检索结果-内蒙古大学图书馆

现代免疫学 2007年第1期27卷 81-84页

作者：于哲邢飞跃曾耀英广州暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广州510632

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也能促进Th2分化;ERK1/2则能诱导CD4+T细胞向Th2分化。

关键词： JNK p38 ERK Th1 Th2 分化

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小鼠NKT细胞体外扩增的初步研究

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哈尔滨医科大学学报 2007年第6期41卷 541-543页

作者：郭蓉姣黄秀艳梁兆端曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术... 详细信息

目的探索小鼠脾脏NKT细胞的分离、纯化及体外培养扩增的方法。方法分离小鼠脾细胞,制成单细胞悬液,α-半乳糖神经鞘胺醇(α-galactosylceramide,α-Galcer)和rhIL-2作用下刺激其活化增殖,不同时间点取样,利用双色免疫荧光抗体标记技术和流式细胞术(FACS)检测NKT细胞纯度,并用MTT法检测其对靶细胞K562的杀伤活性。结果脾NKT细胞在第0、4、8、12天计数细胞总数为0.5×107、(1.3±0.1)×107、(1.9±0.2)×107和(2.2±0.2)×107,第0、4、8、12天纯度分别为(6.27±1.04)%、(8.54±1.58)%、(10.65±1.95)%和(21.36±4.34)%;α-Gal-cer和rhIL-2作用下,纯化的NKT细胞较脾新鲜分离的单个核细胞对靶细胞K562的杀伤作用强。在效靶比20∶1时,培养时间为4、8,12天的NKT细胞杀伤率分别为52.7%、71.2%和85.7%,明显高于脾MNC33.8%(P<0.05)。结论在α-Galcer和rhIL-2作用下,小鼠NKT细胞得到扩增,细胞纯度约为22%。在效靶比20∶1时,NKT细胞对K562细胞杀伤率约为86%。

关键词： NKT细胞 α-Galcer IL-2

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健康青年人HCMV特异性CD8^+T细胞频率和表型分析

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免疫学杂志 2007年第3期23卷 260-264,269页

作者：查庆兵徐丽慧刘芳孙荭贾仟涛李丰耀何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心暨南大学生物工程研究所暨南大学附属第一医院临床实验中心广州510632

目的利用负载pp65495-503抗原肽的HLA-A*0201四聚体染色结合流式细胞术,分析HLA-A2+健康青年供者外周血中HCMV pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞的频率和表型。方法以优化的四聚体染色方法对22例中国青年供者全血进行染色,用流式细胞仪... 详细信息

目的利用负载pp65495-503抗原肽的HLA-A*0201四聚体染色结合流式细胞术,分析HLA-A2+健康青年供者外周血中HCMV pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞的频率和表型。方法以优化的四聚体染色方法对22例中国青年供者全血进行染色,用流式细胞仪对样品进行三色荧光分析。结果健康中国青年人外周血中存在高频率的pp65495-503特异性CD8+T细胞,占CD8+T细胞的百分率为0.14~6.84%(均数2.45%);表型分析显示其CD28+细胞占四聚体阳性和四聚体阴性细胞的百分率分别为为32.5%(±21.7%)和58.58%(±10.4%)(P<0.001);CD57+细胞占四聚体阳性和四聚体阴性细胞的百分率分别为55.8%(±18.4%)和27.4%(±8.3%)(P<0.001)。同时,对三例健康青年人CD8+T细胞上多种表面分子的详细分析显示,pp65495-503特异性记忆CD8+T细胞有不同比率的细胞表达CD62L、CD45RO、CD38和CD27,而且还有一定比例的细胞表达CD45RA,但不表达活化抗原CD69分子。结论青年中国人外周血中存在高频率的HCMV特异性CD8+T细胞,这些细胞的表型存在高度异质性,可能是处于不同分化阶段的记忆和效应细胞群体组成。

关键词：四聚体技术人巨细胞病毒记忆型CD8^+T细胞流式细胞术

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HLA-A^＊2402-BSP在大肠杆菌中的优化表达及其四聚体的制备和鉴定

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生物工程学报 2007年第2期23卷 284-291页

作者：贾仟涛徐丽慧李丰耀查庆兵何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632 暨南大学附属第一医院临床实验中心广州510632

HLA-A*2402是中国人群中最常见的等位基因之一,为研究该基因型人群的人巨细胞病毒(HCMV)特异性细胞毒T细胞(CTL)免疫应答,需要制备负载相应抗原肽的HLA-A*2402四聚体。以RT-PCR方法克隆HLA-A*2402重链基因的cDNA,并构建了羧基端融合生... 详细信息

HLA-A*2402是中国人群中最常见的等位基因之一,为研究该基因型人群的人巨细胞病毒(HCMV)特异性细胞毒T细胞(CTL)免疫应答,需要制备负载相应抗原肽的HLA-A*2402四聚体。以RT-PCR方法克隆HLA-A*2402重链基因的cDNA,并构建了羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白(HLA-A*2402-BSP)的表达载体,但该载体不能在大肠杆菌(***)中有效表达HLA-A*2402-BSP融合蛋白;通过对氨基端(N端)区域编码区的密码子进行优化,构建了同义突变的HLA-A*2402-BSP表达载体,融合蛋白在***中获得了高效表达。进而制备了负载HLA-A*2402限制性HCMVpp65341-349抗原肽(QYDPVAALF,QYD)的可溶性HLA-A*2402-QYD单体分子和四聚体,获得的四聚体具有与HLA-A24+供者抗原特异性CTL的结合活性,特异性CTL的频率为总CD8+T细胞的0·09%～0·37%。这些结果为进一步研究HLA-A*2402限制性的特异性CTL免疫应答规律奠定基础。

关键词：四聚体 HLA-A^＊2402 巨细胞病毒密码子优化原核表达包涵体

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人表皮组织蛋白质组双向电泳技术的建立

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2007年第6期28卷 581-584页

作者：聂燕芳曾耀英刘钧澄吴晓萍暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 中山大学附属第一医院小儿外科广东广州510080

目的：建立和优化人表皮组织蛋白质组双向电泳技术，为后续的皮肤蛋白质组学研究奠定基础。方法：组织匀浆法制备表皮组织总蛋白，采用固相pH梯度胶条进行双向电泳，凝胶银染后用PDQuest7．4软件对电泳图谱进行分析。结果：人表皮组织... 详细信息

目的：建立和优化人表皮组织蛋白质组双向电泳技术，为后续的皮肤蛋白质组学研究奠定基础。方法：组织匀浆法制备表皮组织总蛋白，采用固相pH梯度胶条进行双向电泳，凝胶银染后用PDQuest7．4软件对电泳图谱进行分析。结果：人表皮组织蛋白质组在7cm pH5～8 IPG胶条的最佳上样量为200μg，平均蛋白斑点数为414±19，平均匹配斑点数为346±31，匹配率达83．6％。结论：通过优化双向电泳条件，获得了分辨率高、重复性好的人表皮组织蛋白质组双向电泳图谱。

关键词：表皮组织双向电泳蛋白质组

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HLA-A*0203-BSP的表达和复性及其四聚体的鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第2期23卷 97-101页

作者：贾仟涛徐丽慧查庆兵李丰耀何贤辉曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的优化诱导条件大批量表达生物素化酶BirA底物肽(BSP)与HLA-A0203重链胞外域的融合蛋白(HLA-A0203-BSP),并制备负载HLA-A0203限制性EB病毒抗原肽EBNA3596-604的四聚体(HLA-A0203/SVR)。方法以HLA-A0203-BSP原核表达载体转化***21(DE3)菌株,优化诱导条件进行大批量重组蛋白的表达。通过稀释法复性可溶性HLA-A0203/SVR单体,然后以BirA对其进行生物素化,并以阴离子交换树脂纯化。将纯化的HLA-A0203/SVR单体与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成四聚体,通过对特异性CTL进行染色验证其结合活性。结果当IPTG的浓度为0.4mmol/L,于37℃诱导过夜后,融合蛋白的表达最多。该重组蛋白相对分子质量(Mr)为34000,与HLA-A0203-BSP的理论Mr相一致。该重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀部分,约占菌体总蛋白的30%。负载抗原肽的可溶性HLA-A0203/SVR单体是在同时存在HLA-A0203-BSP、β2微球蛋白及HLA-A0203限制性抗原肽SVR的情况下通过稀释法复性而获得。该单体生物素化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合后即形成四聚体。流式细胞术(FCM)分析证实,该四聚体具有与HLA-A2+供者特异性CTL结合的活性。结论HLA-A0203-BSP融合蛋白在优化条件下获得高效表达。以此蛋白制备的HLA-A0203/SVR四聚体具有与HLA-A2+供者特异性CTL结合的活性,为研究HLA-A0203个体EB病毒特异性CTL的免疫应答打下了基础。

关键词： HLA—A＊0203 EB病毒四聚体原核表达融合蛋白包涵体

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IDO修饰的成纤维细胞培养上清对小鼠T淋巴细胞增殖的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1122-1125页

作者：罗璐曾耀英王箴王青赵莉杨冬梓中山大学附属第二医院妇产科广东广州510120 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 深圳市南山区蛇口人民医院广东深圳518067

目的:检测吲哚胺2-3双加氧酶(IDO)基因修饰的细胞对T淋巴细胞的免疫抑制作用。方法:将pEGFP-Nl-mIDO真核表达载体转染至小鼠NIH3T3成纤维细胞系。体外检测mIDO修饰的成纤维细胞培养液中色氨酸水平的变化;使用CFSE标记技术,检测mIDO修饰... 详细信息

目的:检测吲哚胺2-3双加氧酶(IDO)基因修饰的细胞对T淋巴细胞的免疫抑制作用。方法:将pEGFP-Nl-mIDO真核表达载体转染至小鼠NIH3T3成纤维细胞系。体外检测mIDO修饰的成纤维细胞培养液中色氨酸水平的变化;使用CFSE标记技术,检测mIDO修饰的成纤维细胞培养液对ConA刺激的小鼠T淋巴细胞增殖的影响。结果:将pEGFP-NI-mIDO转入NIH3T3成纤维细胞,流式细胞术(FCM)检测到EGFP的表达;体外实验表明,成纤维细胞培养上清和转染pEGFP-N1的成纤维细胞培养上清可检测到一定量的色氨酸水平,而转染pEGFP-N1-mIDO的成纤维细胞培养上清未检测到色氨酸,提示pEGFP-NI-mIDO转染的成纤维细胞表达了具有活性的mIDO;使用CFSE标记技术,检测mIDO修饰的成纤维细胞培养上清对小鼠T淋巴细胞增殖的影响,发现ConA刺激的IDO组,72h后亲代细胞占各代细胞的百分率明显高于对照组。结论:IDO基因修饰的成纤维细胞可抑制T淋巴细胞的增殖。

关键词： IDO基因 T细胞增殖免疫抑制 CFSE

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氧化苦参碱对淋巴细胞增殖和调节性T细胞(Tr)数量的影响

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中国病理生理杂志 2007年第7期23卷 1368-1372页

作者：伍斌曾耀英蔡小嫦施军丛林王通曾祥凤中南大学湘雅一医院皮肤科湖南长沙410008 暨南大学组织移植和免疫中心教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学附属第一医院皮肤科广东广州510632

目的:分析氧化苦参碱(OMT)对小鼠外周血调节性T细胞(Tr细胞)数量及其对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学机制。方法:建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,腹腔注射(ip)不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HC... 详细信息

目的:分析氧化苦参碱(OMT)对小鼠外周血调节性T细胞(Tr细胞)数量及其对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT治疗ACD的免疫学机制。方法:建立DNFB诱发的小鼠ACD模型,腹腔注射(ip)不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT),在实验的第1d、7d、14d、21d、28d小鼠尾静脉采血,应用抗-CD3、抗-CD4、抗-CD25单抗进行免疫荧光标记,流式细胞术检测各组CD4+CD25+T细胞数量。利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色,流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响。结果:500、125和31mg/LOMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而16、8、4、2mg/LOMT可促进小鼠淋巴结T细胞增殖,但剂量依赖关系不明显。腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量,与HCT组、PBS组比较(P<0.01)。结论:OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈双向作用;腹腔注射OMT能明显提高小鼠外周血中CD4+CD25+T细胞数量;提示:OMT是一种双向免疫调节剂。

关键词：苦参碱 T淋巴细胞

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通痹灵总生物碱抑制关节破坏的细胞免疫作用机制

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第6期23卷 527-530页

作者：陈光星童娟刘清平沈晓燕赵诗哲曾耀英陈纪藩广州中医药大学第一附属医院六内科风湿专科广东广州510405 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心广东广州510632

目的:证实通痹灵总生物碱抑制胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症和关节破坏的药效,揭示其调节细胞免疫的作用机制。方法:牛II型胶原混合弗氏不完全佐剂于SPF级Wistar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组,甲氨蝶呤(MTX)治疗... 详细信息

目的:证实通痹灵总生物碱抑制胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症和关节破坏的药效,揭示其调节细胞免疫的作用机制。方法:牛II型胶原混合弗氏不完全佐剂于SPF级Wistar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组,甲氨蝶呤(MTX)治疗组和通痹灵总生物碱(以马钱子碱和士的宁为主的生物碱,TBL总碱)治疗组,容积法评价后肢肿胀度;给药后35d,乳腺钼靶机大鼠全身摄片,计分法评价各组大鼠X光片四肢96块骨侵蚀和100个关节间隙变化;处死动物,取左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(HE)染色,评价中性粒、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜细胞增生的情况;MTT法检测TBL总碱对Jurkat细胞增殖的影响;Western blot检测TBL总碱对Jurkat细胞ERK1/2磷酸化的影响。结果:造模成功后,MTX和TBL总碱给药35d都可明显抑制大鼠关节肿胀和关节破坏,与造模加生理盐水组有统计学差异(P<0.01);TBL总碱可明显抑制CIA淋巴细胞、浆细胞的浸润和滑膜增生(P<0.05),MTX可抑制滑膜增生。TBL总碱可显著抑制T细胞增殖以及ERK1/2的磷酸化。结论:TBL总碱具有抑制关节免疫炎症和关节破坏的作用,其机制可能是通过干预T细胞MAPK信号转导,抑制T细胞的活化和增殖来实现的,为TBL总碱治疗RA提供了实验依据。

关键词：胶原诱导型关节炎关节破坏通痹灵总碱 T淋巴细胞细胞信号转导

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人工合成相关寡肽抑制poly I:C诱发性流产的作用

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现代免疫学 2007年第2期27卷 145-150页

作者：仲艳敏林羿李莉平 Nisar Khan 狄静芳曾山 Robbert Benner 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州市第一人民医院妇产科广州510680 荷兰鹿特丹Erasmus医学中心

探讨寡肽蛋-苏-精-缬(MTRV)是否具有抗多聚次黄苷酸-胞苷酸(poly I:C)诱发的小鼠胚胎吸收的作用及其免疫机制。给予异基因妊娠BALB/c×C57BL/6小鼠腹腔注射poly I:C建立胚胎吸收模型;在孕期多个时点腹腔注射MTRV,观察其对胚胎吸收... 详细信息

探讨寡肽蛋-苏-精-缬(MTRV)是否具有抗多聚次黄苷酸-胞苷酸(poly I:C)诱发的小鼠胚胎吸收的作用及其免疫机制。给予异基因妊娠BALB/c×C57BL/6小鼠腹腔注射poly I:C建立胚胎吸收模型;在孕期多个时点腹腔注射MTRV,观察其对胚胎吸收率的影响,并采用四色流式细胞术检测妊娠9.5 d和13.5 d外周血和胎盘各种免疫活性细胞的百分率。结果显示,寡肽MTRV不能显著改变poly I:C所引起的小鼠胎盘多种免疫活性细胞相对数量的增多,但是对poly I:C增高CD45+IL-12+细胞百分率的作用具有显著抑制,并能显著降低poly I:C所引起的孕13.5d胚胎吸收率的增高。寡肽MTRV可调节母-胎界面局部免疫活性细胞的功能状态,从而抑制poly I:C诱发的小鼠胚胎吸收。

关键词：流产免疫调节免疫耐受母-胎界面

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