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第三届全国中医药免疫学术研讨会

作者：徐丽慧何贤辉李丰耀贾仟涛查庆兵暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心

PD-L1(又称B7-H1)是近年来研究较多的B7家族的共信号分子,通过PD-1受体向T细胞传递抑制性信号,因此在调节T细胞免疫应答过程中发挥重要作用。我们已经克隆人PD-L1基因的 cDNA,构建了其胞外域的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了表达。... 详细信息

PD-L1(又称B7-H1)是近年来研究较多的B7家族的共信号分子,通过PD-1受体向T细胞传递抑制性信号,因此在调节T细胞免疫应答过程中发挥重要作用。我们已经克隆人PD-L1基因的 cDNA,构建了其胞外域的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了表达。为进一步研究PD-L1的生物学功能及作用机制,我们制备了可溶性PD-L1蛋白及其抗体,并对获得的PD-L1蛋白的活性进

关键词：胞外域 PD-L1

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双黄连粉针剂体外抗HIV-1作用的实验研究

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河南中医学院学报 2006年第1期21卷 3-5页

作者：曾祥凤曾耀英李海仙林长乐李莉平暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨双黄连粉针剂在体外是否有抗HIV作用及其可能的作用机制。方法:采用荧光染料Calcien AM标记HIV感染的慢性H9细胞(H9/HIV-1ⅢB)与不同稀释浓度的双黄连粉针剂作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/HIV-1ⅢB融合细胞的... 详细信息

目的:探讨双黄连粉针剂在体外是否有抗HIV作用及其可能的作用机制。方法:采用荧光染料Calcien AM标记HIV感染的慢性H9细胞(H9/HIV-1ⅢB)与不同稀释浓度的双黄连粉针剂作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/HIV-1ⅢB融合细胞的变化;MTT法检测双黄连对HIV感染细胞的保护作用;HIV-1 P24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清P24抗原含量的变化。结果:双黄连粉针剂能够抑制MT2和H9/HIV-1ⅢB融合,能够保护HIV感染细胞的死亡,减少HIV-1 P24抗原的表达。结论:双黄连粉针剂在体外具有抗HIV-1的作用。

关键词：双黄连 HIV-1 细胞融合钙黄绿素AM

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小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响(英文)

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中国现代医学杂志 2006年第9期16卷 1281-1284页

作者：史金桃蒋建伟王芳曾慧兰王通马秀君暨南大学医学院生物化学教研室广东广州510632 暨南大学附属第一医院血液科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学医学院中心实验室广东广州510632

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞... 详细信息

目的观察小檗碱对人肝癌Bel-7402细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法体外培养人肝癌Bel-7402细胞,台盼兰活细胞计数及集落形成抑制实验观察不同浓度小檗碱对Bel-7402细胞的增殖抑制作用,Hochest33258染色观察凋亡形态学变化,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率。结果小檗碱可显著抑制Bel-7402细胞生长,使集落形成能力明显下降,均呈时间、剂量依赖性。小檗碱处理后72h,Hochest33258染色可观察到细胞核边集、固缩,有明显凋亡小体形成,流式细胞仪检测出现明显Sub-G1峰。结论小檗碱可以抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,小檗碱可能具有治疗人肝细胞癌的潜在应用价值。

关键词：小檗碱人肝癌细胞增殖抑制细胞凋亡细胞增殖

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可溶性EGF受体胞外域在HeLa细胞中的表达及鉴定

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2006年第2期27卷 189-193页

作者：徐丽慧洪岸何贤辉暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632

目的:在哺乳动物细胞中表达可溶性人表皮生长因子受体(sEGFR)并进行鉴定。方法:以带信号肽的sEGFR的真核表达载体pEGFR s或pEGFP-N1空载体转染HeLa细胞,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析外源基因的表达水平,并以免疫印迹法分析培... 详细信息

目的:在哺乳动物细胞中表达可溶性人表皮生长因子受体(sEGFR)并进行鉴定。方法:以带信号肽的sEGFR的真核表达载体pEGFR s或pEGFP-N1空载体转染HeLa细胞,利用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析外源基因的表达水平,并以免疫印迹法分析培养上清中的sEG-FR。结果:转染pEGFP-N1的HeLa细胞,48 h后EGFP的表达百分率可达83%,而转染pEGFR s载体的HeLa细胞EGFP阳性率为4.8%,表明由于插入的sEGFR基因包含终止密码而抑制了EG-FP的表达;共聚焦显微镜观察也得到一致的结果。进一步以抗EGFR结构域L2的抗血清进行免疫印迹分析证明,转染pEGFR s的HeLa细胞培养上清液中表达sEGFR,存在相对分子质量为83 000和80 000两种产物。结论:转染表达载体的HeLa细胞分泌表达sEGFR。

关键词：表皮生长因子受体可溶性EGFR HeLa细胞

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联合应用活体染料CFDA-SE和SNARF-1检测混合淋巴细胞反应

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 382-384,387页

作者：肇静娴曾耀英刘毅何贤辉暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510630 中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所江苏南京210042

目的建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法。方法BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进... 详细信息

目的建立一种能够对单向混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度进行更全面评价的增殖检测方法。方法BALB/cJ小鼠淋巴结细胞经CFDA-SE标记后作为应答细胞,BALB/cJ或C57BL/6小鼠脾细胞经丝裂霉素C处理后再用SNARF-1标记,作为刺激细胞,进行混合培养。混合培养96h后收获细胞,用流式细胞术进行检测,分析SNARF-1-CFSE+应答细胞的增殖情况,并用ModFitTM软件拟和以获得更多增殖相关指数。结果随着应答细胞分裂代数的增加,CFSE荧光强度逐渐减弱直至与刺激细胞无法分开,通过划除SNARF-1阳性细胞以确定应答细胞,解决了这一问题。应用ModFitTM软件,获得应答细胞的前体频率和增殖指数等多项重要的增殖相关指标。结论联合应用CFSE和SNARF-1染色,结合流式细胞术,可作为评价混合淋巴细胞反应中应答细胞的应答强度的有力工具。

关键词： CFDA-SE SNARF-1 混合淋巴细胞反应增殖

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健康青年中国人中HCMV特异性记忆CD8+ T细胞频率和表型分析

健康青年中国人中HCMV特异性记忆CD8+ T细胞频率和表型分析

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第三届全国中医药免疫学术研讨会

作者：何贤辉查庆兵徐丽慧贾仟涛李丰耀暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心

抗原特异性CD8+T细胞在抗病毒感染过程中发挥极为重要的作用。CD8+T细胞应答分为三个时相:第一时相,CD8+T细胞发生克隆扩增并分化为效应T细胞,清除产生病毒的细胞;接着为收缩相,大部分(90-95％)由克隆扩增产生的抗原特异性CD8+T细胞通... 详细信息

抗原特异性CD8+T细胞在抗病毒感染过程中发挥极为重要的作用。CD8+T细胞应答分为三个时相:第一时相,CD8+T细胞发生克隆扩增并分化为效应T细胞,清除产生病毒的细胞;接着为收缩相,大部分(90-95％)由克隆扩增产生的抗原特异性CD8+T细胞通过凋亡而死亡;最后是第三时相,

关键词：特异性 CD8

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妊娠期调节性T细胞介导保护性效应需要同种抗原的刺激

引用

现代免疫学 2006年第3期26卷 226-230页

作者：肇静娴曾耀英刘毅暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 中国协和医科大学皮肤病研究所病理科南京210042

越来越多的证据表明,人和小鼠妊娠期CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)参与介导母胎免疫耐受。然而,目前对于妊娠期间调控Treg变化的因素还不清楚,对同基因交配(BALB/c×BALB/c)和异基因交配(BALB/c×C57)小鼠以及妊娠妇女CD4+CD25+T... 详细信息

越来越多的证据表明,人和小鼠妊娠期CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)参与介导母胎免疫耐受。然而,目前对于妊娠期间调控Treg变化的因素还不清楚,对同基因交配(BALB/c×BALB/c)和异基因交配(BALB/c×C57)小鼠以及妊娠妇女CD4+CD25+Treg进行了分析,以探讨雌、孕激素和胎儿同种异基因抗原对Treg的影响。发现异基因孕鼠外周淋巴器官CD4+CD25+T细胞于早孕、中孕期明显高于非孕对照,而在同基因孕鼠只有少数个例升高;这些CD4+CD25+T细胞均表达Foxp3蛋白,在体外具有无反应性和免疫抑制能力;而且异基因孕鼠淋巴细胞对父方同种抗原的应答强度明显弱于同基因孕鼠。对去势的雌鼠给予雌二醇或孕酮,使其在血清中浓度接近中孕水平,未发现外周血CD4+CD25+Treg的明显变化。妊娠妇女CD4+CD25highTreg在早孕、中孕期显著升高,临近分娩期降至非孕水平,而此时CD4+CD25lowT细胞反而增加。以上结果表明,异基因抗原的存在对于妊娠期CD4+CD25+Treg介导对胎儿的免疫保护效应具有重要作用,而CD4+CD25+Treg的消失可能与分娩的发动有一定关系。

关键词：妊娠 CD4+CD25+调节性T细胞同种异基因抗原 Foxp3 雌二醇孕酮

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人绒毛膜促性腺激素在HIV-1感染中作用的体外研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第2期26卷 173-173页

作者：李莉平曾耀英曾祥凤狄静芳林长乐肇静娴暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632

HⅣ-1是感染人类病毒的特殊类型.早孕期HⅣ-1母婴传播率相对较低,而此时人绒毛膜促性腺激素(humanchorionic gonadotropin,hCG)水平最高,为此对这种较低的HIV-1母婴传播率与高浓度的hCG相关性进行了研究。

关键词：人绒毛膜促性腺激素 HIV-1感染体外研究特殊类型人类病毒传播率早孕期 hCG 母婴

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喘可治注射液对小鼠体外CD4^+CD25^+T细胞的影响

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生命科学研究 2006年第4期10卷 338-341页

作者：王幼萍曾耀英肇静娴北京师范大学珠海分校中国广东珠海519085 暨南大学组织移植与免疫实验中心中国广东广州510632

利用荧光抗体标记和流式细胞术检测喘可治对刀豆蛋白A(ConA)诱导的T细胞CD69和CD25表达的影响,研究喘可治是否具有促进CD4+CD25+调节性T细胞升高的作用.结果发现喘可治对ConA诱导的T细胞活化标志分子CD69的表达具有抑制作用,但对CD25的... 详细信息

利用荧光抗体标记和流式细胞术检测喘可治对刀豆蛋白A(ConA)诱导的T细胞CD69和CD25表达的影响,研究喘可治是否具有促进CD4+CD25+调节性T细胞升高的作用.结果发现喘可治对ConA诱导的T细胞活化标志分子CD69的表达具有抑制作用,但对CD25的表达具有促进作用.说明喘可治对T细胞活化具有抑制作用,CD25表达的上调并不是由活化引起的,而很可能是CD4+CD25+Tr水平升高的标志.

关键词：喘可治 CD4^+CD25^+调节性T细胞 CD69 活化

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调节性T细胞介导异基因交配孕鼠对父方抗原同种反应性的影响

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哈尔滨医科大学学报 2006年第2期40卷 92-95,98页

作者：肇静娴曾耀英刘毅暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510630 中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所南京210042

目的研究怀有同种异基因胚胎对母体对父方抗原同种反应性的影响及其相关机制。方法采用CFSE标记应答细胞、SNARF-1标记刺激细胞的单向混合淋巴细胞培养体系,对孕10.5d的同基因交配孕鼠BALB/c×BALB/c(syn-BALB/c)和异基因交配孕鼠BA... 详细信息

目的研究怀有同种异基因胚胎对母体对父方抗原同种反应性的影响及其相关机制。方法采用CFSE标记应答细胞、SNARF-1标记刺激细胞的单向混合淋巴细胞培养体系,对孕10.5d的同基因交配孕鼠BALB/c×BALB/c(syn-BALB/c)和异基因交配孕鼠BALB/c×C57(allo-BALB/c)对C57小鼠同种抗原的应答强度进行比较;流式细胞术检测CD4+CD25+T细胞在syn-BALB/c和allo-BALB/c各淋巴器官的比例变化,及其胞内Foxp3表达。结果孕10.5d的allo-BALB/c对C57同种抗原的应答强度明显低于syn-BALB/c,但将应答细胞中的CD4+CD25+T细胞去除后,应答强度反而高于syn-BALB/c。allo-BALB/c脾脏、淋巴结和外周血CD4+CD25+T细胞明显高于syn-BALB/c,这些细胞均表达高水平的Foxp3。结论异基因交配孕鼠对父方抗原的同种反应性较同基因交配孕鼠降低,这一现象很可能是由CD4+CD25+Treg介导的。

关键词：异基因妊娠 CD4^+CD25^+调节性T细胞混合淋巴细胞反应 CFSE SNARF-1 Foxp3

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