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免疫学杂志 2009年第2期25卷 117-121页

作者：余江林羿狄静芳杨宇峰广东药学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系暨南大学水生生物研究所广东省教育厅水体富营养化与赤潮防治重点实验室暨南大学组织移植与免疫研究中心

目的研究大型海藻龙须菜提取物对小鼠脾脏淋巴细胞内TGF-β表达的影响,并初探其免疫调控作用机制。方法以大型海藻龙须菜为实验材料,采用流式细胞术对Balb/c小鼠脾脏淋巴细胞进行表型分析,检测了不同浓度龙须菜提取物共培养条件下CD45+... 详细信息

目的研究大型海藻龙须菜提取物对小鼠脾脏淋巴细胞内TGF-β表达的影响,并初探其免疫调控作用机制。方法以大型海藻龙须菜为实验材料,采用流式细胞术对Balb/c小鼠脾脏淋巴细胞进行表型分析,检测了不同浓度龙须菜提取物共培养条件下CD45+细胞内转化生长因子(TGF-β)表达水平的变化,并对产生TGF-β的细胞进行身份鉴定。结果龙须菜提取物不同反应浓度处理条件下Balb/c小鼠脾脏淋巴细胞中CD45+CD83+/CD45+及CD45+CD80+/CD45+细胞百分率与对照组比较无显著性差异(P>0.05),但CD45+TGF-β/CD45+细胞百分率与龙须菜提取物反应液浓度则呈明显的线性剂量依赖关系(r2=0.8145,P<0.05),最适反应相对百分浓度为2%。TGF-β主要来源于CD3+T细胞(约占35.4%)和CD49b+NK细胞(约占46.6%)。结论提示龙须菜提取物具有通过TGF-β进行免疫抑制或生物调节的功能。

关键词：龙须菜 CD45 TGF-β 流式细胞仪

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CD40配体-受体载体介导的CpG ODN靶向脐血B淋巴细胞的特异传递及其免疫效应(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第5期13卷 974-978页

作者：曾慧兰蒋建伟郑梅珍古晨韩新爱曾耀英狄静芳严玉霞暨南大学附属第一医院广东省广州市510632 暨南大学医学院生化教研室广东省广州市510632 中山大学中山医学院临床医学系广东省广州市510632 暨南大学组织移植与免疫研究中心广东省广州市510632

背景:CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值,但存在种属和细胞特异性,细胞摄取率低,易被酶降解,成为临床应用的障碍。目的:拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体-受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异... 详细信息

背景:CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值,但存在种属和细胞特异性,细胞摄取率低,易被酶降解,成为临床应用的障碍。目的:拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体-受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异靶向传递及其免疫效应的增强作用。设计、时间及地点:观察对比实验,于2004-04/2007-10在广州暨南大学附属第一医院血液科、儿科完成。材料:取健康新生儿的肝素抗凝新鲜脐血,事先征得父母知情同意并获医院伦理委员会审核批准。方法:制备CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸交联复合物,与脐血单个核细胞共培养。分别于24,48,72,96h应用流式细胞仪检测单个核细胞对FAM标记CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度;培养96h后用直接免疫荧光标记法标记CD19,CD20,CD22单抗,以流式细胞仪检测阳性表达率;细胞悬液加入96孔板,3组分别加入CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸、单纯CpG寡核苷酸及ddH2O,培养92h,以四甲基偶氮唑盐比色法测细胞增殖能力;以酶联免疫吸附法测以上3组细胞培养上清IgG水平。主要观察指标:单个核细胞对CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度,淋巴细胞亚群的表达,细胞增殖能力,培养上清IgG水平。结果:与单纯CpG寡核苷酸未交联组相比,单个核细胞对交联复合物摄取率更高(>98%),达摄取峰值时间更早。共培养后CD19+,CD22+,CD20+细胞表达升高,细胞增殖量及上清IgG水平均高于对照组(P<0.05)。结论:CD40配体-受体载体系统有助于CpG寡核苷酸特异高效的B细胞靶向投递,并增强其免疫效应。

关键词： CD40配体 CPG寡核苷酸 B淋巴细胞靶向投递

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rhFGF-7对体外培养人皮肤角质形成细胞增殖的影响

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中国皮肤性病学杂志 2009年第5期23卷 262-264页

作者：朱国兴吴晓萍曾耀英刘钧澄聂燕芳黄秀艳中山大学附属第三医院皮肤性病科广东广州510630 暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 中山大学附属第一医院小儿外科广东广州510080

目的建立一种人皮肤角质形成细胞分离和培养的方法,研究重组人成纤维细胞生长因子7(rhFGF-7)对人皮肤角质形成细胞增殖的影响。方法取环切术后包皮,分别用胰酶和dispaseⅡ酶消化法分离表皮,用无血清培养基进行无滋养层培养,采用免疫细... 详细信息

目的建立一种人皮肤角质形成细胞分离和培养的方法,研究重组人成纤维细胞生长因子7(rhFGF-7)对人皮肤角质形成细胞增殖的影响。方法取环切术后包皮,分别用胰酶和dispaseⅡ酶消化法分离表皮,用无血清培养基进行无滋养层培养,采用免疫细胞化学方法对培养的细胞进行鉴定,并用细胞计数法测定细胞的生长曲线,MTT法检测rhFGF-7对人皮肤角质形成细胞增殖的影响。结果与胰酶消化分离表皮相比,dispaseⅡ酶消化获得的表皮,其细胞贴壁率高,增殖速度快,且成纤维细胞污染少;荧光显微镜下细胞胞浆呈黄绿色,为角蛋白阳性染色;培养的角质形成细胞可持续增殖至第8代,10ng/mL的rhFGF-7促角质形成细胞增殖作用最显著。结论所建立的人皮肤角质形成细胞分离和培养方法,可获得高纯度的人皮肤角质形成细胞,rhFGF-7可促进体外培养人皮肤角质形成细胞的增殖。

关键词：人皮肤角质形成细胞细胞培养细胞增殖

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p38MAPK抑制剂抑制脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达

p38MAPK抑制剂抑制脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达

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第二届全国器官捐献与移植学术研讨会

作者：陈洁刘嘉雯曾慧兰曾耀英苏泽轩暨南大学附属第一医院泌尿外科/器官移植科广州 510630 暨南大学附属第一医院血液科广州 510630 暨南大学组织移植与免疫中心广州 510632

目的:观察SB203580阻断p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路，抑制脑死亡(BD)大鼠肝脏促炎细胞因子的表达。方法：雄性Wistar大鼠(180-200g)30只，随机分三组：(1)BD组(n=10只)：诱导大鼠脑死亡;(2)BD+SB203580组(n=10只)：大鼠脑死亡... 详细信息

目的:观察SB203580阻断p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路，抑制脑死亡(BD)大鼠肝脏促炎细胞因子的表达。方法：雄性Wistar大鼠(180-200g)30只，随机分三组：(1)BD组(n=10只)：诱导大鼠脑死亡;(2)BD+SB203580组(n=10只)：大鼠脑死亡诱导成功时，经阴茎背静脉注射SB203580(1mg/100g·Wt)。脑死亡诱导成功后维持人工呼吸6小时，如果大鼠平均动脉压大于80mmHg，则作为脑死亡供体;(3)对照组(n=10只)：正常大鼠。获取肝脏待测。RT-PCR检测各组肝脏TNF-α和IL-1β mRNA表达，Western blot检测各组肝脏TNF-α和IL-1β蛋白表达以及磷酸化p38MAPK。结果：BD+SB203580组肝脏TNF-α和IL-1βmRNA和蛋白表达，以及磷酸化p38MAPK表达与BD组的比较显著下降;与对照组比较仍明显增高。结论：SB203580能抑制p38MAPK信号通路关键靶点，抑制脑死亡大鼠肝脏炎症细胞因子的表达，是提高脑死亡供体肝脏质量的一条有效途径。

关键词：丝裂原活化蛋白激酶脑死亡促炎细胞因子信号通路供体肝脏

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清开灵注射液体外抑制HIV-1作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第2期30卷 176-179页

作者：赵令斋曾耀英黄秀艳曾祥凤林长乐唐先高暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广东广州510632 广州市第八人民医院传染病研究所广东广州510060

目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用。方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后,与MT-2细胞混合培养,2 ... 详细信息

目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用。方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后,与MT-2细胞混合培养,2 h后在荧光下计数融合细胞数目,评价QKL对两种细胞早期融合的影响;用MTT法检测QKL对HIV-1ⅢB急性感染的MT-2细胞的保护作用;用HIVp24抗原试剂盒检测HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞的培养上清p24抗原的含量,分析QKL对HIV-1复制的影响。结果:QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞的CC50分别为1/50.76和1/36.97;抑制H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞早期融合作用的EC50=1/235.29,SI=6.36;对HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞保护作用的EC50=1/144.93,SI=3.92;抑制p24抗原产生作用的EC50=1/175.44,SI=4.75。结论:QKL体外有抗HIV-1活性,作用机制可能是多靶点的,可抑制病毒进入细胞和胞内复制。

关键词：清开灵注射液人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1) 细胞融合抑制作用

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红外荧光成像技术分析DNA-蛋白复合物电泳迁移率的变动

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南方医科大学学报 2009年第2期29卷 289-291页

作者：王毅飞蔡德鸿陈宏莫永炎伊娜邢飞跃南方医科大学珠江医院内分泌科广东广州510282 南方医科大学病理生理学教研室广东广州510515 广州市中医院内分泌科广东广州510130 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标... 详细信息

目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标记的PPARγ2启动子寡核苷酸结合,丙烯酰胺非变性胶电泳分离,Odyssey红外荧光成像系统扫描分析。结果一条DNA-蛋白结合复合物图像清晰直观,信号强度随着蛋白量的增加而增加。结论红外荧光技术可用于DNA-蛋白复合物电泳迁移率变动的分析,具有灵敏度高、操作方便的优点。

关键词：红外荧光电泳迁移率 DNA-蛋白复合物糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白过氧化物酶体增殖物活化受体γ2

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鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：李孝建沈雁张志李延仓杨小红曾耀英暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电... 详细信息

目的研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电泳技术展示蛋白质分子的表达,Image

关键词：初步研究差异蛋白质点差异表达

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不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：李孝建沈雁张志李延仓杨小红曾耀英暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体... 详细信息

目的探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体内等不同培养体系下培养,观察表皮干细

关键词：细胞增殖几丁质膜培养体系

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不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：李孝建沈雁张志曾耀英李延仓杨小红暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的:探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠... 详细信息

目的:探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体内等不同培养体系下培养,观察表皮干细胞生长情况;普通培养和几丁质膜共培养4w后,表皮干细胞克隆形成率的差异;免疫组织化学染色观察表皮干细胞以几丁质膜为载体植入裸鼠体内后4w,表皮干细胞的增殖、分化情况等。结果:表皮干细胞在普通培养皿培养3d左右,细胞开始克隆增殖,12d左右融合成片,传代培养后增殖能力逐渐减低,融合成片时间逐渐延长,传代培养3-4代后细胞终末分化,失去增殖能力;几丁质膜培养表皮干细胞,2w后呈棋盘式集落生长,4w后几丁质膜上有大量的表皮干细胞小集落,集落上有大量的增殖细胞附着生长,扫描电镜下见几丁质膜纤维直径约10μm,以纤维为主,上下两层呈纵横排列成十字孔,孔间有大量表皮干细胞集落。几丁质膜支架材料培养表皮干细胞4w后,其克隆形成率明显高于普通培养皿培养(P<0.05)。表皮干细胞几丁质膜支架植入裸体内培养4w后,细胞大量增殖形成"巢状"排列,在"表皮巢"周围,可见皮肤附件结构形成。结论:表皮干细胞在体外普通培养皿培养,可增殖生长,但维持增殖时间较短;与几丁质膜材料培养,可较长时间地维持表皮干细胞的增殖特性;植入体内后表皮干细胞大量增殖,并可分化形成毛囊等皮肤附件结构。

关键词：细胞增殖培养体系传代培养皮肤附件

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鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：李孝建沈雁张志曾耀英李延仓杨小红暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的:研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶... 详细信息

目的:研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电泳技术展示蛋白质分子的表达,Image Scanner□透射扫描仪及Labscan扫描软件进行扫描获取图像,利用ImageMaster 2D Elite 5.0分析软件对图像进行强度校正、点检测、背景消减、匹配,以获取两种细胞的差异蛋白点;切取差异蛋白点,MOLDI-TOF-TOF质谱仪进行质谱分析,利用软件Mascotdistiller过滤基线峰、识别信号峰,Mascot软件搜索NCBInr数据库(http://***),寻找匹配的相关蛋白质,同时查询其功能。结果:两种细胞的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性,表皮干细胞与角质形成细胞的电泳图谱平均蛋白质点数分别为(930±15)、(982±18)个,匹配点数分别为(798±11)、(850±13)个,匹配率分别为85.81%、86.56%;两种细胞蛋白质间匹配点数(868±8)个,匹配率是76.98%;找到差异蛋白质点11个,其中只在表皮干细胞表达或高表达的有8个,只在角质形成细胞表达或高表达的有3个。差异蛋白质点分别进行MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析,鉴定出11个有意义的蛋白质。其中表皮干细胞表达或表达明显增高的8个蛋白质包括Rho GDP解离抑制蛋白□(dissociation inhibitor(GDI))、翻译延长因子1(Translationelongation factor-1)、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、谷胱苷肽S-转移酶(Glutathione S-transferase Mu 2,GSTM-2)、醛糖还原酶(Aldosereductase,AR)等;角质形成细胞表达或表达明显增高的3个蛋白质,包括Nitrilasehomolog 2(Nit 2)、膜联蛋白A5(Annexin A5)和Ubiquitin-protein hydrolase等。结论:利用双向电泳和质谱分析技术,成功分离和鉴定出鼠表皮干细胞和角质形成细胞差异表达的蛋白质。这些差异蛋白质可能与表皮干细胞和角质形成细胞体外增殖、分化特性的差异有一定关系,为进一步研究调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系奠定了基础。

关键词：差异蛋白质点初步研究差异表达

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