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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第10期27卷 888-892页

作者：于哲邢飞跃王通陈笛陈玲暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的研究茴香霉素在小鼠淋巴细胞增殖和活化中的作用。方法以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰业胺酯染色,建立了在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(Con A)刺激下评价小鼠淋巴细胞增殖的模型,通过流式细胞术及MTT法分析茴香霉素在不同剂量下对... 详细信息

目的研究茴香霉素在小鼠淋巴细胞增殖和活化中的作用。方法以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰业胺酯染色,建立了在多克隆刺激剂刀豆蛋白A(Con A)刺激下评价小鼠淋巴细胞增殖的模型,通过流式细胞术及MTT法分析茴香霉素在不同剂量下对淋巴细胞增殖的作用;采用碘化丙锭染色分析茴香霉素对Con A或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激的小鼠淋巴细胞周期变化的作用;利用荧光标记的单克隆抗体双染技术结合流式细胞仪检测茴香霉素对小鼠CD3+淋巴细胞早期及中期活化标志分子CD69和CD25表达的影响。结果随着茴香霉素浓度从1.0 ng/ml逐渐增至25.0 ng/ml,Con A对淋巴细胞的促增殖作用逐渐减弱,以10.0 ng/ml和25.0 ng/ml茴香霉素的抑制作用最为明显,呈剂量依赖关系(r=-0.96,P<0.01)。进一步发现,1.0～25.0 ng/ml茴香霉素能够使Con A或PDB加Ion诱导的淋巴细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期,且阻止作用随上述浓度的增加而增强,呈明显剂量依赖关系(r=-0.97,P<0.01和r=-0.98,P<0.01)。据此选用最佳剂量10.0 ng/ml,茴香霉素能够明显抑制淋巴细胞表面分子CD69和CD25的表达(P均<0.01)。结论茴香霉素能明显抑制小鼠淋巴细胞的增殖和活化。

关键词：茴香霉素淋巴细胞增殖细胞周期活化

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淋巴细胞免疫治疗对小鼠自然流产模型母胎界面CD80^+表达及妊娠结局的影响

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生殖与避孕 2002年第6期22卷 332-337,T002页

作者：林羿曾耀英何贤辉曾山詹美意关洁宾狄静芳肇静娴全世明暨南大学组织移植与免疫中心

目的:评价CBA/J×DBA/2小鼠配对组合作为反复自然流产模型的生殖力特点,及其与母胎交界CD80表达间的关系,并研究淋巴细胞免疫治疗(lymphocyte immunotherapy,LIT)对CD80表达水平的影响。方法:对CBA/J×DBA/2小鼠的生殖力特点进... 详细信息

目的:评价CBA/J×DBA/2小鼠配对组合作为反复自然流产模型的生殖力特点,及其与母胎交界CD80表达间的关系,并研究淋巴细胞免疫治疗(lymphocyte immunotherapy,LIT)对CD80表达水平的影响。方法:对CBA/J×DBA/2小鼠的生殖力特点进行为期120d的观察,并与生殖力正常的4种对照组进行比较。另计算15对CBA/J×DBA/2小鼠孕13d的胚胎吸收率,并用CD80-FITC和CD45-PE双色流式细胞术检测CD80细胞在母胎交界面的构成比。为了明确CD80^+细胞的身份,检测了CD3、DX5(NK细胞)和MHC-Ⅱ在CD80细胞群中的表达水平。此外,检测LIT组与未治疗组CBA/J×DBA/2小鼠胚胎吸收率和CD80细胞的阳性率。结果:CBA/J×DBA/2小鼠的流产特点是为孕10d左右的反复流产。CBA/J×DBA/2小鼠孕13d的胚胎吸收率显著高于BALB/c×DBA/2小鼠(30.8％±16.6％vs.7.7％±6.7％,P

关键词：小鼠反复自然流产淋巴细胞 CD80 母胎交界面动物模型

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人参皂苷Rb_1对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及凋亡的影响

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中草药 2011年第4期42卷 743-748页

作者：吕梦捷曾耀英宋兵暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的研究人参皂苷Rb1对小鼠T淋巴细胞体外活化及增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法分离制备小鼠淋巴结细胞悬液;以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A(ConA)的刺激下,人参皂苷Rb1对早期活化标志CD3/CD6... 详细信息

目的研究人参皂苷Rb1对小鼠T淋巴细胞体外活化及增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法分离制备小鼠淋巴结细胞悬液;以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A(ConA)的刺激下,人参皂苷Rb1对早期活化标志CD3/CD69和调节T淋巴细胞标志CD4/CD25表达的影响;用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色结合流式细胞术和MTT法检测在ConA的刺激下,人参皂苷Rb1对T淋巴细胞增殖的影响;DIOC/PI双染技术检测在H2O2作用下,人参皂苷Rb1对淋巴细胞凋亡进程的影响。结果终浓度为5、10、20μmol/L的人参皂苷Rb1对ConA刺激的调节T淋巴细胞CD4+/CD25+的表达具有促进作用,而CD3+/CD69+的表达明显下调(P<0.01);对ConA刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;人参皂苷Rb1显著抑制H2O2诱导的淋巴细胞的凋亡进程(P<0.05)。结论人参皂苷Rb1对小鼠淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。

关键词：人参皂苷Rb1 T淋巴细胞活化增殖凋亡

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银杏内酯B对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖与凋亡的影响

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免疫学杂志 2011年第12期27卷 1019-1024页

作者：王晓东曾耀英宋兵暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632

目的银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子(PAF)受体(PAFR)拮抗剂,本文研究GB对小鼠T淋巴细胞活化、增殖及凋亡3大体外行为的影响,初步探讨其潜在的免疫调节作用与机制,从而为临床应用提供可靠的实验依据。方法分离小鼠淋... 详细信息

目的银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子(PAF)受体(PAFR)拮抗剂,本文研究GB对小鼠T淋巴细胞活化、增殖及凋亡3大体外行为的影响,初步探讨其潜在的免疫调节作用与机制,从而为临床应用提供可靠的实验依据。方法分离小鼠淋巴细胞,培养前以不同浓度的GB预孵;以刀豆蛋白A(Con A)诱导细胞的活化与增殖,以荧光抗体双色标记(anti-CD3 mAb-PE/anti-CD69 mAb-FITC、anti-CD3 mAb-PE/anti-CD25 mAb-FITC)结合流式细胞术分别检测T淋巴细胞早、中期活化标志--表面抗原CD69与CD25的表达,以活体荧光染料CFDA-SE标记结合流式细胞术检测细胞增殖并用MTT法佐证;以地塞米松(Dex)诱导细胞的凋亡,以荧光染料双色标记[DiOC6(3)/PI]结合流式细胞术区别凋亡、死亡与活细胞群。结果 Con A刺激后6 h和24 h,T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分别大量表达,Con A刺激后48 h活化的T细胞增殖至第4代,而经终浓度为5、10、20μmol/L GB在Con A刺激前对细胞进行4 h预孵处理可以显著下调T细胞表面抗原CD69、CD25的表达并能有效抑制细胞增殖。Dex诱导后12 h细胞凋亡和死亡群显著增大,而经同样的GB预孵处理可以在一定程度上抑制细胞的凋亡进程,对细胞凋亡显示出一定的保护作用。结论 GB能有效抑制小鼠T淋巴细胞的活化与增殖,并且对细胞凋亡起到一定的保护作用,凭借GB对T细胞此3大行为出色的调节作用,理应将其作为天然的免疫抑制剂候选者进行更深入的研究。

关键词：银杏内酯B T淋巴细胞活化增殖凋亡

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激光对细胞内反应氧、钙离子浓度及细胞膜完整性的影响

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解剖学报 2007年第3期38卷 330-333页

作者：季煜华曾耀英钱中清暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的探讨在激光扫描共焦显微镜(LSCM)观测活细胞的过程中,激光对细胞内反应氧(ROS)、细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)和细胞膜完整性的影响。方法用H2DCFDA、Fluo-4AM和Calcein-AM/PI分别检测488nm激光对脐静脉内皮细胞株(ECV-304)细胞内ROS... 详细信息

目的探讨在激光扫描共焦显微镜(LSCM)观测活细胞的过程中,激光对细胞内反应氧(ROS)、细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)和细胞膜完整性的影响。方法用H2DCFDA、Fluo-4AM和Calcein-AM/PI分别检测488nm激光对脐静脉内皮细胞株(ECV-304)细胞内ROS、[Ca2+]i和细胞膜完整性的影响,Ultra view LCI(live cell image)共聚焦成像系统采集并分析结果。结果激光照射后细胞内DCF的荧光强度迅速上升,约80s达到峰值,随后下降并逐渐回到基础水平;Fluo-4的荧光强度在70min内持续平缓地上升;Calcein的荧光强度明显下降,少量细胞PI阳性染色。结论488nm激光照射可引起细胞内ROS和[Ca2+]i的增加,但对细胞膜的完整性没有显著影响。

关键词：激光反应氧细胞内钙离子浓度细胞活性激光扫描共焦显微镜脐静脉内皮细胞株

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Forskolin对佛波醇酯类刺激的小鼠体外T淋巴细胞行为的影响

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免疫学杂志 2009年第2期25卷 177-182,186页

作者：宋兵曾耀英黄秀艳李林杨志滕菲姚满林暨南大学组织移植与免疫中心

目的分析Forskolin对佛波醇酯多克隆刺激剂(phorbol12,13-dibutyrate,PDB)联合离子霉素(ionomycin,Ion)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞体外增殖和周期的影响,在此基础上进一步研究Forskolin对单纯PDB刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69... 详细信息

目的分析Forskolin对佛波醇酯多克隆刺激剂(phorbol12,13-dibutyrate,PDB)联合离子霉素(ionomycin,Ion)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞体外增殖和周期的影响,在此基础上进一步研究Forskolin对单纯PDB刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69分子和中期活化标志CD25分子的影响,从而阐明其作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育48h后,运用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色技术和碘化丙锭(PI)染色技术结合流式细胞术、CELLQuest和ModFitLT软件,分别检测Forskolin对PDB+Ion刺激下小鼠CD3+T淋巴细胞增殖和周期的影响;与不同浓度的Forskolin孵育2h、10h,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术检测Forskolin对PDB诱导下的小鼠CD3+T淋巴细胞CD69分子和CD25分子表达的影响。结果Forskolin(10-7、10-6、10-5mol.L-1)均能明显抑制PDB+Ion刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞的增殖并将细胞阻滞在G0/G1期;同时也能明显抑制单纯PDB刺激下的CD3+T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系。结论提示Forskolin在CD3+T细胞活化过程中信号转导的某个环节上有抑制作用,从而通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。

关键词： Forskolin CD69 CD25 增殖周期流式细胞术

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黄芩苷对不同刺激剂诱导的小鼠T淋巴细胞体外活化的影响

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中草药 2008年第8期39卷 1188-1191页

作者：李林曾耀英黄秀艳宋兵杨志姚满林滕菲暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的分析黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外活化的影响,探讨其对免疫系统的作用,阐明其免疫抑制作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以不同终质量浓度的黄芩苷预孵育淋巴细胞4 h,再以刀豆蛋白A(Con A)或佛波醇酯类多克隆刺激剂... 详细信息

目的分析黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外活化的影响,探讨其对免疫系统的作用,阐明其免疫抑制作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以不同终质量浓度的黄芩苷预孵育淋巴细胞4 h,再以刀豆蛋白A(Con A)或佛波醇酯类多克隆刺激剂(PDB)诱导小鼠淋巴细胞活化,利用流式细胞术分别结合双色免疫荧光单克隆抗体染色技术检测CD3+T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分子的表达。结果黄芩苷(10、20、30 mg/L)能明显抑制Con A或PDB诱导T细胞活化分子CD69和CD25的表达,且呈浓度依赖性。结论黄芩苷能够明显抑制多克隆刺激剂Con A或PDB诱导的T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系。提示黄芩苷在T细胞活化过程的信号转导中有抑制作用,从而可以通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。

关键词：黄芩苷 T淋巴细胞 CD69 CD25

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Forskolin对小鼠体外T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响

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中药材 2008年第7期31卷 1008-1012页

作者：宋兵曾耀英黄秀艳李林滕菲杨志姚满林暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究Forskolin对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色... 详细信息

目的:研究Forskolin对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术来检测CD3+T细胞早期活化标志CD69的表达水平;用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色技术结合流式细胞术和CELLQuest、Mod FitLT软件,分析T细胞增殖情况;用碘化丙锭(PI)染色技术分析细胞周期分布。结果:加入终浓度为10-7、10-6、10-5M的Forskolin,孵育8 h后,CD3+T细胞CD69的表达水平和平均荧光强度(MFI)与Con A组相比都有显著的降低,且呈梯度依赖性;对Con A刺激的小鼠CD3+T细胞的增殖指数(PI)也有梯度性抑制;对细胞周期的影响表现为:随着Forskolin浓度升高,处于G0/G1期的细胞增加,S期细胞减少,G2/M期的细胞也有少量减少。结论:Forskolin能有效抑制小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖,阻滞细胞从G0/G1期进入S、G2/M期。由此推断Forskolin在某种程度上是一种潜在的免疫抑制剂。

关键词： Forskolin 活化增殖周期流式细胞术

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乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第8期25卷 719-721页

作者：曾山林羿狄镜芳冯铮暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:观察乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注后导致的细胞凋亡的影响,探讨其机制。方法:链尿佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,随机分为假手术组、缺血/再灌注组和缺血/再灌注+乙酰半胱氨酸治疗组。组织匀浆检测心肌组织还原型谷胱甘肽(... 详细信息

目的:观察乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注后导致的细胞凋亡的影响,探讨其机制。方法:链尿佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,随机分为假手术组、缺血/再灌注组和缺血/再灌注+乙酰半胱氨酸治疗组。组织匀浆检测心肌组织还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)和琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化两种方法检测心肌细胞凋亡并计算凋亡指数。结果:缺血/再灌注后,糖尿病和非糖尿病组均出现明显的心肌细胞凋亡,同时伴有GSH含量降低,GSSG含量和Caspase-3的活性升高,上述变化糖尿病组比非糖尿病组更明显(P<0.05);乙酰半胱氨酸干预的糖尿病和非糖尿病大鼠的心肌细胞凋亡均减轻,同时伴有GSH含量上升,GSSG含量和Caspase-3的活性下降,上述变化非糖尿病组比糖尿病组更明显(P<0.05)。结论:乙酰半胱氨酸干预可以通过提高心肌GSH含量、降低Caspase-3的活性减轻糖尿病和非糖尿病大鼠缺血/再灌注引起的心肌细胞凋亡,对缺血/再灌注心肌有保护作用,但糖尿病组的疗效低于非糖尿病组。

关键词：心肌再灌注损伤乙酰半胱氨酸半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3

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淫羊藿提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

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中草药 2008年第9期39卷 1355-1359页

作者：滕菲曾耀英黄秀艳杨志姚满林宋兵李林暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的研究淫羊藿水溶性提取物对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法无菌分离小鼠各部位淋巴结,制备单细胞悬液,加入不同终质量浓度(5、25、50mg/L)的淫羊藿提取物,以MTT法检测药物对T细胞活性的影响;利... 详细信息

目的研究淫羊藿水溶性提取物对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法无菌分离小鼠各部位淋巴结,制备单细胞悬液,加入不同终质量浓度(5、25、50mg/L)的淫羊藿提取物,以MTT法检测药物对T细胞活性的影响;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料CFDA-SE染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果MTT法检测淫羊藿提取物在50mg/L时细胞存活率达52.36%。ConA作用6h后,对照组CD69+表达率为(4.61±0.85)%,ConA组CD69+T细胞的比率上升至(38.30±2.54)%,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L时均抑制ConA诱导的CD3+T淋巴细胞CD69的表达(P<0.01),其表达率分别下调为(36.16±2.14)%,(30.5±1.72)%,(15.99±0.87)%。培养48、72后,对照组增殖指数(PI)分别为1.01±0.01和1.05±0.01,ConA组PI分别达到1.42±0.01、2.32±0.01,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L均抑制T淋巴细胞增殖(P<0.01),48h时PI分别为1.28±0.01、1.26±0.01、1.21±0.01;72h时PI分别为2.30±0.03、2.13±0.02、2.10±0.01。结论淫羊藿提取物能明显抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性。

关键词：淫羊藿提取物 T淋巴细胞活化增殖

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