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作者：邢飞跃潘山郝文婷李玉婷樊振华刘娜陈国良陈振珵龙宇天毛成全滕振平 Christian Bronner 方志远郭中峰于哲陈笛陈玲王炯坤暨南大学组织移植与免疫中心，广州 510632 Institut National de la Sante et de la 暨南大学组织移植与免疫中心，广州 510632 Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale/Universite Louis Pasteur，Strasbourg，France 67404 暨南大学组织移植与免疫中心，广州 510632

探讨ERK1/2信号通路在Jurkat T细胞增殖调控中的作用。采用共聚焦显微镜和MTT法检测不同浓度PD98059对Jurkat T细胞集落形成和增殖指数的影响，PI染色结合流式细胞术分析不同浓度PD98059对Jurkat T细胞细胞周期的影响。利用不同浓... 详细信息

探讨ERK1/2信号通路在Jurkat T细胞增殖调控中的作用。采用共聚焦显微镜和MTT法检测不同浓度PD98059对Jurkat T细胞集落形成和增殖指数的影响，PI染色结合流式细胞术分析不同浓度PD98059对Jurkat T细胞细胞周期的影响。利用不同浓度、不同信号通路特异性阻断剂LY294002、AG490、GF109203X和Genistein以及LY294002联合AG490处理Jurkat T细胞，观察它们对Jurkat T细胞集落形成和增殖指数的影响。选用最佳浓度PD98059、LY294002、AG490、GF109203X和Genistein，通过Western Blot检测它们对Jurkat T细胞中ERK1/2、P-ERK1/2和反向CCAAT盒结合蛋白(ICBP90)不同时间表达的影响。结果显示，PD98059可显著抑制Jurkat T细胞的增殖，呈剂量依赖关系。PD98059可使Jurkat T细胞停滞于G1/G0期，并阻止其进入S期和G2/M期。不同浓度各阻断剂对Jurkat T细胞的集落形成和增殖指数也具有不同的抑制作用，且呈剂量依赖关系。PD98059作用3 h可部分下调ERK1/2的表达，而其它阻断剂对ERK1/2的表达均无影响。PD98059、LY294002作用3 h可明显下调P-ERK1/2的表达，LY294002+AG490、AG490、GF109203X和Genistein也可使P-ERK1/2的表达不同程度下调，各阻断剂作用3 h均能上调Jurkat T细胞中ICBP90蛋白的表达，并以PD98059最为突出;而在24 h这种上调作用更为明显。这些结果提示阻断ERK1/2信号通路可显著抑制Jurkat T细胞的增殖，这种抑制作用与其使Jurkat T细胞停滞于G1/G0期，阻止细胞进入S期和G2/M期有关;PI-3K、TPK、PKC和JAK信号通路可能与ERK1/2信号通路上游关联，ERK1/2信号通路的下游可能通过ICBP90所介导。

关键词： ERK1/2 细胞增殖调控细胞周期共聚焦显微镜信号通路

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早、中、晚孕期胎盘因子对人外周血淋巴细胞CD4、CCR5和CXCR4表达的影响

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免疫学杂志 2007年第4期23卷 409-412页

作者：李莉平林羿康佳丽夏薇王自能广州市第一人民医院妇产科广州510180 暨南大学组织移植与免疫国家重点实验室广州510632 暨南大学第一临床医学院妇产科教研室广州510632

目的通过研究早、中、晚孕期胎盘因子(PF)对人外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4、CCR5和CXCR4表达的作用,探讨PF在人免疫缺陷病-毒1(HIV-1)垂直传播中的作用及其机理。方法制备早、中、晚孕期PF。分离人外周血单个核细胞,并分别与相对浓度为25... 详细信息

目的通过研究早、中、晚孕期胎盘因子(PF)对人外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4、CCR5和CXCR4表达的作用,探讨PF在人免疫缺陷病-毒1(HIV-1)垂直传播中的作用及其机理。方法制备早、中、晚孕期PF。分离人外周血单个核细胞,并分别与相对浓度为25%的早、中、晚孕期PF作用,培养24 h后收集细胞,荧光抗体标记,流式细胞术检测外周血淋巴细胞(PBLs)中CD4、CCR5和CXCR4表达,以及CD4+T细胞中CCR5+细胞、CXCR4+细胞、CCR5+CXCR4+细胞所占的百分率。结果各孕期PF均可显著降低PBLs中CCR5的表达,其中早孕期PF的作用明显强于中、晚孕期PF的作用;各孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+细胞的百分率均显著低于对照组,早孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+细胞的百分率明显低于中、晚孕期PF组;各孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+CXCR4+细胞的百分率均显著低于对照组,早孕期PF组CD4+T细胞中CCR5+CX-CR4+细胞的百分率显著低于晚孕期PF组。结论各孕期PF均可显著降低PBLs中CCR5的表达,以及CD4+T细胞中CCR5+细胞和CCR5+CXCR4+细胞的百分率,早孕期PF作用最强,中、晚孕期PF效应相当,PF可能通过抑制R5病毒的入胞而具有抗R5病毒的作用,并可能在阻断HIV-1宫内感染中具有重要作用。

关键词：胎盘因子 HIV-1 垂直传播 CD4 CCR5 CXCR4

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非孕与早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织自然杀伤细胞亚群的变化

非孕与早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织自然杀伤细胞亚群的变化

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第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会

作者：侯倩曾耀英王自能江西省妇幼保健院辅助生殖中心暨南大学组织移植与免疫中心

目的:探讨非孕与早孕妇女的外周血、宫内膜和蜕膜组织之间的自然杀伤（NK）细胞亚群的差异,以及雌、孕激素对外周血、宫内膜和蜕膜组织 NK 细胞的影响。方法:用流式细胞仪检测非孕和早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织 NK 细胞表面标记 C... 详细信息

目的:探讨非孕与早孕妇女的外周血、宫内膜和蜕膜组织之间的自然杀伤（NK）细胞亚群的差异,以及雌、孕激素对外周血、宫内膜和蜕膜组织 NK 细胞的影响。方法:用流式细胞仪检测非孕和早孕妇女外周血、宫内膜和蜕膜组织 NK 细胞表面标记 CD56和 CD16分子,以及用放射免疫沉淀法测定外周血清雌二醇（E）和孕酮（P）水平,并进行比较分析。结果:早孕外周血组 NK 细胞的 CD56CD16、CD56CD16和 CD56CD16三组亚群的百分率均明显高于非孕外周血组（分别为 P≤0.013,P<0.001,P≤0.001）;非孕宫内膜组的 NK 细胞以 CD56为主,为20.82%,且其 CD56CD16的百分率明显高于其外周血组,而其 CD56CD16的百分率明显小于外周血组（P<0.001）,二组的 CD56CD16的百分率无差异（P>0.05）;非孕宫内膜组 CD56CD16的百分率明显高于 CD56CD16和 CD56CD16（均为 P<0.001）,而非孕外周血组的 NK 细胞以 CD16为主, 且其 CD56CD16的百分率明显高于 CD56CD16和 CD56CD16（均为 P<0.001）。早孕蜕膜组的 NK 细胞以 CD56为优势,为62.42%;早孕蜕膜组 NK 细胞的 CD56CD16、CD56CD16和 CD56CD16三组亚群的百分率均明显高于非孕宫内膜组（均为 P<0.001）;而早孕周围血中的 NK 细胞以 CD56CD16和 CD16为主,分别为9.93%和10.65%,且与 CD56CD16比较均有显著性差异（均为 P<0.001）;早孕外周血组 CD16NK 细胞的百分率明显高于蜕膜组（P≤0.001）,且二组的 CD56CD16的百分率无差异（P>0.05）。结论:孕激素能明显促进宫内膜 CD56NK 细胞的增殖和分化,雌、孕激素水平的协同升高可增加外周血和宫内膜组织的 CD56、CD56CD16、和 CD16NK 细胞亚群的百分率;CD56CD16NK 细胞在在早孕外周血和蜕膜组织之间,以及在非孕外周血和宫内膜组织之间均可能起免疫调控作用。

关键词：宫内膜蜕膜外周血自然杀伤细胞雌激素孕酮

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从孕妇外周血分离胎儿细胞及胎儿游离的DNA作无创性产前遗传诊断的研究

从孕妇外周血分离胎儿细胞及胎儿游离的DNA作无创性产前遗传诊断...

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作者：黄艳仪曾耀英陈小蔓吴菁孙荭孔舒孙筱放黎青葛琪冯铮陈小兵佘若菁广州市第二人民医院暨南大学组织移植与免疫中心

第一部分研究成果主要归纳三点：①建立了从孕妇外周血中分离胎儿细胞的细胞分离技术，提高了从孕妇外周血中分离胎儿细胞的精确度；②成功的应用免疫磁珠细胞分离仪从孕妇外周血中富集胎儿细胞，该研究成果使孕妇外周血分离胎儿细胞技... 详细信息

标准号: 0701950159

第一部分研究成果主要归纳三点：①建立了从孕妇外周血中分离胎儿细胞的细胞分离技术，提高了从孕妇外周血中分离胎儿细胞的精确度；②成功的应用免疫磁珠细胞分离仪从孕妇外周血中富集胎儿细胞，该研究成果使孕妇外周血分离胎儿细胞技术能更广泛的应用于临床，推动了无创性产前诊断方法的开展；③孕妇外周血中经磁珠分离的胎儿细胞进行遗传学诊断，应用于临床对患X-性连锁遗传病孕妇胎儿进行性别诊断。该研究成果处于全国先进水平，在全国率先应用磁珠分离仪从孕妇外周血富集胎儿细胞，并进行遗传产前诊断。(1)建立了孕妇外周血分离胎儿细胞的细胞的分离技术，提出应用转铁蛋白受体CD71阳性选择+糖蛋白A双抗抗体和CD45阴性选择(CD71++GPA+/CD45-)多参数细胞分离能提高从孕妇外周血分离胎儿细胞的精确度。(2)成功的应用免疫磁珠细胞分离仪从孕妇外周血分离胎儿细胞。(3)建立经磁珠分离的胎儿细胞荧光原位杂交(FISH)技术作染色体检查，并用于X-性连锁遗传病产前诊断。(4)成功的应用酚提取法提取孕妇血浆中胎儿游离DNA，应用巢式PCR技术确定男性胎儿SRY基因，并用此法对X-性连锁遗传病家庭史的患者进行产前诊断。(5)成功地应用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测母体血浆中的胎儿DNA，该研究证实SRY基因作为睾丸决定因子具有很高的特异性，并得出早、中、晚期不同孕周胎儿SRY基因DNA的量与总的DNA的量，该成果可用于无创性产前诊断开辟了新的途径。第二部分研究成果包括：1.证实母体血浆中存在胎儿DNA，且含量较高，其浓度随着孕周的增长而增加；2.荧光定量PCR用于检测母体血浆胎儿游离DNA均有较高的敏感性和特异性，而荧光定量PCR更具有优越性；3.该研究证实SRY基因作为睾丸决定因子具有很高的特异性，可用于产前胎儿性别诊断，并作为检测胎儿DNA的重要标志物。4.该研究成果成功的建立孕妇血浆中胎儿游离DNA的提取技术，应用先进的分子生物学技术、DNA的定性、荧光定量检测技术，通过孕妇血中胎儿SRY基因的检测，可对X-性连锁遗传病孕妇胎儿作出性别判断，应用于临床；5.应用孕妇血浆中的胎儿游离DNA进行产前诊断，为非侵入性产前遗传诊断开辟了新的途径，有非常广泛的应用前景和非常重要的临床意义。

关键词：产前遗传诊断孕妇外周血胎儿细胞分离染色体检查

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晚孕期胎盘因子对小鼠淋巴细胞增殖的影响

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现代免疫学 2007年第2期27卷 125-128页

作者：李莉平林羿康佳丽夏薇王自能广州市第一人民医院妇产科广州510180 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学第一临床医学院妇产科教研室广州510632

通过晚孕期胎盘因子(PF)对小鼠淋巴细胞体外增殖的作用,探讨PF对正常机体免疫系统和免疫功能的效应。分离小鼠淋巴细胞,用ConA刺激其增殖,并分别与晚孕期不同浓度的PF作用,于48 h和72 h用活体染料羧基荧光素乙酰乙琥珀酰亚胺酯(CFSE)标... 详细信息

通过晚孕期胎盘因子(PF)对小鼠淋巴细胞体外增殖的作用,探讨PF对正常机体免疫系统和免疫功能的效应。分离小鼠淋巴细胞,用ConA刺激其增殖,并分别与晚孕期不同浓度的PF作用,于48 h和72 h用活体染料羧基荧光素乙酰乙琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,流式细胞术检测增殖。于48 h碘化丙啶染色,流式细胞术检测细胞周期分布。结果显示,晚孕期PF在48 h和72 h时间点均能显著促进ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应,且效应与剂量呈正相关。晚孕期各浓度PF组G0期所占比率均显著低于对照组,且浓度越大,比率越低,组间两两比较有统计学意义。各浓度PF组S期所占比率均显著高于对照组,各浓度PF组G2/M期所占比率均显著高于对照组,25%PF组G2/M期所占比率均显著高于5%PF组和15%PF组。晚孕期PF通过促进小鼠淋巴细胞由G1期向S和G2/M期而促进ConA刺激小鼠淋巴细胞的增殖反应,提示PF具有免疫调节的功能,可以提高机体的免疫功能。

关键词：胎盘因子人免疫缺陷病毒 CFSE 淋巴细胞增殖细胞周期分布

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寡肽丙-谷胺-甘-缬抑制多聚次黄苷酸-胞苷酸所致流产的作用

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中华围产医学杂志 2007年第5期10卷 312-317页

作者：林羿仲艳敏王自能 Nisar Khan 李莉平 Robbert Benner 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 暨南大学第一临床学院妇产科荷兰鹿特丹Erasmus医学中心广州市第一人民医院妇产科

目的探讨人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，hCG）来源的寡肽丙-谷胺-甘-缬（Ala—Gln—Gly-Val，AQGV）是否具有抗poly I：C诱导的小鼠胚胎吸收的作用及其可能的免疫机制。方法给予异基因妊娠的BALB／c小鼠腹腔注... 详细信息

目的探讨人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，hCG）来源的寡肽丙-谷胺-甘-缬（Ala—Gln—Gly-Val，AQGV）是否具有抗poly I：C诱导的小鼠胚胎吸收的作用及其可能的免疫机制。方法给予异基因妊娠的BALB／c小鼠腹腔注射多聚次黄苷酸-胞苷酸（poly I：C）建立胚胎吸收模型，注射磷酸盐缓冲液组作为对照，观察孕期多次注射AQGV对胚胎吸收率的影响，并采用流式细胞术检测孕9．5d和13．5d胎盘和外周血中免疫活性细胞，包括T细胞、NK细胞、NKT细胞、B细胞和巨噬细胞等的百分率，以及早期活化标志CD25、共刺激分子CD86和细胞内细胞因子IL-12水平。结果孕9．5d时AQGV组胎盘中巨噬细胞和B细胞所占比率和CD45^＋细胞内IL-12水平显著低于流产模型组；孕13．5d时除上述变化外，AQGV组胎盘中T细胞所占比率显著低于流产模型组；孕9．5d时AQGV组外周血CD45^＋细胞内IL-12水平明显低于流产模型组；孕13．5d时外周血NK细胞、巨噬细胞、B细胞所占百分率和CD45^＋细胞内IL-12水平明显低于流产模型组。与此相应，AQGV组孕9．5d和13．5d胚胎吸收率也显著下降。结论 AQGV可降低胎盘局部和外周血免疫活性细胞的构成比和抑制免疫反应向Th1型转化，从而抑制poly I：C诱导的小鼠胚胎吸收。

关键词：流产,自然动物模型寡肽类免疫耐受

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脂质体介导pIDO-EGFP转染原代培养软骨细胞的初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第12期23卷 1110-1112,1116页

作者：段小红何贤辉崔鹏程王晓燕吴明明史剑波许庚江逊第四军医大学唐都医院耳鼻咽喉科陕西西安710038 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 第四军医大学口腔医学院陕西西安710036 中山大学附属第一医院耳鼻咽喉科医院广东广州510080 第四军医大学唐都医院小儿科陕西西安710038

目的:检测脂质体介导pIDO-EGFP转染原代培养的C57小鼠关节软骨细胞的瞬时表达及转染效率,建立原代培养的小鼠关节软骨细胞转染方法。方法:大肠杆菌中扩增pIDO-EGFP质粒,在最优化条件下通过lipofectamine2000TM转染试剂将pIDO-EGFP质粒... 详细信息

目的:检测脂质体介导pIDO-EGFP转染原代培养的C57小鼠关节软骨细胞的瞬时表达及转染效率,建立原代培养的小鼠关节软骨细胞转染方法。方法:大肠杆菌中扩增pIDO-EGFP质粒,在最优化条件下通过lipofectamine2000TM转染试剂将pIDO-EGFP质粒转入原代培养的小鼠关节软骨细胞,应用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察其转染过程及瞬时表达情况,流式细胞术检测其转染效率。结果:质粒携带的增强型绿色荧光蛋白在转染后24h得到了明显表达,48h后流式细胞术检测其转染效率为36.43%,未影响软骨细胞贴壁过程。结论:经绿色荧光蛋白检测表明,脂质体成功地将IDO基因转染进入原代培养的软骨细胞。转染后的软骨细胞在体外仍能存活,在最优化的条件下能达到良好的瞬时转染效率,为组织工程化软骨细胞基因导入和基因修饰提供了思路。

关键词：基因转染软骨细胞基因表达吲哚胺2 3-双加氧酶绿色荧光蛋白

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p38对放线菌酮经线粒体途径诱导HL-60细胞死亡的影响

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中华血液学杂志 2006年第6期27卷 398-402页

作者：梁佩燕曾耀英王通邢飞跃肇静娴江逊狄静芳暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632

目的研究 p38对放线菌酮(CHX)经线粒体途径诱导 HL-60细胞死亡的影响。方法利用 p38持异性阻断剂 SB203580(SB)阻断 HL-60细胞 p38途径,分别设对照组、单纯 SB 组、CHX组和 CHX 联合 SB 组;于处理6,9,12,18,24 h 利用碘化丙锭(PI)染色... 详细信息

目的研究 p38对放线菌酮(CHX)经线粒体途径诱导 HL-60细胞死亡的影响。方法利用 p38持异性阻断剂 SB203580(SB)阻断 HL-60细胞 p38途径,分别设对照组、单纯 SB 组、CHX组和 CHX 联合 SB 组;于处理6,9,12,18,24 h 利用碘化丙锭(PI)染色流式细胞术检测亚二倍体峰细胞比率;于处理6和18 h 进行膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)/PI 双标流式细胞术测定凋亡和坏死细胞比率;于处理18 h 利用 JC-1染色流式细胞术分析,通过对 FL2的划分比较不同处理时间高 JC-1集合体量细胞比率;测定细胞 JC-1集合体(FL2)和 JC-1单体(FL1)平均荧光强度,并计算线粒体膜电势(△Ψ_m,FL2/FL1)。结果在 CHX 处理6 h HL-60细胞亚二倍体峰细胞比率显著高于对照组,在此过程中阻断 p38途径则在处理9 h 开始亚二倍体峰细胞比率显著高于 CHX 组。处理18 h 凋亡细胞比率:CHX组[(27.9±0.52)%]和 CHX 联合 SB 组[(28.54±1.38)%]均显著高于对照组[(2.45±0.65)%](P<0.01);CHX 联合 SB 组与 CHX 组比较差异无统计学意义(P>0.05)。处理18 h 坏死细胞比率:CHX 组和 CHX 联合 SB 组均显著高于对照组(P<0.01);CHX 联合 SB 组显著高于 CHX 组(P<0.01)。此外,CHX 组和 CHX 联合 SB 组高 JC-1集合体细胞比率均显著低于对照组(P<0.01),CHX联合 SB 组高 JC-1集合体细胞比率显著低于 CHX 组(P<0.01)。处理18 h 时各实验组△Ψ_m CHX 组(0.17+0.01)和 CHX 联合 SB 组(0.05±0.003)均显著低于对照组(0.38±0.02)(P<0.01),CHX 联合 SB 组△Ψ_m 显著低于 CHX 组(P<0.01)。结论 CHX 可诱导 HL-60细胞凋亡和线粒体去极化,在该过程中阻断 p38途径可使线粒体的去极化作用增强,本模型中 p38途径可能与 HL-60细胞的坏死密切相关。

关键词：放线菌酮细胞系,HL-60 细胞凋亡膜电位,线粒体有丝分裂素激活蛋白激酶类

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