检索结果-内蒙古大学图书馆

现代免疫学 2007年第3期27卷 182-187页

作者：于哲邢飞跃王通暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在小鼠T细胞增殖中的作用。以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,通过流式细胞术分析p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580和p38 MAPK的激活剂茴香霉素在不同剂量下对ConA刺激的T细胞增殖作用,并... 详细信息

研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在小鼠T细胞增殖中的作用。以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯染色,通过流式细胞术分析p38 MAPK的特异性抑制剂SB203580和p38 MAPK的激活剂茴香霉素在不同剂量下对ConA刺激的T细胞增殖作用,并测定其增殖的相关指数;采用碘化丙锭染色分析SB203580和茴香霉素对ConA或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激的小鼠T细胞周期变化的影响。结果显示:0.5μmol/L～15.0μmol/L SB203580对ConA诱导的T细胞增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖关系(r=-0.97,P<0.01);该浓度范围的SB203580能够呈明显剂量依赖性地阻止ConA或PDB加Ion诱导的T细胞进入S期或G2/M期(r_s=-0.98,P<0.01;r_(G2)/M=-0.97,P<0.01)。茴香霉素浓度在0.01～0.5ng/ml时能够增强ConA对T细胞的促增殖作用,并能够促进ConA诱导的T细胞进入G2/M期,促进PDB加Ion诱导的T细胞进入S期。以上提示p38信号通路的活化在促进小鼠T细胞增殖中可能起着重要作用。

关键词： p38丝裂原活化蛋白激酶 T淋巴细胞增殖周期

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腺病毒介导重组hKGF基因转染HaCat细胞及其表达

引用

中国生物工程杂志 2007年第3期27卷 1-5页

作者：吴晓萍曾耀英贺芳暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

将PCR扩增得到的人角质细胞生长因子(hKGF)基因片段插入穿梭载体pAdTrack-CMV,产生重组质粒pAdTrack-CMV-hKGF,经PmeI线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,得到重组腺病毒质粒pAdEasy-hKGF... 详细信息

将PCR扩增得到的人角质细胞生长因子(hKGF)基因片段插入穿梭载体pAdTrack-CMV,产生重组质粒pAdTrack-CMV-hKGF,经PmeI线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,得到重组腺病毒质粒pAdEasy-hKGF。采用Lipofectamine2000将pAdEasy-hKGF转染到HEK-293细胞,在HEK-293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有hKGF基因。获得的重组hKGF腺病毒感染颗粒可高效感染HaCat细胞。Western blot结果显示,重组腺病毒感染的HaCat细胞可分泌表达hKGF蛋白。

关键词：人角质细胞生长因子腺病毒同源重组分泌表达

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细胞外信号调节激酶1/2信号通路在小鼠T细胞增殖、周期和活化中的作用

引用

暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第4期28卷 345-350页

作者：滕振平邢飞跃季煜华暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在小鼠T淋巴细胞增殖、周期和活化中的作用。方法:分离小鼠淋巴结细胞,藉多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激,流式细胞术分析ERK1/2信号通路的特异性阻断剂P... 详细信息

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在小鼠T淋巴细胞增殖、周期和活化中的作用。方法:分离小鼠淋巴结细胞,藉多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)或佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激,流式细胞术分析ERK1/2信号通路的特异性阻断剂PD98059对小鼠T淋巴细胞增殖、周期和活化的影响。结果:活体染料羧基荧光素乙酰乙酸染色分析显示,不同浓度(5、10、20、30、40μmol/L)的PD98059对ConA诱导的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用,呈现剂量依赖关系(r=0.985,P<0.01)。碘化丙锭染色分析表明,PD98059可阻止ConA刺激的T淋巴细胞进入S期和G2/M期,PD98059对PDB+Ion刺激的T淋巴细胞细胞周期的影响与ConA刺激相似,不同的是S期和G2/M期的变化较ConA作用更显著。荧光标记单克隆抗体染色显示,不同浓度的PD98059仅能轻微影响T淋巴细胞表面活化标志CD69和CD25的表达。结论:PD98059对小鼠T淋巴细胞的增殖有明显抑制作用,并阻止其进入S期和G2/M期,但不能明显抑制小鼠T淋巴细胞的早期和中期活化。

关键词：细胞外信号调节激酶1/2 T淋巴细胞增殖细胞周期活化

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三七提取物对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响

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免疫学杂志 2007年第1期23卷 16-19页

作者：周建国曾耀英黄秀艳李海仙叶雪仪于哲臧宁暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632

目的分析三七提取物(SE)对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用机制。方法分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)或者佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析三七提取物... 详细信息

目的分析三七提取物(SE)对小鼠淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响,探讨其免疫抑制作用机制。方法分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)或者佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析三七提取物对淋巴细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期分布。结果CFSE染色分析显示,SE对ConA或者佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性。对细胞周期分析表明,随着三七提取物浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期,而处于亚二倍体峰的细胞数基本不变。结论三七提取物对小鼠淋巴细胞的增殖有明显抑制作用,它能抑制淋巴细胞进入细胞分裂周期,这种抑制作用表现出明显的周期特异性。

关键词：三七淋巴细胞细胞周期细胞增殖

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TMB-8对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

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中国病理生理杂志 2007年第5期23卷 1008-1012页

作者：叶雪仪曾耀英黄秀艳王通臧宁周建国林长乐暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究胞内钙离子释放阻断剂8-(N,N-二乙胺)辛基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯(TMB-8)对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响。方法:以ConA作为T细胞活化、增殖的刺激剂,以不同浓度的TMB-8及与环孢菌素A(C... 详细信息

目的:研究胞内钙离子释放阻断剂8-(N,N-二乙胺)辛基-3,4,5-三甲氧基苯甲酸酯(TMB-8)对刀豆蛋白A(ConA)介导的小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响。方法:以ConA作为T细胞活化、增殖的刺激剂,以不同浓度的TMB-8及与环孢菌素A(CsA)联合作用于该系统,用流式细胞术检测T细胞早期活化标志CD69分子的表达;以活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色流式细胞术,分析TMB-8在ConA刺激下小鼠淋巴细胞的增殖相关指数(PI);以碘化丙啶染色分析细胞周期的分布情况。结果:ConA作用6h后,CD69+T细胞的比率为(74.88±1.88)%,TMB-8在终浓度10、20、40μmol/L下均抑制ConA介导的T细胞CD69表达(P<0.01),其中,40μmol/L的TMB-8为(52.55±1.54)%,达到最高抑制率。培养48h和72h,ConA刺激下的PI值分别为1.24±0.01和2.05±0.07,TMB-8从5μmol/L起均抑制ConA介导的淋巴细胞增殖(P<0.01),以40μmol/L的效果最为显著,PI值分别为1.01±0.01和1.10±0.01;10μmol/L的TMB-8与25μg/L的环孢菌素A(CsA)具有明显的协同抑制作用(P<0.01)。细胞周期分析显示,培养48h的TMB-8从10μmol/L起即显著抑制S期(P<0.01)。结论:TMB-8可明显抑制ConA介导下的T细胞早期活化及增殖,并具T细胞周期的S期阻滞作用。

关键词：三甲氧基苯甲酸酯 T淋巴细胞 CD69 细胞增殖细胞周期流式细胞术

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重组hFGF-10腺病毒促进角质形成细胞增殖

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中国病理生理杂志 2007年第2期23卷 213-216页

作者：吴晓萍曾耀英暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:构建重组人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)腺病毒,并观察其对角质形成细胞增殖的影响,为探索新的皮肤组织工程种子细胞的来源奠定基础。方法:用PCR方法扩增得到人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)基因片段,与穿梭载体pAdTrack-CMV连... 详细信息

目的:构建重组人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)腺病毒,并观察其对角质形成细胞增殖的影响,为探索新的皮肤组织工程种子细胞的来源奠定基础。方法:用PCR方法扩增得到人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)基因片段,与穿梭载体pAdTrack-CMV连接,获得的重组质粒pAdTrack-CMV-hFGF-10经PmeI线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAdEasy-hFGF-10,经酶切鉴定后转染HEK-293细胞,在HEK-293细胞中包装并扩增腺病毒。用重组腺病毒感染HaCat细胞,Western blotting检测培养上清中的重组hFGF-10。MTT法检测重组腺病毒对角质形成细胞增殖的影响。结果:成功构建了含hFGF-10基因的重组腺病毒,可高效感染HaCat细胞,培养上清与hFGF-10抗体呈阳性反应。重组腺病毒对角质形成细胞的增殖具有促进作用。结论:制备出的重组腺病毒感染HaCat细胞后分泌表达hFGF-10,并可促进HaCat细胞的增殖。

关键词：成纤维细胞生长因子10 腺病毒细胞增殖 HaCat细胞

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吲哚胺2,3-双加氧酶下调HLA-I类分子的表达

引用

暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第4期28卷 351-354页

作者：黄官友黄秀艳曾耀英吴晓萍何贤辉唐先高暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)对细胞表面HLA-I类分子的影响。方法:用脂质体法将含IDO基因的重组质粒pEGFP-IDO转染293T细胞,用Western blot检测IDOGFP在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-I类分... 详细信息

目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)对细胞表面HLA-I类分子的影响。方法:用脂质体法将含IDO基因的重组质粒pEGFP-IDO转染293T细胞,用Western blot检测IDOGFP在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-I类分子的表达。结果:Western blot证实转染重组质粒的细胞表达IDO。转染空载体的细胞与转染重组质粒的细胞HLA-A,B,C-PE染色的平均荧光强度分别为299.46±62.65及42.51±8.19,两者相比有显著性差异(P<0.01);转染重组质粒的细胞,未加色氨酸组与色氨酸组HLA-A,B,C-PE染色的平均荧光强度分别为309.17±34.89及692.12±33.42,两者相比亦有显著性差异(P<0.01)。结论:IDO下调细胞表面HLA-I类分子的表达,色氨酸能够逆转IDO所致的HLA-I类分子的下调。

关键词：人类吲哚胺2,3-双加氧酶 HLA-I类分子转染色氨酸

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桑色素对小鼠T细胞增殖、周期和巨噬细胞分泌NO的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第4期28卷 341-344页

作者：臧宁曾耀英季煜华叶雪仪黄秀艳赵令斋周建国暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:研究桑色素(morin)对小鼠T细胞增殖、细胞周期和腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(nitrogen mon-oxidum,NO)的影响。方法:以佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)和离子霉素(ionomycin,Ion)联合刺激淋巴结来源的小鼠T淋巴细胞,再以不... 详细信息

目的:研究桑色素(morin)对小鼠T细胞增殖、细胞周期和腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(nitrogen mon-oxidum,NO)的影响。方法:以佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)和离子霉素(ionomycin,Ion)联合刺激淋巴结来源的小鼠T淋巴细胞,再以不同终浓度的morin与上述细胞共培养,利用流式细胞术(FCM),以羧基荧光素双醋酸盐琥珀酰脂(carboxyfluorescein diacetate succinimide ester,CFDA-SE)染色检测T细胞的增殖;以碘化丙锭(pro-pidium iodide,PI)染色分析T细胞的细胞周期;脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞,与不同浓度morin共培养,以Griess反应检测上清液中的NO含量。结果:CFDA-SE染色分析显示,PDB+Ion组的增殖指数(proliferation index,PI)为1.70±0.05,各浓度的morin对PDB+Ion刺激的T细胞增殖,具有明显地抑制作用,以100μmol/L的morin抑制作用最明显,PI为1.03±0.01(P<0.01)。细胞周期的分析结果表明,morin组中处于S期的细胞比率较高,与PDB+Ion组相比有明显差异。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度组的morin均抑制LPS刺激巨噬细胞产生NO,100μmol/L的morin可将LPS刺激巨噬细胞产生NO为(12.89±0.11)μmol/L降低为(7.25±0.05)μmol/L,抑制作用最强。结论:Morin可显著抑制PDB+Ion刺激的T细胞增殖;其对增殖的抑制作用主要表现为S期的细胞的阻滞;对LPS刺激巨噬细胞产生的NO也有显著的抑制作用。

关键词：桑色素 T细胞增殖细胞周期巨噬细胞一氧化氮

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可溶性人sPD-L1及其抗体的制备和鉴定

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生物工程学报 2007年第1期23卷 106-111页

作者：徐丽慧迟晓云李丰耀贾仟涛查庆兵何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心

通过固定化金属离子亲和层析进行柱上复性与纯化,获得高纯度的可溶性PD-L1胞外域(sPD-L1),其纯度达95%,纯化的sPD-L1经免疫印迹分析得到验证,并具有与其受体PD-1的特异性结合活性;以该抗原免疫小鼠获得高滴度的抗血清,并以制备的sPD-L1-... 详细信息

通过固定化金属离子亲和层析进行柱上复性与纯化,获得高纯度的可溶性PD-L1胞外域(sPD-L1),其纯度达95%,纯化的sPD-L1经免疫印迹分析得到验证,并具有与其受体PD-1的特异性结合活性;以该抗原免疫小鼠获得高滴度的抗血清,并以制备的sPD-L1-HiTrap亲和层析柱纯化获得高纯度特异性抗体;将该抗体与另一商业化抗体结合建立了一种灵敏的双夹心ELISA法,检测范围为1ng/mL^100ng/mL,可用于分析可溶性PD-L1的含量。可溶性sPD-L1及其抗体的制备不仅可用于人体内特异性抗体和可溶性PD-L1的检测,同时也为进一步研究其体内外活性及其受体的性质提供了条件。

关键词： PD-L1 原核表达重折叠亲和层析抗体

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染料木黄酮与环孢菌素A联合用药对小鼠淋巴细胞体外免疫应答的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第3期28卷 322-326页

作者：叶雪仪曾耀英肇静娴狄静芳贺芳周建国赵令斋暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

研究染料木黄酮(Gen)与环孢菌素A(CsA)联合用药对小鼠体外淋巴细胞增殖、周期及混合淋巴细胞反应的影响,从而为将Gen开发为免疫干预药物以降低CsA的临床用量提供理论依据.以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠淋巴细胞增殖,通过CFDA-SE染色流式细... 详细信息

研究染料木黄酮(Gen)与环孢菌素A(CsA)联合用药对小鼠体外淋巴细胞增殖、周期及混合淋巴细胞反应的影响,从而为将Gen开发为免疫干预药物以降低CsA的临床用量提供理论依据.以刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠淋巴细胞增殖,通过CFDA-SE染色流式细胞术检测荧光强度的变化,用相关软件分析其增殖指数;以碘化丙锭(PI)染色分析细胞周期的分布情况;MTT法测定体外混合淋巴细胞反应(MLR).结果显示,细胞培养48 h后,ConA诱导下小鼠淋巴细胞与空白对照组相比有明显增殖(P<0.01),5、10μmol/L Gen以及0.02μmol/L CsA均可抑制这种增殖作用,二者联合用药后,这种抑制增殖的作用加强(P<0.01).对细胞周期分析显示,Gen和CsA抑制细胞由G0/G1期向S期转化.MTT法测定的结果显示,二者联合用药后Q值分别为1.82、1.39,对MLR呈协同抑制效应.以上结果表明与单剂量Gen、CsA相比,二者联合使用对ConA诱导的淋巴细胞增殖、细胞周期的阻滞、体外混合淋巴细胞反应的抑制作用更加明显,呈协同效应.

关键词：染料木黄酮环孢菌素A 增殖周期混合淋巴细胞反应

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