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现代免疫学 2009年第1期29卷 19-24页

作者：宋兵曾耀英黄秀艳李林滕菲杨志姚满林暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

通过研究Forskolin对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠体外CD3+T淋巴细胞活化、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α及增殖的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育... 详细信息

通过研究Forskolin对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠体外CD3+T淋巴细胞活化、细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α及增殖的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育,用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术来检测CD3+T细胞中期、晚期活化标志CD25、CD71的表达水平;LuminexTM100检测晚期活化淋巴细胞培养上清中5种细胞因子的变化;羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色技术结合流式细胞术和CELLQuest、ModFitLT软件,分析CD3+T细胞增殖情况。结果显示,终浓度为10-7、10-6、10-5mol/L的Forskolin均能降低CD3+T细胞中CD25、CD71的表达水平和平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI),还能抑制IL-10、IL-2、TNF-α的产生和淋巴细胞的增殖,但能促进IFN-γ的产生,对IL-4的影响却不大。表明Forskolin在一定浓度范围内通过改变T淋巴细胞细胞因子的表达水平,进而抑制T淋巴细胞的活化和增殖,发挥免疫抑制作用。

关键词： Forskolin 活化细胞因子增殖

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脱水淫羊藿素对腹膜炎小鼠的保护作用

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第10期29卷 1036-1039页

作者：赖新强黄秀艳曾耀英暨南大学分析测试中心广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心

目的研究脱水淫羊藿素(AHI)对酵母多糖诱导的小鼠腹膜炎的影响。方法采用酵母多糖诱导腹膜炎模型,观察各组小鼠的生存情况,收集腹腔液,分别进行白细胞计数,Griess试剂联合酶标仪检测一氧化氮(NO)、流式细胞术检测小鼠腹腔渗出液中IL-6、... 详细信息

目的研究脱水淫羊藿素(AHI)对酵母多糖诱导的小鼠腹膜炎的影响。方法采用酵母多糖诱导腹膜炎模型,观察各组小鼠的生存情况,收集腹腔液,分别进行白细胞计数,Griess试剂联合酶标仪检测一氧化氮(NO)、流式细胞术检测小鼠腹腔渗出液中IL-6、IL-10、TNF-α、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平;采用Fluo4-AM标记,激光扫描共聚焦显微镜实时检测AHI对骨髓巨噬细胞钙离子内流的影响;Western blot法检测AHI对一氧化氮合酶(iNOS)的影响。结果 4 mg/kg体质量的AHI能提高腹膜炎小鼠的存活,减少腹腔白细胞的数量,降低NO、IL-10、TNF-α、MCP-1、IL-6的分泌;5μmol/L的AHI能抑制小鼠巨噬细胞的钙内流和iNOS的表达。结论 AHI对酵母多糖诱导的腹膜炎小鼠具有保护作用,可能与抑制巨噬细胞的钙离子内流、iNOS表达有关。

关键词：脱水淫羊藿素腹膜炎酵母多糖巨噬细胞

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人类免疫缺陷病毒-1 nef诱导凋亡及下调人类白细胞抗原-I类分子

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中山大学学报（医学科学版） 2007年第3期28卷 250-253页

作者：黄官友黄秀艳曾耀英曾祥凤吴晓萍暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

【目的】研究人类免疫缺陷病毒(HIV)-1 nef调节细胞表面的人类白细胞抗原(HLA)-I类分子及诱导细胞凋亡情况。【方法】将293T细胞分为两组,用脂质体法将含HIV-1 nef基因的质粒及空载体分别转染细胞,Western blot检测HIV-1 nef在转染细胞... 详细信息

【目的】研究人类免疫缺陷病毒(HIV)-1 nef调节细胞表面的人类白细胞抗原(HLA)-I类分子及诱导细胞凋亡情况。【方法】将293T细胞分为两组,用脂质体法将含HIV-1 nef基因的质粒及空载体分别转染细胞,Western blot检测HIV-1 nef在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-I类分子表达及细胞凋亡情况。【结果】HIV-1 nef在转染细胞中有表达。转染HIV-1 nef的细胞与转染空载体的细胞经抗HLA-A,B,C-FITC染色后,平均荧光强度分别为205±22及269±15,两者相比有显著性差异(P<0.01);经Annexin V-APC/PI染色后,阳性细胞百分率分别为(60.82±8.32)%及(8.12±5.43)%,两者相比亦有显著性差异(P<0.01)。【结论】HIV-1 nef下调细胞表面的HLA-I类分子及诱导细胞凋亡。

关键词：人类免疫缺陷病毒-1 nef 人类白细胞抗原-Ⅰ类分子凋亡转染

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α-SMA的表达与软骨细胞的去分化

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第四军医大学学报 2007年第7期28卷 585-588页

作者：季煜华曾耀英肇静娴暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632

目的:探讨细胞骨架蛋白α-SMA的表达与软骨细胞去分化之间的联系.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(RGCs),对原代至第5代RGCs进行细胞生长动力学分析,阿尔新兰染色、免疫细胞化学法和蛋白质印迹分别检测蛋白多糖,α-SMA和Ⅱ型胶原... 详细信息

目的:探讨细胞骨架蛋白α-SMA的表达与软骨细胞去分化之间的联系.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(RGCs),对原代至第5代RGCs进行细胞生长动力学分析,阿尔新兰染色、免疫细胞化学法和蛋白质印迹分别检测蛋白多糖,α-SMA和Ⅱ型胶原的表达.结果:随着传代次数的增加,前3代RGCs的每日倍增指数逐渐增加,随后不断下降.原代RGCs的阿尔新兰和Ⅱ型胶原染色均呈强阳性,仅个别细胞α-SMA弱阳性染色.随着传代次数的增加,阿尔新兰和Ⅱ型胶原阳性染色的细胞比例迅速下降,第3代以后的RGCs阿尔新兰染色均为阴性,第5代RGCs也仅有圆形细胞仍保持了Ⅱ型胶原阳性染色,而α-SMA阳性染色细胞的比例则不断增加.蛋白质印迹所揭示的Ⅱ型胶原和α-SMA蛋白表达的变化趋势与免疫细胞化学染色的结果一致.结论:α-SMA从无到有并随着RGCs去分化程度的增强而增加的表达模式,提示它是引起软骨细胞“去分化”的重要原因.

关键词：生长板软骨细胞去分化 α-平滑肌肌动蛋白

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基于聚苯胺纳米纤维复合膜界面构建电化学细胞传感器及其对癌细胞的识别检测

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分析化学 2012年第2期40卷 184-190页

作者：王辉汪甜叶燕霞张亚兴杨培慧蔡怀鸿蔡继业暨南大学化学系暨南大学药学院暨南大学组织移植与免疫实验中心光电信息与传感技术广东普通高校重点实验室(暨南大学)

合成了聚苯胺纳米纤维,直径在50～70 nm之间;基于静电作用构建聚苯胺纳米纤维-纳米金复合膜界面,并在此界面上层层组装修饰叶酸分子,构建叶酸功能化传感界面,基于叶酸分子与癌细胞表面过量表达的叶酸受体之间的特异性识别作用,将此传感... 详细信息

合成了聚苯胺纳米纤维,直径在50～70 nm之间;基于静电作用构建聚苯胺纳米纤维-纳米金复合膜界面,并在此界面上层层组装修饰叶酸分子,构建叶酸功能化传感界面,基于叶酸分子与癌细胞表面过量表达的叶酸受体之间的特异性识别作用,将此传感界面应用于对癌细胞的识别和捕获。结果表明:叶酸功能化传感界面能够特异性识别和捕获叶酸受体过量表达的癌细胞。采用电化学阻抗技术,以HeLa细胞为模型,应用于对癌细胞的识别和检测,细胞在1.0×104～6.4×106cells/mL浓度范围内与阻抗变化值ΔRct呈良好的线性关系;检出限为2000 cells/mL。本方法简单、快速灵敏、重现性和稳定性良好;制备的传感器可以再生使用。

关键词：细胞传感器聚苯胺纳米纤维纳米金癌细胞

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HDAC抑制剂丙戊酸对小鼠T淋巴细胞表达细胞因子的影响

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免疫学杂志 2011年第7期27卷 589-593,598页

作者：陈清欧阳东云张延亭何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

目的分析组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸(Valproic acid,VPA)对小鼠T细胞亚群IL-2、IFN-γ和IL-6表达的影响,探讨其抗炎免疫调节作用的机制。方法经VPA处理小鼠淋巴细胞,并在佛波醇酯(PDB)和离子霉素刺激后,以流式细胞术分析CD3+、... 详细信息

目的分析组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸(Valproic acid,VPA)对小鼠T细胞亚群IL-2、IFN-γ和IL-6表达的影响,探讨其抗炎免疫调节作用的机制。方法经VPA处理小鼠淋巴细胞,并在佛波醇酯(PDB)和离子霉素刺激后,以流式细胞术分析CD3+、CD4+和CD8+T细胞表达IL-2、IFN-γ和IL-6的情况。结果淋巴细胞受刺激后,IL-6的表达水平仅稍有提高,而IL-2在CD4+和CD8+T细胞表达率分别为35.49%和5.50%,IFN-γ表达率分别为3.47%和38.60%。经VPA处理后,CD3+T细胞IL-6+、IFN-γ+和IL-6+IFN-γ+的表达均受剂量依赖性抑制(P<0.01)。同样,VPA能够剂量依赖性地降低小鼠CD4+和CD8+T细胞亚群内表达IL-2+、IFN-γ+的细胞比例(P<0.01),对于IL-2+IFN-γ+双阳性细胞的比例也具有明显抑制作用(P<0.01);此外,VPA对CD8+T细胞表达IFN-γ的抑制程度高于CD4+T细胞。结论 HDAC抑制剂VPA通过抑制IL-2和IFN-γ而发挥其抗炎和免疫调节效应。

关键词：淋巴细胞丙戊酸细胞因子免疫调节

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黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第1期25卷 75-78页

作者：李林曾耀英黄秀艳宋兵杨志滕菲姚满林暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:分析黄芩苷(BA)对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色,不同终浓度的BA预孵育4h,加入刀豆蛋白(ConA)或佛波... 详细信息

目的:分析黄芩苷(BA)对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(CFDA-SE)染色,不同终浓度的BA预孵育4h,加入刀豆蛋白(ConA)或佛波醇酯类多克隆刺激剂PDB和离子霉素Ion进行刺激,以流式细胞术(FCM)结合荧光抗体染色技术检测黄芩苷对CD3+T细胞增殖率的影响;以碘化丙锭(PI)染色结合FCM分析其细胞周期分布。结果:BA(10、15、20、25mg/L)对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+T细胞增殖均有明显的抑制作用(P<0.05),且呈浓度依赖性。对细胞周期分析表明,BA能使ConA或PDB和Ion刺激的小鼠淋巴细胞停滞于G0/G1期、S期,阻止其进入G2/M期,阻止作用随浓度的增加而增强。结论:BA对ConA或PDB和Ion诱导的小鼠CD3+T细胞增殖有明显抑制作用,能够将淋巴细胞阻滞在G0/G1期和S期,表现出明显的周期特异性。本研究提示黄芩苷有发展成免疫抑制剂的潜力。

关键词：黄芩苷 T细胞细胞增殖细胞周期

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米诺环素对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

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现代免疫学 2008年第2期28卷 136-141页

作者：姚满林曾耀英黄秀艳周建国梁兆端杨志暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

研究米诺环素(MNC)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。以ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度的MNC与T细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测T细胞早期活化抗原C... 详细信息

研究米诺环素(MNC)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化和增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。以ConA刺激小鼠淋巴结来源的淋巴细胞,以不同终浓度的MNC与T细胞共培养,荧光抗体染色结合流式细胞术,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;用羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰(CFDA-SE)染色结合流式细胞术,并用ModFit软件分析T细胞增殖相关指数。结果:终浓度为10、25和50μmol/L的MNC显著抑制ConA诱导的T细胞CD69的表达,由ConA组的71.20%±1.08%,分别降低为64.43%±1.39%、53.34%±1.26%和33.65%±1.91%;CFDA-SE染色结果显示,培养48 h和72 h的ConA组T细胞的增殖指数(PI)分别为1.57±0.03和2.06±0.02,各浓度的MNC对ConA刺激的T细胞增殖具有明显的抑制作用,以50μmol/L的MNC抑制作用最明显,48 h和72 h的PI分别为1.01±0.02和1.03±0.01,与相应时间的对照组比较,均有统计学意义(P<0.01)。MNC能有效地抑制小鼠T细胞的体外活化和增殖。具有独立于其抗菌活性的抗炎作用。

关键词：米诺环素 CD69 细胞增殖流式细胞术 T细胞活化

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p38 MAPK的活化促进小鼠T细胞增殖

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现代免疫学 2007年第3期27卷 182-187页

作者：于哲邢飞跃王通暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在小鼠T细胞增殖中的作用。以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,通过流式细胞术分析p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580和p38 MAPK的激活剂茴香霉素在不同剂量下对ConA刺激的T细胞增殖作用,并... 详细信息

研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在小鼠T细胞增殖中的作用。以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,通过流式细胞术分析p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580和p38 MAPK的激活剂茴香霉素在不同剂量下对ConA刺激的T细胞增殖作用,并测定其增殖的相关指数;采用碘化丙锭染色分析SB203580和茴香霉素对ConA或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激的小鼠T细胞周期变化的影响。结果显示:0.5μmol/L～15.0μmol/L SB203580对ConA诱导的T细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖关系(r=-0.97,P<0.01);该浓度范围的SB203580能够呈明显剂量依赖性地阻止ConA或PDB加Ion诱导的T细胞进入S期或G2/M期(r_s=-0.98,P<0.01;r_(G2)/M=-0.97,P<0.01)。茴香霉素浓度在0.01～0.5ng/ml时能够增强ConA对T细胞的促增殖作用,并能够促进ConA诱导的T细胞进入G2/M期,促进PDB加Ion诱导的T细胞进入S期。以上提示p38信号通路的活化在促进小鼠T细胞增殖中可能起着重要作用。

关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶 T淋巴细胞增殖周期

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腺病毒介导重组hKGF基因转染HaCat细胞及其表达

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中国生物工程杂志 2007年第3期27卷 1-5页

作者：吴晓萍曾耀英贺芳暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

将PCR扩增得到的人角质细胞生长因子(hKGF)基因片段插入穿梭载体pAdTrack-CMV,产生重组质粒pAdTrack-CMV-hKGF,经PmeI线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,得到重组腺病毒质粒pAdEasy-hKGF... 详细信息

将PCR扩增得到的人角质细胞生长因子(hKGF)基因片段插入穿梭载体pAdTrack-CMV,产生重组质粒pAdTrack-CMV-hKGF,经PmeI线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,得到重组腺病毒质粒pAdEasy-hKGF。采用Lipofectamine2000将pAdEasy-hKGF转染到HEK-293细胞,在HEK-293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有hKGF基因。获得的重组hKGF腺病毒感染颗粒可高效感染HaCat细胞。Western blot结果显示,重组腺病毒感染的HaCat细胞可分泌表达hKGF蛋白。

关键词：人角质细胞生长因子腺病毒同源重组分泌表达

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