检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2015年第3期35卷 61-65页

作者：王东波马义王孝丽赵绍军韩磊洪岸暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广州510632

利用基因工程技术高效制备具有促进角膜上皮细胞增殖功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP 27)衍生多肽RP2,在细胞水平初步研究其生物学作用,为其用于角膜损伤治疗提供实验基础。采用基因重组技术表达重组肽RP2,经Chitin-Beads和HPLC纯化... 详细信息

利用基因工程技术高效制备具有促进角膜上皮细胞增殖功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP 27)衍生多肽RP2,在细胞水平初步研究其生物学作用,为其用于角膜损伤治疗提供实验基础。采用基因重组技术表达重组肽RP2,经Chitin-Beads和HPLC纯化、SDS-PAGE和质谱鉴定后,研究其对小鼠角膜上皮细胞增殖的影响。实验结果表明:利用基因重组技术制备的PACAP 27衍生多肽RP2的分子量为3.3 k Da,纯度达96%;分别用重组肽RP2、PACAP 27及PBS作用于小鼠角膜上皮细胞,处理24 h及48 h时,RP2处理组角膜上皮细胞增殖率分别为(49.6±3.1)%、(93.0±1.7)%,PACAP 27处理组细胞增殖率分别为(29.0±2.4)%、(78.8±2.6)%,PBS对照组细胞增殖率为(20.2±1.1)%,(40.9±3.3)%。利用建立的重组多肽制备技术条件,可实现PACAP衍生多肽RP2高效制备,制备的RP2可有效促进角膜上皮细胞的增殖,从而有望成为一种新型角膜损伤治疗候选药物。

关键词：基因重组垂体腺苷酸环化酶激活肽重组肽角膜上皮细胞

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睾丸体积、卵泡刺激素和精浆中性α-糖苷酶在无精子症分型诊断中的应用

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中国男科学杂志 2016年第12期30卷 55-58页

作者：颜秋霞陈润强周秀琴陈彩蓉郭晓燕赵晓英蔡志明唐爱发马义广州医科大学附属第六医院清远市人民医院生殖医学中心清远511518 暨南大学生物医药研究院/细胞生物学系广东省生物工程药物重点实验室深圳市第二人民医院暨深圳大学第一附属医院科教科

世界范围内不孕不育人口约占育龄夫妇的15%,无精子症是男性不育症中较为严重的一种类型,占男性不育的10%-20%。无精子症分为梗阻性无精子症（obstructive azoospermia,OA）和非梗阻性无精子症（non-obstructive azoospermia,NOA）两种... 详细信息

世界范围内不孕不育人口约占育龄夫妇的15%,无精子症是男性不育症中较为严重的一种类型,占男性不育的10%-20%。无精子症分为梗阻性无精子症（obstructive azoospermia,OA）和非梗阻性无精子症（non-obstructive azoospermia,NOA）两种。以往鉴别无精子症类型主要通过睾丸活检、阴囊探查和输精管造影等有创方法,其临床应用受到制约。因此,寻找无创、简便、准确的无精子症分型的诊断方法实属必要。睾丸体积、血清生殖激素,

关键词：无精子症睾丸体积卵泡刺激素 α葡糖苷酶类

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食管癌相关成纤维细胞的分离与鉴定

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中国组织化学与细胞化学杂志 2015年第2A期23卷 134-138页

作者：谭萱王嘉康韩维张惠华管文华张航麦迪思陈小佳基因工程药物国家工程研究中心广东省生物工程药物重点实验室暨南大学生物医药研究院细胞生物学系广州510632 广州医科大学附属肿瘤医院广州510095

目的探索和获得较纯的食管癌肿瘤相关成纤维细胞,为后续关于食管癌肿瘤微环境中肿瘤相关成纤维细胞作用的研究提供材料和依据。方法通过组织块法和胰蛋白酶消化法及混合培养的比较来获得快速较纯的成纤维细胞;免疫组化鉴定成纤维细胞;... 详细信息

目的探索和获得较纯的食管癌肿瘤相关成纤维细胞,为后续关于食管癌肿瘤微环境中肿瘤相关成纤维细胞作用的研究提供材料和依据。方法通过组织块法和胰蛋白酶消化法及混合培养的比较来获得快速较纯的成纤维细胞;免疫组化鉴定成纤维细胞;细胞增殖法检测细胞的增殖能力;结果组织块法、组织块和胰蛋白酶消化结合的方法均可获得较纯的成纤维细胞,而且发现食管癌相关成纤维细胞的增殖速度明显高于癌旁成纤维细胞的增殖。结论获得的较纯的成纤维细胞可以用于进一步的机制研究。

关键词：食管癌肿瘤原代培养成纤维细胞细胞增殖

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小分子酪氨酸激酶抑制剂regorafenib研究进展

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肿瘤药学 2015年第5期5卷 321-326页

作者：张文姬石智暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系生物医药研究院广东广州510632 广东省生物工程药物重点实验室广东广州510632 国家基因工程药物研究中心广东广州510632

regorafenib(BAY 73-4506,Stivarga®)是新型的口服小分子多激酶抑制剂,可广泛抑制与血管生成和肿瘤发生相关的靶激酶。该药影响的作用通路以及用于监测该药物疗效的生物标记物是研究的热点之一。同时由于其广谱的激酶抑制活性... 详细信息

regorafenib(BAY 73-4506,Stivarga®)是新型的口服小分子多激酶抑制剂,可广泛抑制与血管生成和肿瘤发生相关的靶激酶。该药影响的作用通路以及用于监测该药物疗效的生物标记物是研究的热点之一。同时由于其广谱的激酶抑制活性,对该药多种适应症的研究也在广泛开展。鉴于regorafenib被批准时同时带框警告,其副作用也不容忽视。

关键词：抗肿瘤 BAY 73-4506 BAY73-4506

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新型重组VPAC2激动剂RD的制备及促进胰岛素功能的分子机制

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中国生物工程杂志 2014年第11期34卷 60-66页

作者：马义罗天杰洪岸暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广州510632

利用DNA重组、原核表达、Chitin-Beads柱和HPLC纯化、质谱鉴定等技术,制备了一种新型具有抗2型糖尿病功能的VPAC2受体激动剂RD,并初步研究和揭示了其在Ⅱ型糖尿病治疗中有效促进胰岛素信号传导的分子机制。实验结果表明:利用基因重组技... 详细信息

利用DNA重组、原核表达、Chitin-Beads柱和HPLC纯化、质谱鉴定等技术,制备了一种新型具有抗2型糖尿病功能的VPAC2受体激动剂RD,并初步研究和揭示了其在Ⅱ型糖尿病治疗中有效促进胰岛素信号传导的分子机制。实验结果表明:利用基因重组技术制备的VPAC2受体激动剂RD的分子量为3 785.0 Da,纯度为96%;将重组肽作用于正常或胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞(IR模型细胞),1和5μmol/L重组肽RD可促进正常3T3-L1脂肪细胞IRS-1蛋白的表达(分别增加36%和42%),而促进IR模型细胞IRS-1蛋白的表达增加更为明显(分别增加55%和63%)。IR模型细胞经1,5和10μmol/L重组肽RD处理后,p IRS1(ser307)的表达水平分别比降低了5.9%,10.7%和32.7%。在IR模型细胞中,5和10μmol/L RD处理组,IRS-2蛋白的表达水平分别降低12.8%和40.6%;而1,5和10μmol/L RD各处理组p IRS2蛋白的表达水平分别降低35.1%,40.8%和48.5%。5 and 10μmol/L RD处理的IR模型细胞中Akt蛋白的表达显著增强,表达量分别增加74%和77%。1,5和10μmol/L的重组肽RD处理的IR模型细胞中,Akt Ser473磷酸化水平分别降低33.9%,64.0%和71.1%;Akt Thr308磷酸化水平分别升高13.5%,78.6%和83.3%。建立了重组VPAC2受体激动剂RD的制备技术,并在体外细胞水平检测了其效果(显著促进正常3T3-L1脂肪细胞及IR模型细胞IRS-1蛋白的表达;降低IR模型细胞p IRS1(ser307),IRS-2,p IRS2蛋白的表达;促进IR模型细胞Akt蛋白的表达及Akt Thr308磷酸化水平等),为阐明其在2型糖尿病治疗中的分子作用机制及药用研发提供了实验基础。

关键词：基因重组 VPAC2受体激动剂糖尿病胰岛素

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条纹斑竹鲨肌钙蛋白基因克隆、重组表达及其抑制血管生长的活性研究(英文)

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药物生物技术 2013年第2期20卷 110-114页

作者：谢秋玲王亚玉陈先金李观贵张玲梁旭方暨南大学生命科学与技术学院细胞生物学系(生物医药研究院) 广东广州510632

从条纹斑竹鲨中克隆肌钙蛋白基因,在大肠杆菌中进行表达,并检测其抑制血管生长的活性。文献发现人肌钙蛋白(TnI)具有抑制肿瘤血管生成的功能,根据人TnI的基因序列在条纹斑竹鲨鱼肝脏中克隆出于鲨鱼TnI基因,在大肠杆菌中进行表达,获得重... 详细信息

从条纹斑竹鲨中克隆肌钙蛋白基因,在大肠杆菌中进行表达,并检测其抑制血管生长的活性。文献发现人肌钙蛋白(TnI)具有抑制肿瘤血管生成的功能,根据人TnI的基因序列在条纹斑竹鲨鱼肝脏中克隆出于鲨鱼TnI基因,在大肠杆菌中进行表达,获得重组蛋白,通过MTT实验和鸡胚尿囊膜(CAM)实验验证其抑制血管生长的活性。条纹斑竹鲨TnI的cDNA全长692 bp,其中开放阅读框552 bp(编码具有183个氨基酸多肽)。该蛋白与角鲨鲨鱼TnI的氨基酸同源性最高达85.2%,而与人类、鲑鱼、斑马鱼的TnI的氨基酸同源性分别为68.9%,64.5%和62.3%。在大肠杆菌中进行重组表达,纯化获得蛋白,MTT实验证明其具有抑制血管内皮细胞生长的功能,鸡胚尿囊膜实验显示其有抑制血管生长的功能。结论:条纹斑竹鲨TnI具有抑制血管生成的功能。

关键词：肌钙蛋白条纹斑竹鲨抗血管生成基因克隆

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垂体腺苷酸环化酶激活肽衍生多肽RHMP的重组制备及促角膜损伤修复的初步研究

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中国生物工程杂志 2013年第2期33卷 65-69页

作者：徐文娜马义叶祖禄罗天杰饶磊洪岸暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广州510632

利用基因工程技术高效制备具有促进角膜损伤修复功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生多肽RHMP,并在体外研究其生物学效应,为角膜疾病的治疗提供了新思路。采用基因重组技术表达重组肽RHMP,经Chitin-Beads柱纯化、HPLC及SDS-PAGE、... 详细信息

利用基因工程技术高效制备具有促进角膜损伤修复功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生多肽RHMP,并在体外研究其生物学效应,为角膜疾病的治疗提供了新思路。采用基因重组技术表达重组肽RHMP,经Chitin-Beads柱纯化、HPLC及SDS-PAGE、质谱鉴定后,研究其对小鼠角膜损伤修复的影响。实验结果表明:利用基因重组技术制备的PACAP衍生多肽RHMP的分子量为3.4kDa,纯度为96%;将重组肽作用于创伤后的小鼠角膜,12h、24h、36h、48h后角膜修复率分别为(49.58±1.74)%、(93.66±3.39)%、(99.6±0.43)%、(99.8±0.14)%,而对照组修复率分别为(9.76±1.58)%、(29.02±1.63)%、(55.10±1.49)%、(78.59±2.52)%,P<0.001,差异具有统计学意义,重组肽RHMP可显著促进小鼠角膜损伤修复。因此,利用以上确立的表达、纯化策略,可实现新型基因重组PACAP衍生多肽RHMP的高效制备,重组多肽RHMP可快速有效地促进损伤角膜的修复,从而有望成为一种新型角膜损伤治疗药物;同时,建立的小鼠角膜上皮损伤模型可用于相关药物的生物学效应研究。

关键词：基因重组垂体腺苷酸环化酶激活肽重组肽角膜损伤修复

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海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin的原核表达及其活性测定

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药物生物技术 2013年第3期20卷 198-202页

作者：董濠鋆张敏仪黎卓键吴国艺麦迪思沈巍徐明芳陈小佳暨南大学生物医药研究院/细胞生物学系暨南大学生物工程药物广东省重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广东广州510632 暨南大学生物工程学系广东广州510632

本文利用原核系统表达海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin,并纯化和鉴定其活性。首先PCR法从模板分别扩增SUMO以及Harobin基因,再重叠PCR方法获得SUMO-Harobin融合基因,经NdeI、BamHI双酶切后,连入pET3C质粒,构建pET3C-SUMO/Harobin重组质粒。重... 详细信息

本文利用原核系统表达海蛇丝氨酸蛋白酶Harobin,并纯化和鉴定其活性。首先PCR法从模板分别扩增SUMO以及Harobin基因,再重叠PCR方法获得SUMO-Harobin融合基因,经NdeI、BamHI双酶切后,连入pET3C质粒,构建pET3C-SUMO/Harobin重组质粒。重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导菌体表达,收集菌体分析发现大部分目的蛋白为包涵体。将获得的包涵体经尿素变性,用Ni-NTA亲和层析后,梯度透析复性融合蛋白。复性好的蛋白用Benzamidin Sepharose亲和层析纯化,得到高纯度的融合蛋白。进一步采用降解纤维蛋白原法测定融合蛋白活性。结果成功构建了pET3C-SUMO/Harobin重组载体,融合蛋白Harobin在原核系统中是以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变性复性,并结合两步纯化法获得了90%纯度的融合蛋白;经过测定纤维蛋白原降解能力,显示融合蛋白具有降解纤维蛋白原的活性。

关键词： Harobin SUMO 原核表达蛋白纯化纤维蛋白原降解

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重组TNF-α衍生物RMPT的制备及其抗肿瘤作用初步研究

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药物生物技术 2013年第1期20卷 21-25页

作者：叶祖禄马义徐文娜罗天杰饶磊洪岸暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广东广州510632

利用基因重组技术制备具有抗肿瘤作用的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)衍生多肽RMPT,并研究其体外生物学效应。PCR方法合成RMPT基因序列,定向插入高效表达载体pTXB1-MCS,在大肠杆菌ER2566中诱导表达重组融合蛋白并建立RMPT融合蛋白诱导表达的... 详细信息

利用基因重组技术制备具有抗肿瘤作用的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)衍生多肽RMPT,并研究其体外生物学效应。PCR方法合成RMPT基因序列,定向插入高效表达载体pTXB1-MCS,在大肠杆菌ER2566中诱导表达重组融合蛋白并建立RMPT融合蛋白诱导表达的优化体系。N端自动切割、纯化、HPLC制备获得RMPT,电泳和质谱鉴定其分子质量。CCK-8检测RMPT对肿瘤细胞的抑制作用。实验结果表明:重组工程菌可溶性RMPT融合蛋白最佳诱导表达条件为37℃、8 h、IPTG浓度0.75 mmol/L;DTT诱导蛋白内含肽自剪切固相纯化和HPLC制备重组肽RMPT,纯度大于95%,电泳和质谱鉴定其分子质量为3.7 ku,结果与理论值相符合,其产率为10.8 mg/L发酵液;体外研究表明,RMPT能够高效抑制多数肿瘤细胞增殖。

关键词： TNF-α衍生多肽基因重组表达优化抗肿瘤作用

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PACAP衍生多肽RDB的高效制备及其改善胰岛素抵抗作用的初步研究

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药物生物技术 2013年第2期20卷 141-145页

作者：罗天杰马义叶祖禄徐文娜饶磊洪岸暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广东广州510632

为了制备垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生多肽RDB并初步研究其改善脂肪细胞胰岛素抵抗的作用,利用基因工程技术,选用大肠杆菌偏爱密码子,以重叠延伸PCR方法合成RDB基因序列,定向插入到高效表达载体pKYB-MCS中,用大肠杆菌ER2566进行表... 详细信息

为了制备垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生多肽RDB并初步研究其改善脂肪细胞胰岛素抵抗的作用,利用基因工程技术,选用大肠杆菌偏爱密码子,以重叠延伸PCR方法合成RDB基因序列,定向插入到高效表达载体pKYB-MCS中,用大肠杆菌ER2566进行表达,融合蛋白经Chitin-Beads柱纯化后,利用β-巯基乙醇诱导蛋白内含肽的N端自剪切,释放目的肽,再用HPLC制备纯度较高的PACAP衍生多肽RDB,实现RDB的高效制备;利用制备的重组肽RDB研究其对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的改善作用及初步机制。制备的重组肽RDB的Mr为3.990 k,纯度大于95%,其产率为17.3 mg/L发酵产物;制备的RDB可明显促进胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖利用及信号分子IRS-1的表达。结果表明在确立的优化条件下可高效制备纯度较高的PACAP衍生多肽RDB(纯度≥95%),RDB能改善胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的胰岛素敏感性,其作用机制与胰岛素信号通路相关蛋白的表达有关。

关键词：垂体腺苷酸环化酶激活肽基因工程 3T3-L1细胞胰岛素抵抗重组衍生物

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