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药学学报 2010年第1期45卷 55-59页

作者：吴晓萍曾耀英暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)对HaCat细胞蛋白质组的影响,由鉴定的差异蛋白质推测hFGF-10对HaCat细胞作用的可能机制。采用双向凝胶电泳结合串联飞行时间质谱技术,对空载体腺病毒Ad感染细胞和重组腺病毒rAd-hFGF... 详细信息

研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)对HaCat细胞蛋白质组的影响,由鉴定的差异蛋白质推测hFGF-10对HaCat细胞作用的可能机制。采用双向凝胶电泳结合串联飞行时间质谱技术,对空载体腺病毒Ad感染细胞和重组腺病毒rAd-hFGF-10感染细胞的总蛋白图谱上的差异蛋白点进行鉴定,并通过半定量RT-PCR和Westernblotting在转录和翻译水平对差异蛋白进行确证。结果显示,获得了蛋白质分离效果较好的双向凝胶电泳图谱,鉴定了4种与细胞凋亡、细胞骨架调控、蛋白质降解等相关的差异蛋白质,并在转录和翻译水平确证了差异蛋白质VDAC2在导入目的基因hFGF-10的HaCat细胞中表达上调,提示VDAC2可能在hFGF-10的生物学功能中发挥作用。

关键词：人成纤维细胞生长因子10 腺病毒蛋白质组学细胞凋亡

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H2O2促进子痫前期外周免疫细胞活化

H2O2促进子痫前期外周免疫细胞活化

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2011中国妇产科学术会议暨浙江省计划生育与生殖医学学术年会暨生殖健康讲习班

作者：钱中清曾耀英王才智汪洪涛姚春艳蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染免疫重点实验室暨南大学组织移植与免疫实验中心蚌埠医学院第一附属医院产科

目的探讨子痫前期患者血清中HO与中性粒细胞及T淋巴细胞活化的关系。方法①荧光标记抗体全血染色后,流式细胞仪分别检测正常非孕妇组,正常孕妇组及子痫前期患者组外周血CD3/HLA-D,CD3/CD62L细胞百分率,及粒细胞区CD62L细胞百分率;②40μ... 详细信息

目的探讨子痫前期患者血清中HO与中性粒细胞及T淋巴细胞活化的关系。方法①荧光标记抗体全血染色后,流式细胞仪分别检测正常非孕妇组,正常孕妇组及子痫前期患者组外周血CD3/HLA-D,CD3/CD62L细胞百分率,及粒细胞区CD62L细胞百分率;②40μmol/L HO体外刺激正常孕妇PBMCs 24h,流式细胞仪检测CD3/HLA-DR,CD3/CD62L细胞百分率;③40μmol/L HO体外刺激正常孕妇外周血来源中性粒细胞6h,HDCFDA荧光探针染色,流式细胞仪检测平均荧光强度水平;④贴壁分离法去除贴壁细胞的正常孕妇外周血来源PBMCs,与经40μmol/L HO体外刺激6h的中性粒细胞继续共培养24h,流式细胞仪检测CD3/HLA-DR细胞百分率。结果①子痫前期患者组外周血CD3/HLA-DR细胞百分率（61.64±10.48,n=16）,与正常非孕妇组（10.37±6.01,n=12）及正常孕妇组（25.26±11.72,n=19）比较均显著升高,具有统计学意义（P<0.01）;子痫前期患者组CD3/CD62细胞百分率（63.04±14.34,n=16）与正常非孕妇组（48.46±13.03,n=12）或正常孕妇组（80.58±17.89,n=19）比较均显著降低,具有统计学意义（P<0.01）;②与正常非孕妇外周血粒细胞区高表达CD62L细胞区的平均荧光强度值（213.46±10.24,n=19）比较,正常孕妇（363.86±11.31,n=12）及子痫前期患者（288.51±8.76,n=16）均显著升高,具有统计学意义（P<0.01）;③40μmol/L HO体外刺激正常孕妇PBMCs 24h后,CD3/CD62L细胞百分率分别为（16.57±2.11）和（69.11±6.72）,分别与空白对照组（17.19±1.93）及（73.19±5.77）比较,均无统计学意义（P>0.05,n=12）。④40μmol/L HO体外刺激正常孕妇中性粒细胞6h后,其胞内ROS探针平均荧光强度为（86.42±5.13）,与对照组（54.23±3.57）比较有统计学意义（P<0.01,n=12）;⑤正常孕妇PBMCs与经40μmol/L HO预处理的正常孕妇中性粒细胞共培养24h后,CD3/HLA-DR细胞百分率明显升高（P<0.01,n=12）,去除贴壁细胞可显著降低这一效应（P<0.01,n=12）。结论子痫前期患者血清高水平HO可通过活化中性粒细胞促进外周T淋巴细胞的活化,并需贴壁细胞的参与。

关键词：子痫前期过氧化氢中性粒细胞 T淋巴细胞

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大黄素等5种蒽醌衍生物的体外抗HIV-1活性(英文)

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中国病理生理杂志 2010年第6期26卷 1187-1192页

作者：欧阳东云刘春永曾耀英何贤辉曾祥凤暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:检测大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素等蒽醌衍生物的体外抗HIV-1活性。方法:在96孔培养板中加入不同浓度的衍生物,在倒置显微镜下观察HIV-1ⅢB急性感染的C8166细胞形成合胞体的数量,并用ELISA的方法检测培养上清中... 详细信息

目的:检测大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素等蒽醌衍生物的体外抗HIV-1活性。方法:在96孔培养板中加入不同浓度的衍生物,在倒置显微镜下观察HIV-1ⅢB急性感染的C8166细胞形成合胞体的数量,并用ELISA的方法检测培养上清中HIV-1 p24的抗原水平,得到相应的50%抗HIV-1有效浓度(EC50)。结果:大黄素等蒽醌衍生物有较好的体外抗HIV-1活性,表现为:(1)抑制HIV-1ⅢB感染诱导的合胞体形成,EC50均值分别为(11.44±0.93)μmol/L(大黄素),(51.28±2.86)μmol/L(大黄酸),(90.58±2.30)μmol/L(大黄酚),(8.59±0.38)μmol/L(大黄素甲醚)和(0.89±0.08)μmol/L(芦荟大黄素);(2)抑制HIV-1ⅢB急性感染的C8166细胞p24抗原产生,EC50均值分别为(11.61±0.56)μmol/L(大黄素),(12.35±4.73)μmol/L(大黄酸),(39.63±2.87)μmol/L(大黄酚),>250μmol/L(大黄素甲醚)和(2.75±0.20)μmol/L(芦荟大黄素)。结论:大黄素等5种蒽醌衍生物具有不同水平的体外抗HIV-1活性,其中以芦荟大黄素的抑制活性最强。

关键词： HIV-1 蒽醌类大黄素大黄酸大黄酚大黄素甲醚芦荟大黄素

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漆黄素对巨噬细胞和T淋巴细胞的免疫调节作用

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免疫学杂志 2010年第8期26卷 653-656页

作者：陈真曾耀英叶燕霞暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

目的探讨漆黄素(Fisetin,FIS)对小鼠巨噬细胞吞噬功能、NO的释放及对T淋巴细胞体外活化、增殖的影响。方法无菌制备小鼠巨噬细胞悬液及淋巴细胞悬液;荧光微球结合流式细胞术(FCM)分析FIS对巨噬细胞吞噬作用的影响;Griess试剂盒检测巨噬... 详细信息

目的探讨漆黄素(Fisetin,FIS)对小鼠巨噬细胞吞噬功能、NO的释放及对T淋巴细胞体外活化、增殖的影响。方法无菌制备小鼠巨噬细胞悬液及淋巴细胞悬液;荧光微球结合流式细胞术(FCM)分析FIS对巨噬细胞吞噬作用的影响;Griess试剂盒检测巨噬细胞NO的释放;双色荧光抗体染色结合FCM,检测CD3+T细胞CD69的表达水平;CFSE标记技术检测T细胞增殖的情况。结果 2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/LFIS均能明显抑制巨噬细胞的吞噬微球的能力;FIS能抑制LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞的NO的产生(P<0.05);FIS对ConA刺激的T细胞表达CD69有抑制作用,并能有效抑制ConA诱导的T细胞增殖(P<0.01),且均呈剂量依赖性。结论 FIS能显著抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力和分泌NO的能力,并能够抑制T细胞的活化和增殖,有望发展成为一种新的免疫抑制药物。

关键词：漆黄素吞噬一氧化氮增殖活化

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单羰基姜黄素衍生物的合成、晶体结构、体外抗菌及抗肿瘤活性研究

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有机化学 2010年第6期30卷 884-889页

作者：吴建章王聪蔡跃飘杨树林郑晓咏仇佩虹彭景吴晓萍梁广李李堃温州医学院药学院温州325035 南京理工大学化工学院南京210094 暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

以姜黄素为先导化合物合成了两个对称的单羰基姜黄素类似物和五个查尔酮类单羰基姜黄素类似物,结构经IR,1HNMR及ESI-MS确认,用11种临床常用耐药株对其进行了体外抗菌活性筛选,同时采用MTT法测定了它们对3种人体肿瘤细胞株的细胞毒活性.... 详细信息

以姜黄素为先导化合物合成了两个对称的单羰基姜黄素类似物和五个查尔酮类单羰基姜黄素类似物,结构经IR,1HNMR及ESI-MS确认,用11种临床常用耐药株对其进行了体外抗菌活性筛选,同时采用MTT法测定了它们对3种人体肿瘤细胞株的细胞毒活性.其中化合物A5的体外抗肿瘤活性与姜黄素相当,并且A5对部分临床耐药菌也有一定的抑菌活性.通过单晶培养得到了A5的晶体结构,经测定表明其结构属于正交晶系,空间群Fdd2.晶胞参数a=26.085(3),b=28.248(3),c=7.9615(9),α=90.00°,β=90.00°,γ=90.00°,V=5866.4(12)3,Z=16,DX=1.288Mg/m3,μ=0.09mm-1,F(000)=324,最终偏离因子R=0.047,wR=0.112.

关键词：单羰基姜黄素衍生物查尔酮合成抗肿瘤抗菌活性晶体结构

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尿酸钠对BALB/c小鼠抗体应答及树突状细胞和迟发型超敏反应的影响

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中国病理生理杂志 2010年第3期26卷 424-429页

作者：刘春永王飞鹏郭贺高琦何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:探讨尿酸钠作为佐剂对BALB/c小鼠体液和细胞免疫应答的影响。方法:利用尿酸钠悬浮液为佐剂、天花粉蛋白(TCS)为免疫原对BALB/c小鼠进行免疫,以酶联免疫测定法检测特异性抗体IgG的效价。体外诱导小鼠树突状细胞(DC),流式细胞术分析D... 详细信息

目的:探讨尿酸钠作为佐剂对BALB/c小鼠体液和细胞免疫应答的影响。方法:利用尿酸钠悬浮液为佐剂、天花粉蛋白(TCS)为免疫原对BALB/c小鼠进行免疫,以酶联免疫测定法检测特异性抗体IgG的效价。体外诱导小鼠树突状细胞(DC),流式细胞术分析DC表型,评价尿酸钠体外对DC成熟的效应。以二硝基氟苯建立迟发型超敏反应(DTH)模型,分析尿酸钠在体内对细胞免疫应答的影响。结果:传统弗氏佐剂可极大地增强小鼠对TCS的抗体应答,尿酸钠佐剂对抗体应答不但没有促进,与单独使用免疫原相比,抗体应答反而明显降低。流式细胞术分析显示,尿酸钠对DC表达CD11c和CD83没有影响,但可明显提高MHCII的表达水平。DTH模型中,尿酸钠增强致敏原引发的耳廓肿胀程度,并促进DTH小鼠淋巴细胞的体外增殖能力。结论:尿酸钠悬浮液作为佐剂,对细胞免疫有显著增强作用,而对体液免疫应答却有一定的抑制作用,提示该佐剂在疫苗研究中有潜在应用前景。

关键词：尿酸钠体液免疫应答树突细胞迟发型超敏反应

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P7抑制bFGF诱导的3T3细胞增殖的作用机制

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药学学报 2010年第3期45卷 314-317页

作者：王聪林绍强李校堃吴晓萍暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学医学院广东广州510632 温州医学院药学院浙江温州325035

研究从噬菌体随机七肽库中筛选得到的新型bFGF拮抗肽(P7)抑制bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖的作用机制。采用倒置显微镜观察不同浓度P7对细胞形态的影响;流式细胞术分析P7对细胞周期的影响;Western blotting检测P7对bFGF刺激的Balb/c3T3... 详细信息

研究从噬菌体随机七肽库中筛选得到的新型bFGF拮抗肽(P7)抑制bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖的作用机制。采用倒置显微镜观察不同浓度P7对细胞形态的影响;流式细胞术分析P7对细胞周期的影响;Western blotting检测P7对bFGF刺激的Balb/c3T3细胞中MAPK通路的MEK、Erk1/2信号分子活化水平的影响。结果显示,在检测的浓度范围内,P7对Balb/c3T3细胞形态无显著影响;P7可改变bFGF刺激下Balb/c3T3的细胞周期,减少S期细胞比率,使细胞阻滞在G0/G1期;并以剂量依赖的方式下调bFGF激活的MEK、Erk1/2信号分子的磷酸化水平。P7可能通过阻滞细胞在G0/G1期,下调MAPK通路信号分子的活化水平,从而抑制bFGF诱导的Balb/c3T3细胞增殖。

关键词： bFGF 拮抗肽细胞周期 MAPK通路

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3种流感病毒细胞毒T淋巴细胞抗原表位比较

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中国公共卫生 2010年第10期26卷 1293-1294页

作者：王飞鹏何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

2009年甲型H1N1流感的世界性流行引起普遍关注。然而,发现甲型H1N1感染者多数症状较轻,重症病例很少。研究显示,目前流行的甲型H1N1流感病毒中包含了人类流感病毒H3N2以及禽流感病毒H5N1的成分,而且其他组分也与以往流行的人类流感病毒... 详细信息

2009年甲型H1N1流感的世界性流行引起普遍关注。然而,发现甲型H1N1感染者多数症状较轻,重症病例很少。研究显示,目前流行的甲型H1N1流感病毒中包含了人类流感病毒H3N2以及禽流感病毒H5N1的成分,而且其他组分也与以往流行的人类流感病毒有较高同源性,据此推测,既往有人类流感病史者对甲型H1N1流感可能有一定交叉免疫力,即人类体内普遍存在的免疫记忆,[第一段]

关键词：流感病毒抗原表位表位预测交叉抗原反应

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siRNA干扰p38α上调人血管eNOS基因启动子转录活性

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第6期31卷 539-543页

作者：王宝玉邢飞跃刘娜李卓唐征乐暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:通过靶向p38α的siRNA干扰人血管内皮细胞的p38α信号通路,探索其对血管内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调节作用。方法:利用W estern印迹检测siRNA-p38α干扰HUVEC-12细胞后p38α蛋白的表达,确定siRNA-p38α的最佳... 详细信息

目的:通过靶向p38α的siRNA干扰人血管内皮细胞的p38α信号通路,探索其对血管内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调节作用。方法:利用W estern印迹检测siRNA-p38α干扰HUVEC-12细胞后p38α蛋白的表达,确定siRNA-p38α的最佳作用时间和浓度,然后通过双荧光素酶报告基因技术检测转染siRNA-p38α后细胞裂解液的荧光强度,分析eNOS基因启动子的转录活性变化。结果:与对照组比较,siRNA-p38α干扰后p38α蛋白表达明显减弱,而相应的eNOS启动子转录活性上调,以100 nmol/L的siRNA-p38α作用48 h的效果最佳。结论:siRNA干扰p38α信号可上调人血管内皮细胞eNOS基因的转录活性。

关键词：一氧化氮合酶 p38α丝裂原活化蛋白激酶小分子干扰RNΑ 内皮细胞

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中药喘可治注射液对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第6期31卷 572-576页

作者：孙成宏张亚兴宋兵曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20μL/mL)孵育4 h后,加入过氧化氢(H2O2)、放线菌... 详细信息

目的:研究中药喘可治注射液(CKZ)对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡、一氧化氮(NO)释放和细胞因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,制备单细胞悬液,加入CKZ(终体积分数20μL/mL)孵育4 h后,加入过氧化氢(H2O2)、放线菌酮(CHX)、环磷酰胺(CTX)诱导细胞凋亡,荧光酶标仪结合SytoxGreen染色检测细胞凋亡;加药孵育4 h后,加入细菌脂多糖(LPS,终质量浓度10μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80ng/mL),24h后Grass试剂盒检测巨噬细胞NO的量;加药孵育4 h后,加入LPS(终质量浓度10μg/mL)和IFN-γ(终质量浓度80 ng/mL),24h后流式细胞仪结合Cytometric Bead Array(CBA)技术检测细胞因子的释放。结果:CKZ能抑制H2O2、CHX、CTX诱导的细胞凋亡;促进非刺激状态下巨噬细胞NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生,抑制LPS和IFN-γ刺激的NO和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的产生。结论:CKZ可抑制巨噬细胞凋亡,并对巨噬细胞NO的分泌和IL-6、IL-10、MCP-1、IFN-γ、TNF-α5种细胞因子的生成具有双向调节作用。

关键词：巨噬细胞喘可治细胞凋亡一氧化氮细胞因子

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