ψm)变化：抽提线粒体,利用JC-1直接染色技术检测现存线粒体△ψm情况。实验结果显示,DEX显著诱导胸腺细胞早期和晚期凋亡,凋亡细胞主要来自G_0/G_1期；细胞水平可见DEX介导与△ψm相关的J-aggregate和DiOC_6(3)可染性降低,同时介导线粒体数量显著降低,6h细胞膜完整性无显著变化：单纯线粒体检测结果显示,多数线粒体维持正常△ψm。提示,DEX介导胸腺细胞凋亡中线粒体数量降低,现存线粒体多保持着正常△ψm以维持凋亡过程细胞能量供给。

关键词：凋亡细胞水平线粒体膜电势单纯线粒体功能

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HLA-A2^+供者外周血hCMV特异性CTL的定量及其表型分析

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第2期22卷 247-251页

作者：查庆兵何贤辉徐丽慧迟晓云曾耀英暨南大学组织移植与免疫中心教育部重点实验室广东广州510632

目的:利用加载人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽NLV(pp65495-503)的HLA-A0201(A2-NLV)四聚体,探讨四聚体染色条件的优化及其在特异性CTL表型分析中的应用。方法:取HLA-A2+供者外周血,以A2-NLV四聚体/PE在不同条件下染色,然后以... 详细信息

目的:利用加载人巨细胞病毒(hCMV)结构蛋白pp65衍生抗原肽NLV(pp65495-503)的HLA-A0201(A2-NLV)四聚体,探讨四聚体染色条件的优化及其在特异性CTL表型分析中的应用。方法:取HLA-A2+供者外周血,以A2-NLV四聚体/PE在不同条件下染色,然后以anti-CD3-FITC和anti-CD8-APC标记,流式细胞术分析染色结果,寻找四聚体最佳染色条件,并分析特异性CTL的表型和活化抗原表达。结果:以全血样进行四聚体染色结果优于分离的PBMC。A2-NLV四聚体用量为0.3μg时,与100μL全血于4℃温育1h,特异性染色效果最佳,而与CD8-T细胞非特异性结合很低。以此优化条件进行特异性CTL表型分析,结果显示CD28阳性的A2-NLV四聚体特异性CTL的百分率较非特异性CTL低,表达CD57的百分率较非特异性CTL高,CD25分子只表达于活化的特异性CTL上。结论:通过对染色条件进行优化可明显提高四聚体染色的特异性,降低非特异性结合,优化的四聚体染色法能用于抗原特异性CTL的表型和功能分析。

关键词： HLA-A2四聚体巨细胞病毒 CTL 四聚体染色

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Toll样受体3参与双链RNA对小鼠妊娠结局的影响

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生殖与避孕 2006年第5期26卷 315-319页

作者：林羿张家玮狄静芳杨志陈艺菁曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

目的:探讨Toll样受体3(TLR3)与双链RNA(dsRNA)相互作用对BALB/c和NOD/SCID小鼠妊娠结局的影响。方法:比较经过和未经预先TLR3阻断条件下同基因妊娠的BALB/c和NOD/SCID小鼠在dsRNA刺激后的胚胎吸收率(RR),并采用流式细胞术检测CD45+TLR3... 详细信息

目的:探讨Toll样受体3(TLR3)与双链RNA(dsRNA)相互作用对BALB/c和NOD/SCID小鼠妊娠结局的影响。方法:比较经过和未经预先TLR3阻断条件下同基因妊娠的BALB/c和NOD/SCID小鼠在dsRNA刺激后的胚胎吸收率(RR),并采用流式细胞术检测CD45+TLR3+细胞和CD45+CD80+细胞在CD45+细胞群中、以及CD8α+CD80+细胞在CD8α+细胞群中的百分率。结果:在dsRNA刺激下BALB/c小鼠RR显著升高,而对NOD/SCID小鼠无显著影响。BALB/c小鼠胎盘CD45+细胞群中TLR3表达率升高,并伴有CD45+CD80+细胞和CD8α+CD80+细胞百分率的升高。另可检测到CD45+细胞内IL-2表达率增高,而IL-10表达率下降;而在NOD/SCID模型中未观察到这种趋势。阻断TLR3能消除dsRNA对BALB/c小鼠胚胎排斥的诱导作用,并同时降低CD45+细胞群中CD80的表达率。结论:dsRNA与TLR3的相互作用可能参与CD45+CD80+细胞和CD8α+CD80+细胞的动员,随后母-胎界面IL-2表达增强,而IL-10表达减弱,最终导致胚胎被排斥。dsRNA引起的胚胎排斥过程可能需要具有正常功能的T细胞和NK细胞参与。

关键词：动物模型免疫缺陷妊娠耐受 Toll样受体

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