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第四军医大学学报 2007年第7期28卷 585-588页

作者：季煜华曾耀英肇静娴暨南大学组织移植与免疫研究中心广东广州510632

目的:探讨细胞骨架蛋白α-SMA的表达与软骨细胞去分化之间的联系.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(RGCs),对原代至第5代RGCs进行细胞生长动力学分析,阿尔新兰染色、免疫细胞化学法和蛋白质印迹分别检测蛋白多糖,α-SMA和Ⅱ型胶原... 详细信息

目的:探讨细胞骨架蛋白α-SMA的表达与软骨细胞去分化之间的联系.方法:分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(RGCs),对原代至第5代RGCs进行细胞生长动力学分析,阿尔新兰染色、免疫细胞化学法和蛋白质印迹分别检测蛋白多糖,α-SMA和Ⅱ型胶原的表达.结果:随着传代次数的增加,前3代RGCs的每日倍增指数逐渐增加,随后不断下降.原代RGCs的阿尔新兰和Ⅱ型胶原染色均呈强阳性,仅个别细胞α-SMA弱阳性染色.随着传代次数的增加,阿尔新兰和Ⅱ型胶原阳性染色的细胞比例迅速下降,第3代以后的RGCs阿尔新兰染色均为阴性,第5代RGCs也仅有圆形细胞仍保持了Ⅱ型胶原阳性染色,而α-SMA阳性染色细胞的比例则不断增加.蛋白质印迹所揭示的Ⅱ型胶原和α-SMA蛋白表达的变化趋势与免疫细胞化学染色的结果一致.结论:α-SMA从无到有并随着RGCs去分化程度的增强而增加的表达模式,提示它是引起软骨细胞“去分化”的重要原因.

关键词：生长板软骨细胞去分化 α-平滑肌肌动蛋白

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鹰嘴豆芽素A对小鼠T淋巴细胞体外活化增殖和细胞周期的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第2期28卷 115-119页

作者：林长乐曾耀英曾祥凤赵令斋黄秀艳叶雪仪暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究黄酮类化合物鹰嘴豆芽素A(biochanin A,bioA)对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期的影响。方法:运用双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析bioA对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下早期活化抗原CD69表达的影响;运用羧基... 详细信息

目的:研究黄酮类化合物鹰嘴豆芽素A(biochanin A,bioA)对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期的影响。方法:运用双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术分析bioA对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下早期活化抗原CD69表达的影响;运用羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE)标记技术结合流式细胞术,分析T淋巴细胞增殖相关指数;用碘化丙锭(propidium iodide,PI)染色分析T淋巴细胞细胞周期变化。结果:终浓度为25、50μmol/L的bioA对ConA刺激下的T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达具有明显的抑制作用(P<0.05),50μmol/L抑制达到峰值;CFDA-SE染色法显示,25、50μmol/L bioA对ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用具有显著的抑制作用(P<0.05);终浓度为5、25、50μmol/L的bioA能够使ConA刺激的T淋巴细胞滞留于G0/G1期,减少处于S期和G2/M期细胞数。结论:BioA对小鼠T淋巴细胞的活化增殖和周期具有明显的抑制作用。

关键词：鹰嘴豆芽素A T淋巴细胞早期活化细胞增殖细胞周期

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脂多糖诱发的同基因妊娠BALB/c和NOD/SCID小鼠早产模型

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第1期23卷 32-35页

作者：林羿刘兆宇狄静芳曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:研究脂多糖(LPS)诱发同基因妊娠BALB/c小鼠和非肥胖性糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠早产的机制。方法:在预先阻断或未阻断Toll样受体4(TLR4)的条件下采用LPS刺激,并比较各组BALB/c和NOD/SCID小鼠的早产率和胚胎死亡率。... 详细信息

目的:研究脂多糖(LPS)诱发同基因妊娠BALB/c小鼠和非肥胖性糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠早产的机制。方法:在预先阻断或未阻断Toll样受体4(TLR4)的条件下采用LPS刺激,并比较各组BALB/c和NOD/SCID小鼠的早产率和胚胎死亡率。由于预实验显示预期的早产均发生于孕16d,因此,实验中在早产发生之前处死小鼠,收集每只孕鼠的胎盘。采用流式细胞术检测胎盘CD45+细胞表面TLR4、CD80和细胞内TNF-α的表达率。结果:采用LPS可诱发BALB/c小鼠早产,而NOD/SCID小鼠则对LPS的诱导有抵抗。经LPS刺激后,TLR4的表达在BALB/c和NOD/SCID小鼠均无显著改变,但是两组小鼠CD45+CD80+细胞的百分率均升高。相反,LPS刺激后仅BALB/c小鼠CD45+TNF-α+细胞的百分率升高,而NOD/SCID小鼠则否。通过预先阻断TLR4的表达可消除LPS对BALB/c小鼠CD80和TNF-α表达的影响,并显著降低LPS诱发的早产率。结论:虽然LPS未能改变TLR4的表达,但是二者相互作用,可激发CD45+CD80+细胞的动员,导致炎性细胞因子产生增多,并最终导致早产。BALB/c和NOD/SCID小鼠对LPS刺激的敏感性存在差异,提示NOD/SCID小鼠缺乏功能正常的T细胞和NK细胞,可能是这种小鼠对LPS诱发的早产有抵抗的原因之一。

关键词：免疫缺陷妊娠耐受早产啮齿动物模型

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红车轴草提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第6期28卷 537-540,545页

作者：杨志曾耀英黄秀艳滕菲李林宋兵姚满林暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:探讨红车轴草提取物(Trifoliumpratense Leguminosaeextract,TLE)对小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖的影响。方法:MTT比色法检测TLE对细胞的毒副作用及增殖抑制情况;双色荧光抗体染色结合流式细胞术分析TLE对小鼠T淋巴细胞在多克隆... 详细信息

目的:探讨红车轴草提取物(Trifoliumpratense Leguminosaeextract,TLE)对小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖的影响。方法:MTT比色法检测TLE对细胞的毒副作用及增殖抑制情况;双色荧光抗体染色结合流式细胞术分析TLE对小鼠T淋巴细胞在多克隆刺激剂(ConA)刺激下体外活化抗原CD69表达的影响;羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE)标记技术结合流式细胞术,分析CD3+T淋巴细胞增殖相关指数。结果:TLE对小鼠淋巴结来源的淋巴细胞微毒副作用;终质量浓度为10、20、30、40 mg/L的TLE对ConA刺激下的T淋巴细胞体外活化抗原CD69表达具有明显的抑制作用(P<0.01),40 mg/L抑制达到峰值;MTT法和CFDA-SE染色法都显示,10、20、30、40 mg/LTLE对ConA诱导的T淋巴细胞增殖具有显著的抑制作用(P<0.01)。结论:TLE对小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖具有明显的抑制作用。

关键词：红车轴草提取物 T淋巴细胞活化增殖

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细胞外信号调节激酶1/2的阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞增殖的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第2期23卷 102-105页

作者：滕振平邢飞跃王通李莉平暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的特异性阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞体外增殖的影响。方法分离小鼠淋巴结细胞,藉羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,用多克隆刺激剂刀豆A蛋白(ConA)或者佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺... 详细信息

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路的特异性阻断剂PD98059对小鼠淋巴细胞体外增殖的影响。方法分离小鼠淋巴结细胞,藉羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,用多克隆刺激剂刀豆A蛋白(ConA)或者佛波醇酯(PDB)加离子霉素(Ion)刺激,以流式细胞术分析PD98059对淋巴细胞增殖的影响;利用碘化丙锭(PI)染色分析PD98059对细胞周期的影响。结果CFDA-SE染色分析显示,当浓度为5、10、20、30、40μmol/L时,PD98059对ConA诱导的淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用,并呈现明显的剂量依赖关系(r=0.985,P<0.01)。选择最佳浓度30μmol/L的PD98059,观察其对不同时间淋巴细胞增殖的影响,结果发现,随着时间的延长,PD98059对淋巴细胞增殖的抑制作用明显降低(P<0.01),但抑制率随时间的延长而明显升高。细胞周期分析进一步表明,PD98059可阻止ConA刺激的淋巴细胞进入S期和G2/M期,而亚二倍体峰变化并不明显。PD98059对PDB+Ion刺激的淋巴细胞细胞周期的影响与ConA刺激相似,不同的是S期和G2/M期的变化较ConA的作用更明显。结论PD98059对小鼠淋巴细胞的增殖有明显地抑制作用,并可阻止其进入S期和G2/M期,提示ERK1/2信号通路的活化在淋巴细胞增殖中起重要作用。

关键词：细胞外信号调节激酶1/2 淋巴细胞增殖细胞周期

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CD4^+、CD8^+、CD25^+、CD69^+淋巴细胞在种间、同种胚胎植入期母体及同期假孕小鼠淋巴结中的差异

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中国免疫学杂志 2007年第8期23卷 714-720页

作者：王希朝曾耀英刑飞跃肇静娴狄静芳冯铮曾山暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

目的:研究种间胚胎植入期母体淋巴结中表达CD4+、CD8+、CD25+、CD69+T细胞的百分比变化,并探讨这种变化对种间胚胎植入的影响。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测种间、同种胚胎移植以及同时期假孕母体淋巴结中表达... 详细信息

目的:研究种间胚胎植入期母体淋巴结中表达CD4+、CD8+、CD25+、CD69+T细胞的百分比变化,并探讨这种变化对种间胚胎植入的影响。方法:利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测种间、同种胚胎移植以及同时期假孕母体淋巴结中表达CD4+、CD8+、CD25+、CD69+的T淋巴细胞对应CD3+细胞的百分率。结果:与同种胚胎移植后的植入相比,种间胚胎移植后植入期母体淋巴结中,CD3+CD4+、CD3+CD25+淋巴细胞占CD3+淋巴细胞的比例均极显著低于同种胚胎移植的植入期受体(P<0.01);而CD3+CD8+淋巴细胞占CD3+淋巴细胞的比例显著低于同种胚胎移植的植入期受体(P<0.05);CD3+CD69+淋巴细胞在种间、同种胚胎植入期母体淋巴结中的比例却无显著差异(P>0.05)。种间胚胎植入时母体淋巴结中CD4+/CD8+的比例,与同种胚胎植入受体和假孕小鼠相比,三者之间均无统计学意义上的显著差异(P>0.05)。结论:种间胚胎移植后从植入期开始,母体淋巴结中的淋巴细胞就发生了不利于胚胎植入的全身免疫反应。

关键词：大鼠小鼠种间妊娠胚胎植入流式细胞术

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融合基因FADDdel-GFP修饰在胰岛细胞自杀效应中的作用

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免疫学杂志 2007年第3期23卷 270-273页

作者：胡萍李君武叶嗣颖季煜华李小兰韦静暨南大学医学院微生物学和免疫学教研室暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的研究FADDdel-GFP在Fas/FasL介导的胰岛细胞自杀效应中的作用。方法采用DNA转染技术将重组体pFADDdel-GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞);采用FACS检测细胞因子诱导后NIT细胞的Fas和FasL表达情况及细胞自杀效应;采用active c... 详细信息

目的研究FADDdel-GFP在Fas/FasL介导的胰岛细胞自杀效应中的作用。方法采用DNA转染技术将重组体pFADDdel-GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞);采用FACS检测细胞因子诱导后NIT细胞的Fas和FasL表达情况及细胞自杀效应;采用active caspase3检测试剂盒检测细胞因子作用前后NIT细胞的caspase-3活性变化。结果NIT细胞表面无Fas和FasL表达,细胞因子可促其表达增加;细胞因子作用后,FADDdel-GFP修饰的NIT细胞的细胞损伤百分率和细胞内caspase3活性明显低于对照组。结论FADDdel-GFP修饰的NIT细胞具有一定的抵抗Fas/FasL途径介导细胞自杀效应的能力。

关键词： Fas相关死亡结构域 Fas FasL 细胞因子

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前房相关免疫偏离对碱烧伤眼角膜移植的影响

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眼科研究 2007年第1期25卷 1-4页

作者：李明顺李志杰北京医院眼科北京100730 暨南大学组织移植与免疫中心广州510630

目的观察诱导供体特异性的前房相关免疫偏离(ACAID)是否有助于角膜植片在碱烧伤高危眼中的存活。方法用1mol/L的NaOH烧灼新西兰白兔单眼角膜中央建立高危眼模型,然后将动物随机分为诱导组和对照组,1个月后进行角膜移植。诱导组在角膜移... 详细信息

目的观察诱导供体特异性的前房相关免疫偏离(ACAID)是否有助于角膜植片在碱烧伤高危眼中的存活。方法用1mol/L的NaOH烧灼新西兰白兔单眼角膜中央建立高危眼模型,然后将动物随机分为诱导组和对照组,1个月后进行角膜移植。诱导组在角膜移植前10d前房植入供体肌肉诱导供体特异性ACAID,对照组未处理。观察诱导组与对照组相比角膜植片存活时间是否延长。结果与对照组相比,诱导ACAID组角膜植片平均存活时间延长,两组植片存活率的差异具有显著统计学意义。结论诱导供体特异性ACAID有助于碱烧伤高危眼角膜植片的存活。

关键词：肌肉前房相关免疫偏离角膜移植碱烧伤排斥反应

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寡肽VLPALPQ对小鼠妊娠耐受的免疫调节作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第10期27卷 878-882页

作者：林羿仲艳敏 Nisar Khan 刘兆宇狄静芳曾山 Robbert Benner 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 荷兰鹿特丹Erasmus医学中心

目的观察hCG来源的寡肽缬-亮-脯-丙-亮-脯-谷胺(Val-Leu-Pro-Ala-Leu-Pro-Gln,VL- PALPQ)对双链RNA(dsRNA)诱导建立的小鼠流产模型妊娠结局的影响,并通过对淋巴细胞亚群及细胞内IL-12水平的分析研究其免疫调节机制。方法在BALB/c×c... 详细信息

目的观察hCG来源的寡肽缬-亮-脯-丙-亮-脯-谷胺(Val-Leu-Pro-Ala-Leu-Pro-Gln,VL- PALPQ)对双链RNA(dsRNA)诱导建立的小鼠流产模型妊娠结局的影响,并通过对淋巴细胞亚群及细胞内IL-12水平的分析研究其免疫调节机制。方法在BALB/c×c57BL/6小鼠孕7.5 d注射dsRNA以建立诱发性流产模型,孕期多次腹腔注射VLPALPQ进行干预,对照组以PBS代替。分别计算孕9 d和13 d胚胎吸收率,并用4色流式细胞术分析外周血和胎盘中多种淋巴细胞亚群及CD45+细胞内IL-12的变化。结果VLPALPQ处理组孕9 d时胚胎吸收率较诱发性流产组有明显下降(P<0.05),孕13 d时下降更为显著(P<0.01)。与此相应,外周血和胎盘中CD45+细胞内IL-12的表达均显著下降(P< 0.01),胎盘中活化型淋巴细胞比率也显著下降。另外,孕13 d时共刺激因子CD86的表达也明显减少。结论VLPALPQ可通过抑制免疫细胞的活性,减弱IL-12的表达,阻断dsRNA所引起的TH1型免疫反应的增强,从而降低小鼠的流产率。

关键词：动物模型免疫耐受免疫调节诱发性流产妊娠

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ERK1/2信号通路在Jurkat T细胞增殖调控中的作用

ERK1/2信号通路在Jurkat T细胞增殖调控中的作用

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遗传学进步与人口健康高峰论坛

作者：邢飞跃滕振平 Christian Bronner 方志远郭中峰于哲陈笛陈玲王炯坤潘山郝文婷李玉婷樊振华刘娜陈国良陈振珵龙宇天毛成全暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale/Universite Louis Pasteur Strasbourg France 67404 暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学组织移植与免疫中心

为探讨 ERK1/2信号通路在 Jurkat T 细胞增殖调控中的作用,采用共聚焦显微镜和 MTT 法检测不同浓度 PD98059 对 Jurkat T 细胞集落形成和增殖指数的影响,PI 染色结合流式细胞术分析不同浓度 PD98059对 Jurkat T 细胞细胞周期的影响．利... 详细信息

为探讨 ERK1/2信号通路在 Jurkat T 细胞增殖调控中的作用,采用共聚焦显微镜和 MTT 法检测不同浓度 PD98059 对 Jurkat T 细胞集落形成和增殖指数的影响,PI 染色结合流式细胞术分析不同浓度 PD98059对 Jurkat T 细胞细胞周期的影响．利用不同浓度、不同信号通路特异性阻断剂 LY294002、AG490、GF109203X 和 Genistein 以及 LY294002联合 ACA90 处理 Jurkat T 细胞,观察它们对 Jurkat T 细胞集落形成和增殖指数的影响．选用最佳浓度 PD98059、LY294002、AG490、 GF109203X 和 Genistein,通过 Western Blot 检测它们对 Jurkat T 细胞中 ERK1/2、P-ERK1/2和反向 CCAAT 盒结合蛋白

关键词：细胞增殖调控信号通路 Jurkat T ERK1/2

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