检索结果-内蒙古大学图书馆

医学分子生物学杂志 2010年第2期7卷 126-130页

作者：陈清欧阳东云徐丽慧耿梅张延亭何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心广州市510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广州市510632 暨南大学生物工程研究所广州市510632

目的构建重组人ASCT2胞外域ECL2融合蛋白的原核表达载体，优化其在大肠埃希菌中可溶性表达的条件，并获得纯化的ECL2蛋白。方法以PCR方法扩增编码ECL2的DNA片段，插入至pET-41b载体中，构建ECL2的原核表达载体，转化至大肠埃希菌，优化... 详细信息

目的构建重组人ASCT2胞外域ECL2融合蛋白的原核表达载体，优化其在大肠埃希菌中可溶性表达的条件，并获得纯化的ECL2蛋白。方法以PCR方法扩增编码ECL2的DNA片段，插入至pET-41b载体中，构建ECL2的原核表达载体，转化至大肠埃希菌，优化可溶性表达条件，GSH—Agarose亲和层析纯化并鉴定，与MCF-7细胞结合活性的测定。结果免疫印迹显示，ECL2融合蛋白既表达于包涵体中，也能以可溶性形式表达。随IPTG浓度的增高，可溶性表达水平提高；培养温度为28℃和33℃时可溶性产物高于37℃；而随诱导时间的延长至12h以上，可溶性表达量下降。可溶性表达优化条件为：温度33℃、IPTG浓度0．4mmol／L、诱导时间4h。经亲和层析获得高纯度ECL2蛋白并具有与MCF-7细胞结合活性。结论优化了ECL2融合蛋白的可溶性表达条件，通过亲和层析一步法可获得高纯度融合蛋白。

关键词：中性氨基酸转运蛋白2 胞外结构域可溶性表达合胞素

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重组人ASCT2胞外结构域ECL2在大肠杆菌中的表达及其鉴定

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生命科学研究 2010年第3期14卷 213-218页

作者：欧阳东云徐丽慧高琦郭贺陈清何贤辉暨南大学组织移植与免疫实验中心中国广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室中国广东广州510632 暨南大学生物工程研究所中国广东广州510632

中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,ECL2是该受体的其中一个较大的胞外结构域.通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的胞外区ECL2序列,与pET... 详细信息

中性氨基酸转运蛋白(ASCT2)是人类内源性病毒的包膜蛋白合胞素在细胞膜上的主要受体,ECL2是该受体的其中一个较大的胞外结构域.通过RT-PCR方法从人乳腺癌MCF-7细胞中克隆ASCT2基因编码区全长序列,再从中扩增ASCT2的胞外区ECL2序列,与pET-41b连接构建原核表达载体,重组质粒在大肠杆菌中获得高效表达,重组蛋白在N-和C-端分别融合谷胱甘肽转移酶(GST)和His6标签,融合蛋白在上清液和包涵体中均有表达,可溶性部分经亲和层析纯化获得高纯度的重组蛋白,该蛋白可结合在表达合胞素的MCF-7细胞表面,具有结合合胞素的潜在活性,这些结果为进一步研究ASCT2与合胞素的相互作用奠定了基础.

关键词：合胞素中性氨基酸转运蛋白胞外结构域原核表达

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根皮素的抗炎和免疫抑制作用(英文)

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药学学报 2009年第5期44卷 480-485页

作者：陆晓宇曾耀英叶燕霞周玉英慕静静赵晓慧暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

探讨根皮素(phloretin)在体外对小鼠T淋巴细胞增殖、活化、周期和巨噬细胞NO释放、吞噬功能的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术检测根皮素对T淋巴细胞增殖的影响。荧光抗体染色结合流式细胞术分析根皮素对T淋巴细胞在ConA的刺激下C... 详细信息

探讨根皮素(phloretin)在体外对小鼠T淋巴细胞增殖、活化、周期和巨噬细胞NO释放、吞噬功能的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术检测根皮素对T淋巴细胞增殖的影响。荧光抗体染色结合流式细胞术分析根皮素对T淋巴细胞在ConA的刺激下CD69和CD25的表达水平的影响。碘化丙啶(PI)染色检测细胞周期的分布情况。Griess试剂盒和荧光微球分别用以检测巨噬细胞NO释放和吞噬功能。结果显示,根皮素(40、60和80μmol.L-1)明显抑制T淋巴细胞增殖,增殖指数(PI)从1.41±0.13分别下降到1.34±0.16、1.19±0.12和1.07±0.06。根皮素可明显抑制CD69和CD25的表达(P<0.01)。细胞周期分析显示,根皮素可将细胞抑制在G0/G1期。巨噬细胞在LPS和IFN-γ的刺激下的NO释放量为(26.72±3.57)μmol.L-1,而在根皮素作用下NO释放量明显下降(P<0.01)。巨噬细胞吞噬率在根皮素作用下也明显下降(P<0.01)。以上结果表明,根皮素有望发展成为一种新的免疫抑制药物。

关键词：根皮素 T淋巴细胞巨噬细胞流式细胞术

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银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134表达的研究

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中国实用医刊 2010年第11期37卷 8-11页

作者：刘毅蔡小嫦曾耀英北京协和医学院皮肤病研究所中国医学科学院 210042 暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式... 详细信息

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式细胞术检测T细胞CD69、CD134的表达.结果银屑病患者组和健康对照组各11例纳入研究,结果显示:①银屑病患者组新鲜血标本T细胞CD134、CD69表达率均明显高于健康对照组(P<0.01); ②PMA联合Ionomycin刺激第6、12、24 h,银屑病患者组与健康对照组外周血T细胞CD69表达率仅在第24 h差异具有统计学意义(P<0.05); ③在刺激第6、12、24 h,银屑病患者组外周血T细胞CD134表达率均较健康对照组显著升高(P<0.001).结论银屑病患者外周血T细胞存在异常活化.在体外活化的外周血T细胞上,银屑病患者组CD134的表达显著高于健康对照组.

关键词：银屑病患者外周血流式细胞术检测 CD69 表达率 T lymphocytes peripheral blood T cells controls 对照组健康志愿者 results 刺激体外活化 PMA 免疫荧光标记 plus whole blood significant 统计学意义

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根皮素对小鼠T淋巴细胞体外活化、周期、Ca^(2+)离子内流以及凋亡的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第12期25卷 1199-1201页

作者：陆晓宇曾耀英叶燕霞曾祥凤肇静娴暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究根皮素(Ph)对小鼠T淋巴细胞中期活化、细胞周期、Ca2+离子内流以及凋亡的影响,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性。方法:双色荧光抗体染色结合流式细胞术(FCM)分析Ph对多克隆刺激剂(ConA)刺激下的小鼠T淋巴细胞CD25表达的影... 详细信息

目的:研究根皮素(Ph)对小鼠T淋巴细胞中期活化、细胞周期、Ca2+离子内流以及凋亡的影响,探讨将其发展为免疫干预药物的可能性。方法:双色荧光抗体染色结合流式细胞术(FCM)分析Ph对多克隆刺激剂(ConA)刺激下的小鼠T淋巴细胞CD25表达的影响;PI染色法检测Ph对T淋巴细胞周期的影响;Fluo-4/AM染色结合FCM分析Ph对T淋巴细胞Ca2+离子内流的影响;calcein/Co2+技术检测Ph对T淋巴细胞线粒体通透性转换(MPT)的影响,并用DIOC6(3)染色检测其对线粒体膜电势(MMP)的影响。结果:Ph(40,60,80μmol/L)对ConA刺激的T淋巴细胞CD25表达有显著的抑制作用(P<0.01);Ph能抑制T淋巴细胞Ca2+离子内流(P<0.01);细胞周期分析显示,Ph能将T淋巴细胞抑制在S期;且Ph能够诱导和加速MPT,并导致MMP的显著下降。结论:Ph对小鼠T淋巴细胞活化和Ca2+内流具有显著的抑制作用,并能将细胞抑制在S期,能通过线粒体途径诱导T淋巴细胞凋亡,可望发展成为一种新的免疫抑制药物。

关键词：根皮素淋巴细胞流式细胞术抑制作用

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红车轴草提取物对小鼠同种异基因皮片移植的影响

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中华中医药杂志 2009年第4期24卷 443-446页

作者：杨志黄秀艳狄静芳曾耀英暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632

目的:探讨红车轴草提取物(Trifoliumpratense Leguminosaeextract,TLE)对小鼠同种异基因皮片移植的影响。方法:受体BALB/c小鼠分为生理盐水对照组(physiologicsaline,PS)与TLE处理组,通过背-背法进行C57BL/6的全厚皮皮片移植,以观察TLE处理组移植皮片生长情况是否优于PS组。取受体小鼠淋巴细胞进行羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFDA-SE)标记的增殖追踪及混合淋巴细胞反应。结果:尾静脉注射TLE25μg/kg每天的处理组移植皮片生长情况优于PS组。TLE处理组BALB/c小鼠淋巴细胞增殖低于PS组。结论:TLE可能参与了小鼠免疫系统调节,诱导了其对同种异基因皮片的耐受。

关键词：红车轴草提取物皮片移植同种异基因增殖混合淋巴细胞反应实验研究

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中华实用诊断与治疗杂志 2010年第5期24卷 426-428,432页

作者：刘毅徐丽慧何贤辉孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京市210042 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州市510632 暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州市510632

目的:构建负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽的HLA-A*2402四聚体并进行鉴定,为分析gp100抗原肽诱发的特异性细胞免疫应答创造条件。方法:以羧基端融合生物素化酶BirA底物肽的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白、人β2-微球蛋白、gp100 VY... 详细信息

目的:构建负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽的HLA-A*2402四聚体并进行鉴定,为分析gp100抗原肽诱发的特异性细胞免疫应答创造条件。方法:以羧基端融合生物素化酶BirA底物肽的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白、人β2-微球蛋白、gp100 VYFFLPDHL抗原肽、PE-链亲和素为材料,制备HLA-A*2402/VYF四聚体;非还原SDS-PAGE鉴定四聚体四聚化程度;三色免疫荧光标记流式细胞术分析HLA-A*2402+健康志愿者外周血gp100特异性CD8+T细胞的频率。结果:HLA-A*2402/VYF四聚体形成率为83%,所制备的四聚体具有与HLA-A*2402+供者抗原特异性CD8+T细胞的结合活性,特异性CD8+T细胞的频率为外周血总CD8+T细胞的0.02%～0.06%。结论:成功制备HLA-A*2402/VYF四聚体并用于检测gp100特异性CD8+T细胞,为研究HLA-A*2402+黑素瘤患者免疫治疗的机制及疗效监测创造了条件。

关键词：恶性黑素细胞瘤 MHC四聚体 HLA-A^＊2402 gp100

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棉酚对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响

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现代免疫学 2009年第2期29卷 111-116页

作者：许文彬卢宏松徐丽慧施焕敬刘春永何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632

研究棉酚(gossypol)对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响及作用机制。分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以Annex... 详细信息

研究棉酚(gossypol)对小鼠淋巴细胞体外增殖和凋亡作用的影响及作用机制。分离小鼠淋巴结细胞,以CFSE染色,加入佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)进行刺激,以流式细胞仪分析棉酚对淋巴细胞增殖率的影响;以MTS检测淋巴细胞的增殖情况;以Annexin V-PE染色分析细胞凋亡;用Hoechst33342染色观察细胞核形态。CFSE染色分析显示,棉酚对PDB+Ion诱导的小鼠淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.01),且呈剂量依赖性。以MTS分析细胞增殖情况,也获得相似的结果。终浓度为4、8和16μmol/L的棉酚处理8 h后的细胞凋亡率分别为4.39%、6.57%和12.14%,PDB+Ion对照组凋亡率为2.13%。凋亡率随着棉酚作用时间的增加而上升,存在时间和剂量依赖关系。高浓度棉酚作用后大量细胞核呈现染色质固缩、核碎裂和致密浓染等凋亡特征。研究表明,棉酚能有效抑制小鼠淋巴细胞体外增殖和诱导其发生凋亡,并呈现出时间和剂量依赖关系。

关键词：棉酚淋巴细胞增殖凋亡流式细胞术

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nmhaFGF对大鼠缺血再灌注损伤心肌的保护作用

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中国药科大学学报 2009年第2期40卷 161-165页

作者：许华李校堃黄亚东郑青苏志坚吴晓萍赵专友暨南大学药学院广州510632 暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 天津药物研究院药理室天津300193

目的:研究非促分裂型酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法:大鼠冠脉左前降支闭塞30min后再灌注3h,再灌注前10min尾静脉注射不同剂量nmhaFGF。测定各组大鼠室性心动过速(VT)和心室颤动(VF)的潜伏期、... 详细信息

目的:研究非促分裂型酸性成纤维细胞生长因子(nmhaFGF)对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。方法:大鼠冠脉左前降支闭塞30min后再灌注3h,再灌注前10min尾静脉注射不同剂量nmhaFGF。测定各组大鼠室性心动过速(VT)和心室颤动(VF)的潜伏期、持续时间和发生率,评定心律失常分数;再灌注24h后,测定血清AST、LDH、CK-MB含量,并计算大鼠心肌梗死面积。结果:静脉注射nmhaFGF(20,40,80μg/kg)能明显抑制缺血再灌注引起的心肌损伤。和模型组相比,nmhaFGF各组大鼠的VT和VF发生率减少,出现心律失常的潜伏期延迟,持续时间缩短;另外心肌梗死区占左室面积的百分比及梗死区占危险区百分比均有所降低;此外,血清心肌酶含量AST、LDH、CK-MB显著降低;以80μg/kgnmhaFGF作用较明显,其作用强度与8mg/kg普萘洛尔相当。结论:nmhaFGF对大鼠缺血再灌损伤心肌具有保护作用。

关键词： nmhaFGF 缺血再灌注心肌损伤

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重组hFGF-7腺病毒对角质形成细胞的生物学效应

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第6期30卷 636-639页

作者：吴晓萍曾耀英暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的:研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子7(hFGF-7)对人皮肤角质形成细胞(HaCat)的生物学效应。方法:通过倍比稀释和感染实验,测定重组腺病毒rAd-hFGF-7的滴度;流式细胞术检测重组腺病毒感染HaCat细胞的感染效率;MTT法检测rAd-hFG... 详细信息

目的:研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子7(hFGF-7)对人皮肤角质形成细胞(HaCat)的生物学效应。方法:通过倍比稀释和感染实验,测定重组腺病毒rAd-hFGF-7的滴度;流式细胞术检测重组腺病毒感染HaCat细胞的感染效率;MTT法检测rAd-hFGF-7对HaCat细胞增殖的影响;重组腺病毒对HaCat细胞周期的影响通过流式细胞术进行检测。结果:高滴度重组腺病毒可高效感染HaCat细胞,其促细胞增殖作用随着重组腺病毒MO I值的增加而增强,当MO I值为50时,感染细胞进入S期和G2期的细胞比率显著增加。结论:重组腺病毒rAd-hFGF-7可促进HaCat细胞的增殖,改变HaCat细胞周期。

关键词：成纤维细胞生长因子7 腺病毒细胞增殖细胞周期

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