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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第6期27卷 779-783页

作者：赵令斋曾耀英曾祥凤林长乐黄秀艳王通肇静娴暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究白杨素(CR)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测小鼠活化T细胞CD69的表达情况;用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-... 详细信息

目的:研究白杨素(CR)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测小鼠活化T细胞CD69的表达情况;用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,分析T细胞增殖相关指数;用碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布。结果:加入终浓度为5、25、50μmol/L的CR后,活化T细胞CD69的表达率由ConA对照组的(85.12±1.07)%,分别降低为(78.42±1.82)%、(66.24±1.43)%和(53.09±1.77)%;72 h的T细胞增殖指数由ConA对照组的2.29±0.14分别降至1.91±0.02、1.47±0.03和1.14±0.01;对细胞周期的影响表现为:随着CR浓度升高,处于G0/G1期的细胞增加,S期细胞减少,25μmol/L时,G2/M期细胞也减少。结论:CR能有效抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖,阻滞活化细胞从G1期进入S期,是一种潜在的免疫抑制剂。

关键词：白杨素 CD69 细胞增殖细胞周期流式细胞术

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连翘提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第6期24卷 557-559,563页

作者：尹乐乐曾耀英侯会娜暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广东广州510632

目的:分析连翘(FS)对小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和体外NO释放的影响。方法:无菌收集小鼠腹腔巨噬细胞和羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记大肠杆菌DH5α,短期培养3h后流式细胞术(FCM)分析FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响。... 详细信息

目的:分析连翘(FS)对小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和体外NO释放的影响。方法:无菌收集小鼠腹腔巨噬细胞和羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记大肠杆菌DH5α,短期培养3h后流式细胞术(FCM)分析FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响。用LPS体外刺激活化腹腔巨噬细胞,Griess Reagent试剂盒检测并分析FS对巨噬细胞体外释放NO的影响。结果:FCM分析显示,终浓度为40、80、160mg/L的FS对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬具有明显的促进作用(P<0.05)。不同终质量浓度的FS对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞体外NO的释放均有抑制作用(P<0.05)。结论:FS可以促进小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和抑制NO体外的释放。

关键词：连翘提取物腹腔巨噬细胞吞噬 NO释放

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吲哚胺2,3-双加氧酶下调HLA-I类分子的表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第4期28卷 351-354页

作者：黄官友黄秀艳曾耀英吴晓萍何贤辉唐先高暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)对细胞表面HLA-I类分子的影响。方法:用脂质体法将含IDO基因的重组质粒pEGFP-IDO转染293T细胞,用Western blot检测IDOGFP在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-I类分... 详细信息

目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)对细胞表面HLA-I类分子的影响。方法:用脂质体法将含IDO基因的重组质粒pEGFP-IDO转染293T细胞,用Western blot检测IDOGFP在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-I类分子的表达。结果:Western blot证实转染重组质粒的细胞表达IDO。转染空载体的细胞与转染重组质粒的细胞HLA-A,B,C-PE染色的平均荧光强度分别为299.46±62.65及42.51±8.19,两者相比有显著性差异(P<0.01);转染重组质粒的细胞,未加色氨酸组与色氨酸组HLA-A,B,C-PE染色的平均荧光强度分别为309.17±34.89及692.12±33.42,两者相比亦有显著性差异(P<0.01)。结论:IDO下调细胞表面HLA-I类分子的表达,色氨酸能够逆转IDO所致的HLA-I类分子的下调。

关键词：人类吲哚胺2,3-双加氧酶 HLA-I类分子转染色氨酸

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p38丝裂原活化蛋白激酶在小鼠T细胞增殖中的作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第4期27卷 515-518,525页

作者：于哲邢飞跃王通周建国曾耀英暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:了解p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在ConA刺激下小鼠T细胞增殖中的作用。方法:以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,建立了在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)刺激下评价小鼠T细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析p38丝裂原活... 详细信息

目的:了解p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在ConA刺激下小鼠T细胞增殖中的作用。方法:以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,建立了在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)刺激下评价小鼠T细胞增殖的模型,通过流式细胞术分析p38丝裂原活化蛋白激酶的特异性抑制剂SB203580在不同剂量、不同时间对T细胞增殖的作用,并应用CellQuest和SPSS10.0 forW indows软件分析增殖细胞各代所占比例和增殖指数(PI)。结果:羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色分析显示,随着SB203580浓度从0.5μmol/L逐渐增至15.0μmol/L,T细胞增殖逐渐减弱,以15.0μmol/L SB203580的抑制作用最为明显,呈剂量依赖关系(r=-0.97,P<0.01);SB203580浓度增加至20.0μmol/L时,细胞大量死亡。选用SB203580最佳浓度(15.0μmol/L),随时间从24 h至72 h递增,SB203580对T细胞增殖的抑制作用逐渐增强,以72 h抑制作用最为明显,84~96 h后,抑制作用逐渐减弱。结论:p38 MAPK在ConA刺激的T细胞增殖中起着重要的作用。

关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶 T淋巴细胞增殖小鼠

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桑色素对小鼠T细胞增殖、周期和巨噬细胞分泌NO的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第4期28卷 341-344页

作者：臧宁曾耀英季煜华叶雪仪黄秀艳赵令斋周建国暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究桑色素(morin)对小鼠T细胞增殖、细胞周期和腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(nitrogen mon-oxidum,NO)的影响。方法:以佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)和离子霉素(ionomycin,Ion)联合刺激淋巴结来源的小鼠T淋巴细胞,再以不... 详细信息

目的:研究桑色素(morin)对小鼠T细胞增殖、细胞周期和腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(nitrogen mon-oxidum,NO)的影响。方法:以佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)和离子霉素(ionomycin,Ion)联合刺激淋巴结来源的小鼠T淋巴细胞,再以不同终浓度的morin与上述细胞共培养,利用流式细胞术(FCM),以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(carboxyfluorescein diacetate succinimide ester,CFDA-SE)染色检测T细胞的增殖;以碘化丙锭(pro-pidium iodide,PI)染色分析T细胞的细胞周期;脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞,与不同浓度morin共培养,以Griess反应检测上清液中的NO含量。结果:CFDA-SE染色分析显示,PDB+Ion组的增殖指数(proliferation index,PI)为1.70±0.05,各浓度的morin对PDB+Ion刺激的T细胞增殖,具有明显地抑制作用,以100μmol/L的morin抑制作用最明显,PI为1.03±0.01(P<0.01)。细胞周期的分析结果表明,morin组中处于S期的细胞比率较高,与PDB+Ion组相比有明显差异。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度组的morin均抑制LPS刺激巨噬细胞产生NO,100μmol/L的morin可将LPS刺激巨噬细胞产生NO为(12.89±0.11)μmol/L降低为(7.25±0.05)μmol/L,抑制作用最强。结论:Morin可显著抑制PDB+Ion刺激的T细胞增殖;其对增殖的抑制作用主要表现为S期的细胞的阻滞;对LPS刺激巨噬细胞产生的NO也有显著的抑制作用。

关键词：桑色素 T细胞增殖细胞周期巨噬细胞一氧化氮

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黄芩苷诱导JurkatT细胞凋亡的体外研究

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第6期29卷 573-577页

作者：李林曾耀英宋兵贺芳赖新强黄秀艳暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究黄芩苷(BA)抑制Jurkat T细胞(人T淋巴细胞白血病细胞株)的生长和诱导其凋亡的作用及机制。方法:以噻唑兰(MTT)比色法测定BA对细胞生长的抑制率;胞内[Ca2+]i和线粒体跨膜电势(ΔΨm)分别用F luo-4/AM和D iOC6(3)荧光探针标记,... 详细信息

目的:研究黄芩苷(BA)抑制Jurkat T细胞(人T淋巴细胞白血病细胞株)的生长和诱导其凋亡的作用及机制。方法:以噻唑兰(MTT)比色法测定BA对细胞生长的抑制率;胞内[Ca2+]i和线粒体跨膜电势(ΔΨm)分别用F luo-4/AM和D iOC6(3)荧光探针标记,流式细胞仪检测;PI染色流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率;凋亡细胞形态以Hoechst33342/PI染色后荧光显微镜观察。结果:BA明显抑制Jurkat细胞增殖(P<0.01),并呈时间、浓度依赖性;BA可浓度依赖的诱导Jurkat细胞[Ca2+]i浓度上升、线粒体膜电势ΔΨm降低,将细胞周期阻滞在S期,凋亡率增加,荧光显微镜下可见经BA(100 mg/L)作用的细胞呈现典型的凋亡核固缩表现,胞核呈致密浓染的颗粒状荧光。结论:BA体外显著抑制Jurkat T细胞增殖及诱导其凋亡,其机制可能与胞内[Ca2+]i及线粒体依赖的凋亡通路有关。

关键词：黄芩苷胞内钙离子线粒体细胞周期凋亡

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米诺环素对PDB刺激的小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第3期29卷 320-324页

作者：姚满林曾耀英黄秀艳宋兵李林杨志滕菲暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

为了分析米诺环素(MNC)对小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响,探讨其免疫抑制作用机制.我们通过分离小鼠淋巴结细胞,以佛波醇酯(PDB)刺激,用不同终浓度的MNC与淋巴细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测淋巴细胞早期和中期活化抗原... 详细信息

为了分析米诺环素(MNC)对小鼠淋巴细胞体外活化和增殖的影响,探讨其免疫抑制作用机制.我们通过分离小鼠淋巴结细胞,以佛波醇酯(PDB)刺激,用不同终浓度的MNC与淋巴细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测淋巴细胞早期和中期活化抗原CD69与CD25的表达;以CFSE染色,加入多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析MNC对淋巴细胞增殖的影响;结果,荧光抗体染色显示MNC能显著抑制PDB诱导的T细胞CD69和CD25的表达;CFSE染色结果显示,MNC对佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)诱导48 h的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性.从而我们认为MNC对小鼠淋巴细胞的体外活化和增殖具有明显的抑制作用.具有独立于其抗菌活性的抗炎作用.

关键词：米诺环素细胞增殖流式细胞术 T细胞活化

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树突状细胞亚群比例对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病的影响

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中国现代医学杂志 2005年第2期15卷 218-220页

作者：曾山林羿暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的探讨树突状细胞(Dendriticcell,DC)亚群比例对小鼠异基因骨髓移植(all0-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响。方法用主要组织相容性抗原(MHC)完全不合的近交系小鼠建立小鼠all0-BMT的模型,随机分为三组,分别在移植前、后和不对... 详细信息

目的探讨树突状细胞(Dendriticcell,DC)亚群比例对小鼠异基因骨髓移植(all0-BMT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响。方法用主要组织相容性抗原(MHC)完全不合的近交系小鼠建立小鼠all0-BMT的模型,随机分为三组,分别在移植前、后和不对供鼠使用重组小鼠粒系集落刺激因子rmG-CSF,移植后均采用环孢素A(CsA)+甲氨蝶呤(MTX)方案预防aGVHD,观察三组小鼠移植前后外周血中DC亚群的比例及变化以及aGVHD的情况。结果移植前后使用rhG-CSF均可以使DC亚群发生改变,使DC2的比例增加,移植前使用更明显;处理组移植小鼠aGVHD严重程度明显比不使用rmG-CSF组弱,移植前使用aGVHD表现最轻。结论移植前后使用rmG-CSF可以使小鼠DC亚群比例发生改变,使DC2比例增高,并可使减轻移植小鼠aGVHD的症状。

关键词：树突状细胞移植物抗宿主病骨髓移植

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灭活HIV-1颗粒对人CD4^+T细胞活化标记分子CD25、CD71和HLA-DR表达的作用

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免疫学杂志 2009年第4期25卷 397-401,417页

作者：黄秀艳曾耀英王辉暨南大学组织移植与免疫中心深圳市东湖医院肝病研究所

目的通过深入研究AT-2灭活HIV-1颗粒对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB-MCs)来源的CD4+T细胞中期活化标记分子(CD25)和晚期活化标记分子(CD71和HLA-DR)的作用,进一步探讨HIV病中普遍性的免疫过度活化的病理... 详细信息

目的通过深入研究AT-2灭活HIV-1颗粒对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB-MCs)来源的CD4+T细胞中期活化标记分子(CD25)和晚期活化标记分子(CD71和HLA-DR)的作用,进一步探讨HIV病中普遍性的免疫过度活化的病理机制。方法AT-2灭活HIV-1IIIB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量,调整p24抗原含量为50 ng/mL;然后按照p24抗原量为0.1 ng/mL(记作HIV-1 1/500组)、1 ng/mL(记作HIV-1 1/50组)和10 ng/mL(记作HIV-11/5组)的浓度加入到PBMCs中,以植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)组为阳性对照,24 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CD4+T细胞CD25的表达百分率;48 h后,运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测PBMCs中CD4+T细胞CD71和HLA-DR的表达百分率。结果24 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD25的表达百分率为(9.46±2.12)%,PHA组为(79.45±3.72)%,HIV-1 1/500组为(14.89±2.53)%,HIV-1 1/50组为(19.04±2.41)%,HIV-11/5组为(23.50±2.21)%;48 h后,空白对照组中,CD4+T细胞CD71的表达百分率为(3.39±1.40)%,PHA组为(75.52±5.14)%,HIV-1 1/500组为(11.70±2.34)%,HIV-1 1/50组为(18.45±3.19)%,HIV-1 1/5组为(22.59±2.96)%;CD4+T细胞HLA-DR的表达百分率为(8.11±2.13)%,PHA组为(66.48±6.81)%,HIV-1 1/500组为(14.52±1.68)%,HIV-1 1/50组为(19.94±2.38)%,HIV-1 1/5组为(23.74±2.30)%。结论AT-2灭活的HIV-1IIIB颗粒能够明显的诱导PBMCs中CD4+T细胞活化,并可能引起CD4+T细胞增殖,从而为HIV-1感染提供更多的"燃料细胞"。

关键词： HIV-1颗粒 CD25 CD71 HLA-DR 同种异基因识别

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芹菜素对RAW264.7细胞增殖、分泌NO和吞噬功能的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第1期29卷 95-98页

作者：梁兆端曾耀英黄秀艳杨志暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

为研究芹菜素（Apigenin，AP）对RAW264．7细胞增殖、分泌一氧化氮（nitrogen monoxidum，NO）和吞噬功能的影响，首先培养RAW264．7细胞至细胞对数生长期，然后MTT法检测不同浓度（25、50、100、150和200μmol／L）的AP对脂多糖（Lipop... 详细信息

为研究芹菜素（Apigenin，AP）对RAW264．7细胞增殖、分泌一氧化氮（nitrogen monoxidum，NO）和吞噬功能的影响，首先培养RAW264．7细胞至细胞对数生长期，然后MTT法检测不同浓度（25、50、100、150和200μmol／L）的AP对脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激的RAW264．7细胞增殖的影响，再用Griess试剂盒检测上述浓度AP对LPS刺激的RAW264．7细胞分秘NO的影响，并用荧光微球检测其吞噬功能的变化．结果显示25～200μmol／LAP显著抑制LPS刺激的RAW264．7细胞的增殖，并明显抑制LPS刺激的RAW264．7细胞分泌NO，同时明显抑制LPS刺激的RAW264．7细胞的吞噬功能（P〈0．01），且呈剂量依赖关系．故在一定浓度范围内，AP显著抑制LPS刺激的RAW264．7细胞增殖、分泌NO和吞噬功能，故有望通过进一步研究将其开发成为免疫调节药物．

关键词：芹菜素 RAW264.7细胞增殖一氧化氮吞噬

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