检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2009年第8期26卷 1081-1081页

作者：刘嘉雯陈洁曾慧兰曾耀英苏泽轩暨南大学附属第一医院泌尿外科/器官移植科广州510630 暨南大学附属第一医院血液科广州510630 暨南大学附属第一医院组织移植与免疫中心广州510630

脑死亡供体器官移植后易发生急慢性排斥反应，移植前改善脑死亡供体器官质量是获得移植物长期存活和功能的关键^[1]。本研究旨在观察补阳还五汤（BYHWT）预处理大鼠对其脑死亡后肝脏炎症细胞因子、p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化... 详细信息

脑死亡供体器官移植后易发生急慢性排斥反应，移植前改善脑死亡供体器官质量是获得移植物长期存活和功能的关键^[1]。本研究旨在观察补阳还五汤（BYHWT）预处理大鼠对其脑死亡后肝脏炎症细胞因子、p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）磷酸化和反应性氧族（ROS）的变化，探讨其对肝脏的保护机制。

关键词：补阳还五汤脑死亡预处理保护作用肝脏 p38丝裂原活化蛋白激酶大鼠慢性排斥反应

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His-GILZ原核表达载体的构建及其表达与纯化

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广东医学 2009年第2期30卷 191-193页

作者：王毅飞蔡德鸿陈宏莫永炎伊娜邢飞跃南方医科大学珠江医院内分泌科广州510282 南方医科大学病理生理学教研室广州510515 广东省广州市中医院内分泌科 510130 暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的获取糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)的His融合蛋白,为下阶段深入研究GILZ的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础。方法利用基因工程技术,BamHⅠ/XhoⅠ酶切真核表达质粒HA-GILZ/PcDNA3获得GILZ cDNA,重组于能表达6个组... 详细信息

目的获取糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)的His融合蛋白,为下阶段深入研究GILZ的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础。方法利用基因工程技术,BamHⅠ/XhoⅠ酶切真核表达质粒HA-GILZ/PcDNA3获得GILZ cDNA,重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒pET-30a中。然后用该亚克隆重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA柱纯化。结果亚克隆获得GILZ/pET-30a高效原核表达重组载体,诱导表达的融合蛋白占细菌总蛋白高达40%以上,纯化的蛋白分子量约为24kD。结论成功构建His-GILZ融合蛋白原核表达载体,并高效表达、纯化,为进一步研究其结构功能关系和临床应用奠定了基础。

关键词：糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白融合蛋白原核蛋白构建纯化

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GILZ真核表达载体的构建及其表达定位

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中国病理生理杂志 2009年第3期25卷 618-621页

作者：王毅飞邢飞跃蔡德鸿陈宏莫永炎伊娜南方医科大学珠江医院内分泌科广东广州510282 暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632 南方医科大学病理生理教研室广东广州510515 广州市中医院内分泌科广东广州510130

目的:克隆、构建HA标签的糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ表达载体,观察其在细胞中表达与定位,为研究GILZ在脂肪细胞分化中的作用提供工具。方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从C3H10T1/2细胞中扩增带有HA标签的GILZcDNA编码区,并将其重... 详细信息

目的:克隆、构建HA标签的糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ表达载体,观察其在细胞中表达与定位,为研究GILZ在脂肪细胞分化中的作用提供工具。方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从C3H10T1/2细胞中扩增带有HA标签的GILZcDNA编码区,并将其重组于真核表达载体pcDNA3中。经酶切、序列鉴定分析后,将该重组质粒通过Lipofectamine2000脂质体和CaCl2方法,分别转染C3H10T1/2和293T细胞,用HA抗体免疫荧光和免疫印迹法检测GILZ在细胞内的表达、分布及分子量大小。结果:HA-GILZ表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功,并在C3H10T1/2和293T细胞中获得了高效表达。在荧光显微镜下,GILZ主要表达于细胞质内,分子量约20kD。结论:成功构建HA-GILZ基因表达载体并表达于C3H10T1/2细胞质中,为GILZ的功能研究奠定了基础。

关键词：糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白 C3H10T1/2细胞真核表达载体

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可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白诱导淋巴结细胞向CD4^＋CD25^＋T细胞分化

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生物化学与生物物理进展 2008年第6期35卷 676-683页

作者：邢飞跃刘静于哲季煜华暨南大学组织移植与免疫研究中心暨南大学医学院广州510632

直接用可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白(Jagged-1/Fc)在体外诱导小鼠淋巴结细胞向CD4+CD25+T细胞分化.通过荧光标记单克隆抗体染色结合流式细胞术,观察不同剂量Jagged-1/Fc在不同时间对淋巴结细胞向CD4+CD25+T细胞分化的影响,观察Jagged-1/F... 详细信息

直接用可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白(Jagged-1/Fc)在体外诱导小鼠淋巴结细胞向CD4+CD25+T细胞分化.通过荧光标记单克隆抗体染色结合流式细胞术,观察不同剂量Jagged-1/Fc在不同时间对淋巴结细胞向CD4+CD25+T细胞分化的影响,观察Jagged-1/Fc诱导T细胞内细胞因子的变化;藉ELISA法检测Jagged-1/Fc诱导分化的T细胞分泌TGF-β1、IL-4和IL-10的水平.结果显示,超过500.0μg/L剂量的Jagged-1/Fc使CD4+CD25+T细胞百分比明显增高,诱导时间需要4～6天,抗Jagged-1单抗能抵消Jagged-1/Fc的诱导作用,用DAPT阻断Notch信号通路的活化也能抑制Jagged-1/Fc的诱导作用,Jagged-1/Fc诱导分化的T细胞培养上清中IL-4和IL-10的水平明显增高,TGF-β1无明显变化,胞内IL-4,IL-10,IL-2和TNF-α的水平也呈增高趋势.上述结果表明,可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白在体外可诱导小鼠淋巴结细胞向CD4+CD25+调节性T细胞分化.

关键词： Jagged-1 淋巴结细胞调节性T细胞分化

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黄芩苷对不同刺激剂诱导的小鼠T淋巴细胞体外活化的影响

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中草药 2008年第8期39卷 1188-1191页

作者：李林曾耀英黄秀艳宋兵杨志姚满林滕菲暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的分析黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外活化的影响,探讨其对免疫系统的作用,阐明其免疫抑制作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以不同终质量浓度的黄芩苷预孵育淋巴细胞4 h,再以刀豆蛋白A(Con A)或佛波醇酯类多克隆刺激剂... 详细信息

目的分析黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外活化的影响,探讨其对免疫系统的作用,阐明其免疫抑制作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以不同终质量浓度的黄芩苷预孵育淋巴细胞4 h,再以刀豆蛋白A(Con A)或佛波醇酯类多克隆刺激剂(PDB)诱导小鼠淋巴细胞活化,利用流式细胞术分别结合双色免疫荧光单克隆抗体染色技术检测CD3+T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分子的表达。结果黄芩苷(10、20、30 mg/L)能明显抑制Con A或PDB诱导T细胞活化分子CD69和CD25的表达,且呈浓度依赖性。结论黄芩苷能够明显抑制多克隆刺激剂Con A或PDB诱导的T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系。提示黄芩苷在T细胞活化过程的信号转导中有抑制作用,从而可以通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。

关键词：黄芩苷 T淋巴细胞 CD69 CD25

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Forskolin对小鼠体外T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响

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中药材 2008年第7期31卷 1008-1012页

作者：宋兵曾耀英黄秀艳李林滕菲杨志姚满林暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究Forskolin对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色... 详细信息

目的:研究Forskolin对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法:无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术来检测CD3+T细胞早期活化标志CD69的表达水平;用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色技术结合流式细胞术和CELLQuest、Mod FitLT软件,分析T细胞增殖情况;用碘化丙锭(PI)染色技术分析细胞周期分布。结果:加入终浓度为10-7、10-6、10-5M的Forskolin,孵育8 h后,CD3+T细胞CD69的表达水平和平均荧光强度(MFI)与Con A组相比都有显著的降低,且呈梯度依赖性;对Con A刺激的小鼠CD3+T细胞的增殖指数(PI)也有梯度性抑制;对细胞周期的影响表现为:随着Forskolin浓度升高,处于G0/G1期的细胞增加,S期细胞减少,G2/M期的细胞也有少量减少。结论:Forskolin能有效抑制小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖,阻滞细胞从G0/G1期进入S、G2/M期。由此推断Forskolin在某种程度上是一种潜在的免疫抑制剂。

关键词： Forskolin 活化增殖周期流式细胞术

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淫羊藿提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

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中草药 2008年第9期39卷 1355-1359页

作者：滕菲曾耀英黄秀艳杨志姚满林宋兵李林暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的研究淫羊藿水溶性提取物对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法无菌分离小鼠各部位淋巴结,制备单细胞悬液,加入不同终质量浓度(5、25、50mg/L)的淫羊藿提取物,以MTT法检测药物对T细胞活性的影响;利... 详细信息

目的研究淫羊藿水溶性提取物对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法无菌分离小鼠各部位淋巴结,制备单细胞悬液,加入不同终质量浓度(5、25、50mg/L)的淫羊藿提取物,以MTT法检测药物对T细胞活性的影响;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料CFDA-SE染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果MTT法检测淫羊藿提取物在50mg/L时细胞存活率达52.36%。ConA作用6h后,对照组CD69+表达率为(4.61±0.85)%,ConA组CD69+T细胞的比率上升至(38.30±2.54)%,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L时均抑制ConA诱导的CD3+T淋巴细胞CD69的表达(P<0.01),其表达率分别下调为(36.16±2.14)%,(30.5±1.72)%,(15.99±0.87)%。培养48、72后,对照组增殖指数(PI)分别为1.01±0.01和1.05±0.01,ConA组PI分别达到1.42±0.01、2.32±0.01,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L均抑制T淋巴细胞增殖(P<0.01),48h时PI分别为1.28±0.01、1.26±0.01、1.21±0.01;72h时PI分别为2.30±0.03、2.13±0.02、2.10±0.01。结论淫羊藿提取物能明显抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性。

关键词：淫羊藿提取物 T淋巴细胞活化增殖

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茴香霉素对小鼠同种异基因皮肤移植的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第3期24卷 228-230页

作者：陈笛邢飞跃狄静芳陈玲暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510623

目的:阐明茴香霉素对淋巴细胞反应性的影响以及在皮肤移植中抑制排斥反应的作用。方法:用MTT法检测茴香霉素刺激下淋巴细胞在单向或双向混合淋巴细胞反应中的反应性。C57BL/6小鼠作为供体,BALB/c小鼠作为受体。手术前3d分别给3组BALB/c... 详细信息

目的:阐明茴香霉素对淋巴细胞反应性的影响以及在皮肤移植中抑制排斥反应的作用。方法:用MTT法检测茴香霉素刺激下淋巴细胞在单向或双向混合淋巴细胞反应中的反应性。C57BL/6小鼠作为供体,BALB/c小鼠作为受体。手术前3d分别给3组BALB/c小鼠皮下注射生理盐水、环胞霉素A以及茴香霉素,手术当天继续注射至术后第7天。环胞霉素A及茴香霉素的注射剂量分别为:20mg/kg、12.5mg/kg。结果:在剂量10.0μg/L时,茴香霉素能抑制单向或双向混合淋巴细胞反应中淋巴细胞的反应性(P均<0.01);茴香霉素组移植皮肤的存活时间明显高于环胞霉素A组以及对照组。结论:茴香霉素能明显抑制淋巴细胞的反应性;并且能明显延长受体对皮肤移植物的耐受时间,可能为移植免疫排斥的治疗提供新的途径。

关键词：茴香霉素混合淋巴细胞反应皮肤移植

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淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第11期24卷 1059-1061,1065页

作者：滕菲曾耀英黄秀艳杨志姚满林宋兵李林暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术分别检测中期和晚期活化标志CD25和CD71分子的表达;取中期活化的细胞上清,利用LuminexTM100... 详细信息

目的:研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外中期和晚期活化的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术分别检测中期和晚期活化标志CD25和CD71分子的表达;取中期活化的细胞上清,利用LuminexTM100分析上清中IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ的含量变化。结果:ICA在终浓度0.3、1.5、3.0μmol/L时明显抑制CD25的表达而对CD71没有明显影响;下调Th2型细胞因子及上调Th1型细胞因子的分泌量,但没有剂量依赖效应。结论:ICA下调CD25、IL-2和Th2型细胞因子水平,抑制T细胞活化,同时有一定程度的促进细胞免疫反应,因此ICA可能具有双向调节免疫平衡的作用。

关键词：淫羊藿甙 T淋巴细胞 CD25 CD71 流式细胞术

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咖啡酸苯乙酯对小鼠CD3^+T细胞体外活化和增殖的影响

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中国药理学通报 2008年第4期24卷 472-477页

作者：唐先高曾耀英黄秀艳周建国暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的研究咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对小鼠CD3+T淋巴细胞活化及增殖的影响,探讨其作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结淋巴细胞,制备淋巴细胞悬液。在淋巴细胞活化实验中,分别与不同浓度的咖啡酸苯乙酯预先孵育2h后... 详细信息

目的研究咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对小鼠CD3+T淋巴细胞活化及增殖的影响,探讨其作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结淋巴细胞,制备淋巴细胞悬液。在淋巴细胞活化实验中,分别与不同浓度的咖啡酸苯乙酯预先孵育2h后,加入促分裂原伴刀豆蛋白A(ConA),运用荧光抗体染色技术结合流式细胞术,8h后,检测T淋巴细胞早期活化标记分子CD69的表达情况;24h后,检测T淋巴细胞中期活化标记分子CD25的表达情况;在淋巴细胞增殖试验中,运用CFDA-SE标记法检测T淋巴细胞刺激48h后的增殖情况。结果CAPE(0·5、1、5、10mg·L-1)能够明显地抑制ConA刺激的小鼠淋巴细胞活化,且呈浓度依赖性;CAPE(0·5、1、5、10mg·L-1)能够明显地抑制ConA刺激的小鼠淋巴细胞增殖,且呈浓度依赖性。结论CAPE对小鼠CD3+T淋巴细胞的体外活化和增殖具有抑制作用,其作用机制可能通过同时抑制PLC-γ信号途径和MAP激酶途径,由此推理CAPE是一种潜在的有效的免疫抑制剂。

关键词：咖啡酸苯乙酯 T淋巴细胞活化增殖流式细胞术

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