检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2008年第9期28卷 817-817页

作者：杨志黄秀艳曾耀英滕菲姚满林宋兵李林暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

红车轴草（Trifoliumpratense Leguminosae）为豆科多年生草本植物，又名红三叶、三叶草等。红车轴草提取物（TLE）主要成分有异黄酮及鹰嘴豆芽素等。目前已有TLE抑制小鼠淋巴细胞增殖与抗肿瘤用途的报道。本文对免疫细胞影响作了初步... 详细信息

红车轴草（Trifoliumpratense Leguminosae）为豆科多年生草本植物，又名红三叶、三叶草等。红车轴草提取物（TLE）主要成分有异黄酮及鹰嘴豆芽素等。目前已有TLE抑制小鼠淋巴细胞增殖与抗肿瘤用途的报道。本文对免疫细胞影响作了初步的研究。

关键词：红车轴草提取物 RAW264.7 细胞株增殖抑制作用多年生草本植物分泌 NO 吞噬

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分泌型Survivin真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第6期29卷 562-566,577页

作者：韩捷施焕敬徐丽慧卢宏松何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建含6个组氨酸标签(His6)的小鼠存活素(Survivin)融合蛋白的真核表达载体,及其在真核细胞中的表达。方法:根据小鼠Survivin序列设计引物,经过RT-PCR克隆Survivin的cDNA并进一步构建分泌型Sur-vivin的真核表达载体,经测序鉴定后... 详细信息

目的:构建含6个组氨酸标签(His6)的小鼠存活素(Survivin)融合蛋白的真核表达载体,及其在真核细胞中的表达。方法:根据小鼠Survivin序列设计引物,经过RT-PCR克隆Survivin的cDNA并进一步构建分泌型Sur-vivin的真核表达载体,经测序鉴定后在大肠杆菌中扩增在HeLa细胞中表达;以金属离子螯合层析富集,再用免疫印迹法鉴定。结果:克隆到Survivin编码区全长序列,经DNA测序后证明与已报道序列相同。构建氨基端融合小鼠IL-2信号肽,羧基端带有His6标签的Survivin融合蛋白的真核表达载体,在HeLa细胞中转染成功并且表达;细胞上清经HisTrap HP柱层析富集后,进行免疫印迹分析,表明该融合蛋白以分泌型方式在HeLa细胞中表达。结论:成功克隆Survivin的cDNA,并构建其分泌型真核表达载体。

关键词：存活素真核表达分泌型肿瘤相关抗原

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Jagged1在树突状细胞介导淋巴细胞诱导免疫耐受中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 113-113页

作者：陈玲邢飞跃狄静芳陈笛廖继东暨南大学组织移植与免疫中心广州510632 暨南大学医学院实验中心

Jagged1是哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一，在抗原提呈细胞（APC）表面表达丰富，介导树突状细胞（DC）成熟和分化。Jagged1与其受体结合后，激活Notch信号通路，能够诱导外周成熟T淋巴细胞分化成为产生高水平IL-10的1型调节... 详细信息

Jagged1是哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一，在抗原提呈细胞（APC）表面表达丰富，介导树突状细胞（DC）成熟和分化。Jagged1与其受体结合后，激活Notch信号通路，能够诱导外周成熟T淋巴细胞分化成为产生高水平IL-10的1型调节性T细胞（regulatory Tcell 1，Treg 1）或产生高水平TGF-β的TH3细胞，在诱导免疫耐受中发挥着重要作用。

关键词：细胞诱导免疫耐受树突状细胞介导 Jagged1 淋巴细胞分化抗原提呈细胞调节性T细胞受体结合

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构建的Flt3L胞外域原核表达载体在大肠杆菌中的表达

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第4期29卷 331-335页

作者：卢宏松徐丽慧施焕敬韩捷何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法:依据Flt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆Flt3L基因并构建其... 详细信息

目的:构建含组氨酸标签的FMS样酪氨酸激酶3配体(Fms-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt3L)胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。方法:依据Flt3L基因序列设计引物,以RT-PCR的方法从小鼠脾脏总RNA中克隆Flt3L基因并构建其胞外域原核表达载体,测序鉴定后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,用免疫印迹鉴定。结果:克隆到Flt3L编码区全长序列,经DNA测序证明与已报道的序列相同;构建羧基端带有His6标签的Flt3L胞外域蛋白的原核表达载体,转化大肠杆菌后SDS-PAGE分析显示在BL21(ED3)中获得较高表达;免疫印迹分析表明IPTG诱导后表达的Flt3L胞外域蛋白的相对分子质量(Mr)为19 000,与理论值相符,此蛋白与抗His6标签的抗体发生特异性反应。结论:成功克隆Flt3L基因,构建其胞外域蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。

关键词： FMS样酪氨酸激酶3配体胞外域原核表达组氨酸标签

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抗人PD-1高亲和力抗血清的制备及其在PD-1免疫印迹分析中的应用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第3期29卷 315-319页

作者：施焕敬徐丽慧韩捷卢宏松何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-... 详细信息

利用纯化的可溶性人PD-1胞外域(sPD-1)蛋白为免疫原免疫小鼠,获得抗血清.免疫印迹显示该抗血清与原核表达的sPD-1有特异性反应,但与某些菌体蛋白存在交叉反应.经菌体蛋白吸附法处理后,交叉反应明显减弱.以商业化抗人PD-1抗体和小鼠sPD-1抗血清分析经亲和层析富集的活化的Jurkat T细胞表达的PD-1,只有自制的抗血清鉴定到特异反应条带,其表观分子质量为49 ku.

关键词：程序死亡蛋白-1 Jurkat T细胞抗血清免疫印迹

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流式细胞术微球阵列法检测急性白血病血清IL-6、IL-10和TNF水平

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第4期29卷 375-377页

作者：肖平曾耀英林蔚暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 广东省佛山市第一人民医院临床医学研究所广东佛山528000

目的:探讨流式细胞术微球阵列法(CBA)在细胞因子检测中的应用及血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)在不同亚型急性白血病(AL)中的表达水平。方法:采用BD CBA F lex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒和流式细胞... 详细信息

目的:探讨流式细胞术微球阵列法(CBA)在细胞因子检测中的应用及血清肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)在不同亚型急性白血病(AL)中的表达水平。方法:采用BD CBA F lex Set IL-6、IL-10、TNF试剂盒和流式细胞术检测29例急性白血病患者和20例正常人血清样本中3种细胞因子水平。结果:AL患者IL-6、IL-10和TNF水平显著高于正常对照组,急性淋巴细胞白血病(ALL)的IL-10和TNF水平较急性非淋巴细胞白血病(ANLL)有显著性提高(P<0.05)。在ANLL亚型中,M1型IL-6水平最高。结论:CBA法能快速、准确地定量检测细胞因子;AL血清中IL-6、IL-10和TNF水平升高,可能与疾病的发生发展存在相关性。

关键词：流式细胞术微球阵列法急性白血病细胞因子

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趋化因子对调节性NK细胞归巢的诱导作用

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现代免疫学 2008年第6期28卷 457-464页

作者：王慧琪李萃林羿王文静曾山暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室长沙410008

调节性T细胞和调节性NK细胞都可能在维持妊娠方面发挥关键作用。研究显示,同种异基因妊娠非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胚胎丢失率显著增高,而注射抗唾液酸神经节苷脂清除其残存的NK细胞,可使胚胎丢失率进一步增高。相反,过继性输注来源于正... 详细信息

调节性T细胞和调节性NK细胞都可能在维持妊娠方面发挥关键作用。研究显示,同种异基因妊娠非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠胚胎丢失率显著增高,而注射抗唾液酸神经节苷脂清除其残存的NK细胞,可使胚胎丢失率进一步增高。相反,过继性输注来源于正常小鼠的CD49b+CD25+NK细胞可显著降低胚胎丢失率。检测了CXCL12的特异性受体CXCR4在NK细胞表面的表达模式,并采用体外和体内迁移实验研究了NK细胞的迁移规律。由于以往研究证实小鼠胎盘滋养层细胞表达CXCL12,研究结果提示:孕期动员子宫外表达CXCR4的CD49b+CD25+NK细胞向妊娠子宫内迁移,可能对于调节母胎免疫耐受具有重要意义。

关键词：动物模型细胞迁移免疫调节妊娠耐受

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H-2D^b四聚体的制备及其在检测LCMV特异性CD8^＋T细胞中的应用

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生物工程学报 2008年第2期24卷 278-284页

作者：刘毅徐丽慧曾学思孙建方何贤辉中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所南京210042 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632 暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

MHC四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2D^b基因型(如C57BL/6)小鼠的特异性CD8^+T细胞免疫应答,需要建立H-2D^b四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR方法克隆H-2D^b重链基因的cDNA,进而构建H-2D^b胞外域与生... 详细信息

MHC四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2D^b基因型(如C57BL/6)小鼠的特异性CD8^+T细胞免疫应答,需要建立H-2D^b四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR方法克隆H-2D^b重链基因的cDNA,进而构建H-2D^b胞外域与生物素化酶BirA底物肽(BSP)融合蛋白的表达载体,并在大肠杆菌中获得表达。在LCMV GP_(33-41)抗原肽(KAVYNFATC,KAV)和人β_2-微球蛋白存在时,通过稀释法复性获得H-2D^b/KAV单体。该单体经生物素化并纯化后与PE-链亲和素按4:1的比例混合,即形成四聚体。通过流式细胞术检测经KAV肽免疫的C57BL/6小鼠体内的LCMV特异性CD8^+T细胞的频率.结果表明在外周血、引流淋巴结和脾脏中均可检测到一定频率的LCMV特异性CD8^+T细胞,其中以对外周血标本染色的效果最佳。成功建立了小鼠H-2D^b四聚体制备技术平台,为监测及分析基于H-2D^b基因型小鼠的实验性免疫治疗创造了条件。

关键词： H-2D^b MHC四聚体淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒原核表达

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鹰嘴豆芽素A抗HIV-1活性及抑制CD4^+淋巴细胞早期活化作用

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中国药理学通报 2007年第2期23卷 214-218页

作者：林长乐曾耀英曾祥凤赵令斋王通李海仙李莉平暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510630

目的研究鹰嘴豆芽素A(biochanin A,BioA)对HIV-1活性及CD4+淋巴细胞早期活化作用的影响。方法①以MT-2和H9/HIV-1ⅢB细胞或HIV-1病毒共培养建立HIV-1感染模型,以不同浓度的BioA干预该过程,观察细胞融合情况和测定培养上清中的p24抗原含... 详细信息

目的研究鹰嘴豆芽素A(biochanin A,BioA)对HIV-1活性及CD4+淋巴细胞早期活化作用的影响。方法①以MT-2和H9/HIV-1ⅢB细胞或HIV-1病毒共培养建立HIV-1感染模型,以不同浓度的BioA干预该过程,观察细胞融合情况和测定培养上清中的p24抗原含量变化,以评价BioA的抗HIV-1活性。②以PHA刺激剂诱导人外周血CD4+淋巴细胞活化,利用流式细胞术检测不同浓度BioA对早期活化标志CD69分子的表达影响。结果①BioA在本实验所设浓度下均能减少由HIV-1介导的细胞融合数(EC50=5.1μmol.L-1,SI=39)及p24抗原的表达量(EC50=38μmol.L-1,SI=5.2)。②终浓度5、10、25、50μmol.L-1的BioA对CD4+淋巴细胞早期活化抗原CD69表达具有明显抑制作用(P<0.01),其中50μmol.L-1达到最大抑制率,能使活化率从(60.42±0.52)%降低到(19.70±0.38)%。结论BioA具有抗HIV-1介导的细胞融合和HIV-1复制的活性及抑制CD4+淋巴细胞早期活化作用。

关键词： biochanin A HIV-1 细胞融合 p24抗原早期活化

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腺病毒介导重组hKGF基因转染HaCat细胞及其表达

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中国生物工程杂志 2007年第3期27卷 1-5页

作者：吴晓萍曾耀英贺芳暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

将PCR扩增得到的人角质细胞生长因子(hKGF)基因片段插入穿梭载体pAdTrack-CMV,产生重组质粒pAdTrack-CMV-hKGF,经PmeI线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,得到重组腺病毒质粒pAdEasy-hKGF... 详细信息

将PCR扩增得到的人角质细胞生长因子(hKGF)基因片段插入穿梭载体pAdTrack-CMV,产生重组质粒pAdTrack-CMV-hKGF,经PmeI线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183进行同源重组,得到重组腺病毒质粒pAdEasy-hKGF。采用Lipofectamine2000将pAdEasy-hKGF转染到HEK-293细胞,在HEK-293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有hKGF基因。获得的重组hKGF腺病毒感染颗粒可高效感染HaCat细胞。Western blot结果显示,重组腺病毒感染的HaCat细胞可分泌表达hKGF蛋白。

关键词：人角质细胞生长因子腺病毒同源重组分泌表达

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