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现代免疫学 2012年第1期32卷 46-51页

作者：施资坚朱俊山任帅欧阳东云何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广州510632

研究辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对小鼠淋巴细胞活化、增殖和凋亡的影响,并对其免疫调控机制进行初步探讨。以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测SAHA对T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达的影响;采用碘化丙... 详细信息

研究辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对小鼠淋巴细胞活化、增殖和凋亡的影响,并对其免疫调控机制进行初步探讨。以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测SAHA对T淋巴细胞早期活化抗原CD69表达的影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测SAHA对淋巴细胞周期的影响;以Annexin V-PE染色分析细胞凋亡;应用免疫印迹检测SAHA对Cleaved caspase-3表达的影响。结果显示,SAHA对Con A刺激的淋巴细胞增殖具有抑制作用,其IC50为0.30±0.06μmol/L;SAHA对淋巴细胞的早期活化抗原CD69的表达具有明显的抑制作用(P<0.05);PI染色、Annexin V-PE染色和免疫印迹结果均显示,SAHA对小鼠淋巴细胞的凋亡具有促进作用,且呈剂量依赖性。研究表明,SAHA可能通过抑制小鼠淋巴细胞的活化、增殖以及促进其凋亡而发挥免疫调控功能。

关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂 SAHA 淋巴细胞增殖细胞凋亡免疫调控

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Ⅰ型去乙酰化酶抑制剂MS-275对间充质干细胞C3H/10T1/2成脂分化的影响

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第三军医大学学报 2012年第5期34卷 415-418页

作者：李智耀王奎栋吴伟龚雨琴季煜华暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫研究中心广州510632

目的探讨Ⅰ型去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)MS-275对间充质干细胞(mesen-chymal stem cells,MSCs)成脂分化的影响。方法利用噻唑蓝(MTT)和碘化乙啶(PI)染色结合流式细胞术(FCM)分别检测不同浓度MS-275对C3H/10T1/2细胞活性和细胞周期的影响;油红O染色分析MS-275对C3H/10T1/2细胞成脂分化能力的影响;同时应用实时定量PCR(real-time PCR)检测MS-275对成脂分化标志物:脂结合蛋白(aP2)、围脂素(perilipin)、脂联素(Adipoq),以及成脂分化关键转录因子:过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)mRNA转录水平的影响。结果随着MS-275浓度升高,其对C3H/10T1/2细胞的抑制率也随着增高,IC50约为8μmol/L(P<0.05);流式结果表明,MS-275将C3H/10T1/2细胞周期阻滞在G0/G1期;0.5μmol/L的MS-275明显减少C3H/10T1/2细胞的脂滴积累;同时成脂分化标志物aP2、perilipin、Adipoq及成脂关键转录因子PPAR-γ2的转录水平也显著降低(P<0.05)。结论 MS-275减弱了间充质干细胞成脂分化的能力,表明抑制Ⅰ型HDACs的活性可部分抑制MSCs向成脂分化。

关键词：间充质干细胞成脂分化 MS-275 组蛋白去乙酰化酶

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雪胆素甲通过破坏微丝结构诱导LPS活化的RAW264.7细胞凋亡

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免疫学杂志 2012年第7期28卷 553-557页

作者：何健徐丽慧乔静欧阳东云何贤辉暨南大学生命科学技术学院免疫生物学系组织移植与免疫实验中心广州510630

目的分析雪胆素甲(CuIIa)对脂多糖(LPS)活化的RAW264.7巨噬细胞的影响,探讨其潜在的抗炎效应及作用机制。方法MTS法检测CuIIa对RAW264.7细胞增殖的作用,相差显微镜观察CuIIa对LPS活化的细胞形态的影响,荧光显微镜观察CuIIa对细胞骨架的... 详细信息

目的分析雪胆素甲(CuIIa)对脂多糖(LPS)活化的RAW264.7巨噬细胞的影响,探讨其潜在的抗炎效应及作用机制。方法MTS法检测CuIIa对RAW264.7细胞增殖的作用,相差显微镜观察CuIIa对LPS活化的细胞形态的影响,荧光显微镜观察CuIIa对细胞骨架的影响,流式细胞仪检测亚二倍体(凋亡)峰的变化,免疫印迹检测Cleaved caspase-3、生存素以及G-actin与F-actin的变化。结果 CuIIa能明显抑制RAW264.7细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,但单独CuIIa不能有效诱导细胞凋亡。CuIIa使LPS活化的伸展细胞收缩变圆,伪足突起消失,G-actin水平下降,细胞内发生严重的Actin聚集,说明微丝结构被破坏。随着CuIIa浓度的增加,其诱导LPS活化的RAW264.7细胞处于sub-G0/G1(凋亡峰)的数量明显增加。免疫印迹分析显示CuIIa使Caspase-3明显活化,生存素急剧下降。结论 CuIIa可能通过引起Actin聚集而破坏微丝细胞骨架,诱导LPS活化的RAW264.7细胞发生凋亡,从而发挥其抗炎效应。

关键词：雪胆素甲 RAW264.7 细胞凋亡生存素微丝

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银杏内酯B对CLP诱导脓毒症小鼠的保护作用

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中国病理生理杂志 2012年第10期28卷 1868-1872页

作者：王晓东宋兵曾耀英暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 广州医学院第三附属医院广东广州510150

目的:银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子受体拮抗剂。本实验通过研究GB对盲肠结扎穿孔(CLP)诱导的脓毒症小鼠的存活、外周血一氧化氮(NO)、活性氧簇(ROS)及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的影响来评价其对脓毒症... 详细信息

目的:银杏内酯B(GB)是已知的天然而强效的血小板激活因子受体拮抗剂。本实验通过研究GB对盲肠结扎穿孔(CLP)诱导的脓毒症小鼠的存活、外周血一氧化氮(NO)、活性氧簇(ROS)及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的影响来评价其对脓毒症的免疫调节效果。方法:采用CLP的标准化程序建立小鼠脓毒症模型,术前30 min对药物组模型小鼠进行GB(10μg/g)预处理;统计存活率;以Griess法检测小鼠外周血NO水平;以H2DCFDA标记结合流式细胞术检测外周血ROS水平;以流式细胞微球阵列法与ELISA法检测外周血细胞因子水平。结果:CLP手术后24 h,小鼠胸腺和脾脏萎缩明显,外周血炎症介质NO和ROS及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的水平均显著上升,术后5 d内CLP模型小鼠全部死亡,而10μg/g GB于术前30 min预处理,能缓解胸腺和脾脏萎缩,有效抑制炎症介质与炎性细胞因子风暴,显著提高脓毒症存活率。结论:GB预处理能显著降低CLP小鼠死亡率,下调外周血炎症介质NO和ROS及细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的水平,对脓毒症小鼠有明显的保护作用。

关键词：银杏内酯B 脓毒症存活细胞因子类

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SAHA抑制间充质干细胞C3H10T1/2的增殖与成脂分化

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中国生物化学与分子生物学报 2012年第6期28卷 555-560页

作者：王奎栋李智耀吴伟龚雨琴季煜华暨南大学生命科学技术学院、组织移植与实验研究中心广州510632

本文研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)C3H10T1/2增殖和成脂分化的影响及其可能的作用机制.用Western印迹验证SAHA对细胞内蛋白乙酰化... 详细信息

本文研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)C3H10T1/2增殖和成脂分化的影响及其可能的作用机制.用Western印迹验证SAHA对细胞内蛋白乙酰化的影响;用MTT和流式细胞术检测细胞活性和细胞周期;利用油红O染色检测细胞成脂分化,实时定量PCR检测PPARγ2和成脂分化标志物Fabp4、perilipin以及adipoq mRNA的转录.Western印迹结果显示,SAHA可促进细胞内蛋白的乙酰化.MTT和流式细胞术结果显示,SAHA对C3H10T1/2细胞活性的抑制呈浓度依赖性,随着SAHA浓度增加,细胞形态趋向于展平,并将细胞周期抑制在G0/G1期;SAHA可呈浓度依赖性抑制C3H10T1/2细胞的成脂分化作用.同时实时定量PCR结果显示,SAHA抑制成脂关键转录因子PPARγ2,脂肪因子Fabp4、perilipin和adipoq mRNA的转录.综上所述,SAHA可影响间充质干细胞C3H10T1/2细胞形态,并呈剂量依赖性地抑制其增殖和成脂分化.

关键词：辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA) 间充质干细胞成脂分化

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人参皂苷Rb_1对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及凋亡的影响

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中草药 2011年第4期42卷 743-748页

作者：吕梦捷曾耀英宋兵暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的研究人参皂苷Rb1对小鼠T淋巴细胞体外活化及增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法分离制备小鼠淋巴结细胞悬液;以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A(ConA)的刺激下,人参皂苷Rb1对早期活化标志CD3/CD6... 详细信息

目的研究人参皂苷Rb1对小鼠T淋巴细胞体外活化及增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法分离制备小鼠淋巴结细胞悬液;以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A(ConA)的刺激下,人参皂苷Rb1对早期活化标志CD3/CD69和调节T淋巴细胞标志CD4/CD25表达的影响;用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色结合流式细胞术和MTT法检测在ConA的刺激下,人参皂苷Rb1对T淋巴细胞增殖的影响;DIOC/PI双染技术检测在H2O2作用下,人参皂苷Rb1对淋巴细胞凋亡进程的影响。结果终浓度为5、10、20μmol/L的人参皂苷Rb1对ConA刺激的调节T淋巴细胞CD4+/CD25+的表达具有促进作用,而CD3+/CD69+的表达明显下调(P<0.01);对ConA刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;人参皂苷Rb1显著抑制H2O2诱导的淋巴细胞的凋亡进程(P<0.05)。结论人参皂苷Rb1对小鼠淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。

关键词：人参皂苷Rb1 T淋巴细胞活化增殖凋亡

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去铁胺对T淋巴细胞体外增殖、活化以及细胞周期的影响

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广东农业科学 2012年第16期39卷 165-168页

作者：陆晓宇曾耀英陈中键陈克明叶燕霞袁曦广东省农科院科技管理处广东广州510640 暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 中山大学肿瘤防治中心广东广州510060 广东省农科院植物保护研究所广东广州510640

分别采用MTT法、CFSE染色结合流式细胞术、双色荧光抗体染色结合流式细胞术、PI染色法检测去铁胺(DFO)对小鼠T淋巴细胞的药物毒性、对T淋巴细胞增殖、对Con A刺激下的小鼠T细胞CD69表达和淋巴细胞周期的影响。研究结果表明:DFO对淋巴细... 详细信息

分别采用MTT法、CFSE染色结合流式细胞术、双色荧光抗体染色结合流式细胞术、PI染色法检测去铁胺(DFO)对小鼠T淋巴细胞的药物毒性、对T淋巴细胞增殖、对Con A刺激下的小鼠T细胞CD69表达和淋巴细胞周期的影响。研究结果表明:DFO对淋巴细胞的毒性T细胞体外增殖、活化和细胞周期无影响;不同浓度的DFO(5、10、20、40μmol/L)能显著抑制受Con A刺激48 h和72 h后的T淋巴细胞增殖;低浓度的DFO(5、10μmol/L)对小鼠T淋巴细胞CD69的表达没有影响,高浓度(20、40μmol/L)的DFO可抑制T淋巴细胞CD69的表达;Ph能将T淋巴细胞抑制在G0/G1期。说明DFO除可通过抑制T淋巴细胞活化外,可能还通过其他机制抑制T淋巴细胞增殖,且DFO可以将淋巴细胞周期抑制在G0/G1期,可望发展成为一种新的免疫抑制干预药物。

关键词：去铁胺淋巴细胞流式细胞术抑制作用

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ICAM-1参与脂多糖刺激引起蜕膜细胞应激状态的机制研究

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现代免疫学 2012年第3期32卷 222-225页

作者：姬萌霞林羿狄静芳秦晓黎赵晓明上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学科上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科学研究所上海200001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632

为探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)参与脂多糖(LPS)刺激引起蜕膜细胞应激状态的机制,本研究采用LPS刺激和联合阻断ICAM-1及其受体LFA-1(CD11a/CD18,α1β1整合素)的策略,观察小鼠蜕膜LFA-1+细胞和调节性T细胞相对数量的改变,并检测胚胎吸... 详细信息

为探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)参与脂多糖(LPS)刺激引起蜕膜细胞应激状态的机制,本研究采用LPS刺激和联合阻断ICAM-1及其受体LFA-1(CD11a/CD18,α1β1整合素)的策略,观察小鼠蜕膜LFA-1+细胞和调节性T细胞相对数量的改变,并检测胚胎吸收率的相应变化。LPS刺激可使小鼠胚胎丢失率显著增高,而采用中和抗体抑制ICAM-1/LFA-1通路则可基本消除这一效应。进一步研究发现,LPS可使小鼠蜕膜LFA-1+细胞相对数量显著增多,调节性T细胞相对数量显著减少。相反,抑制ICAM-1/LFA-1可消除上述LPS所造成的影响。结果提示,LPS刺激可激活ICAM-1/LFA-1信息通路,减少蜕膜Treg细胞的相对数量,并导致小鼠母-胎间免疫耐受失衡而发生流产。

关键词：动物模型细胞信息转导免疫调节妊娠耐受

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人参皂甙Rb1对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬及细胞因子和NO分泌的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第3期27卷 242-244,248页

作者：吕梦捷曾耀英宋兵暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1)对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬及细胞因子和一氧化氮(NO)分泌的影响。方法:分离制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液;MTT法检测不同终浓度的人参皂甙Rb1对巨噬细胞的毒性;流式细胞术检测Rb1对巨噬细胞吞噬直径... 详细信息

目的:研究人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1)对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬及细胞因子和一氧化氮(NO)分泌的影响。方法:分离制备小鼠腹腔巨噬细胞悬液;MTT法检测不同终浓度的人参皂甙Rb1对巨噬细胞的毒性;流式细胞术检测Rb1对巨噬细胞吞噬直径1μm微球的影响;用Griess试剂盒检测Rb1对巨噬细胞NO量的影响;使用流式液相蛋白定量检测技术Cytometric Bead Array(CBA)检测Rb1对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的影响。结果:终浓度为5、10、20μmol/L的Rb1对巨噬细胞的吞噬功能具有促进作用,明显抑制LPS诱导的吞噬作用(P<0.05);Rb1能抑制巨噬细胞NO的产生(P<0.01);Rb1能够调节LPS诱导的细胞因子的产生。结论:Rb1对巨噬细胞可能具有双向调节作用,通过抑制LPS信号的转导,调节巨噬细胞因子的分泌,抑制其活化,使NO减少;对于未活化的巨噬细胞,可能通过上调其吞噬功能,增强固有免疫系统来抵御病原体侵入。

关键词：人参皂甙Rb1 巨噬细胞吞噬一氧化氮细胞因子

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红景天苷对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、ROS和NO产生的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第3期27卷 237-241页

作者：叶莎莎曾耀英尹乐乐暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L... 详细信息

目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L、160μmol/L及320μmol/L)的Sal和巨噬细胞共培养4 h,再以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)进行共刺激。利用MTT比色法检测Sal对巨噬细胞体外增殖的影响。用放线菌酮(CHX)诱导巨噬细胞凋亡,用Sytox G reen染色结合荧光酶标仪检测Sal对CHX诱导巨噬细胞凋亡的影响。用流式细胞术(FCM)检测Sal对巨噬细胞吞噬功能的影响。用2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(H2DCFDA)染色法结合荧光酶标仪检测Sal对胞内ROS产生的影响;用G riess反应检测Sal对巨噬细胞分泌NO的影响。结果:MTT比色法检测显示,终浓度为80、160、320μmol/L的Sal均可显著促进LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞增殖(P<0.05)。荧光酶标仪检测Syto xG reen染色法的结果显示,160μmol/L的Sal可抑制CHX诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01)。FCM结果显示,各浓度的Sal均能促进单纯药物组和实验药物组LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。用荧光酶标仪检测DH2DCFDA染色结果表明,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激的巨噬细胞胞内ROS的产生均具有显著的抑制作用(P<0.01)。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞产生NO均具有促进作用(P<0.05)。结论:Sal对LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞增殖具有显著的促进作用,对CHX诱导的巨噬细胞凋亡具有显著的抑制作用,对静息态和活化态的巨噬细胞的吞噬功能均有增强作用,并能减少LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞胞内ROS的产生;但能促进LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞NO的分泌。

关键词：红景天苷腹腔巨噬细胞增殖凋亡吞噬活性氧一氧化氮

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