检索结果-内蒙古大学图书馆

基因组学与应用生物学 2019年第4期38卷 1767-1775页

作者：肖兴王金岭邱培陈学明马义范志勇暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广州510632 广州中医药大学第二附属医院广东省中医院广州510405

通过培养人血管内皮细胞株(CRL-1730)来建立颈性眩晕血瘀证患者血清诱导的细胞损伤模型,对细胞进行形态学鉴定后,实施体外压力刺激,建立对细胞的力学加载模型,同时用丹参酮ⅡA对细胞模型干预进行对比研究,检测细胞外液NO、ET,游离钙浓... 详细信息

通过培养人血管内皮细胞株(CRL-1730)来建立颈性眩晕血瘀证患者血清诱导的细胞损伤模型,对细胞进行形态学鉴定后,实施体外压力刺激,建立对细胞的力学加载模型,同时用丹参酮ⅡA对细胞模型干预进行对比研究,检测细胞外液NO、ET,游离钙浓度、内皮损伤标志物(血栓调节蛋白)含量变化。实验表明:与颈性眩晕血瘀对照组相比,该组压力组与加药组细胞形态变化不甚明显,且细胞活性、细胞内钙离子浓度、NO、ET含量比值及内皮损伤标志物含量差异具有统计学意义(p<0.01);颈性眩晕血瘀低压组与颈性眩晕血瘀高压组相比,低压力刺激干预在减少细胞损伤标志物的含量方面效果更佳,证实对血管内皮细胞的损伤起一定的保护作用,效果甚至优于药物组。

关键词：细胞力学内皮细胞颈性眩晕血瘀证丹参酮ⅡA

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纳米复合肽SCM的制备及其对Ⅱ型糖尿病治疗作用的研究

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中国生物工程杂志 2018年第5期38卷 17-23页

作者：党诗莹马义文涛肖兴洪岸暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心

一种新型的神经内分泌肽,垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）被发现在碳水化合物或脂质代谢中具有重要作用,但是易受二肽基肽酶IV的降解。将壳聚糖修饰的纳米硒（Se NPs-CTS,SC）作为载体,通过酰胺键负载连接PACAP衍生肽MPL-2,制备稳定性... 详细信息

一种新型的神经内分泌肽,垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）被发现在碳水化合物或脂质代谢中具有重要作用,但是易受二肽基肽酶IV的降解。将壳聚糖修饰的纳米硒（Se NPs-CTS,SC）作为载体,通过酰胺键负载连接PACAP衍生肽MPL-2,制备稳定性良好、具有协同治疗Ⅱ型糖尿病作用的纳米复合肽Se NPs-CTS-MPL-2（SCM）。实验结果表明,成功构建了高稳定性的纳米复合肽SCM,SCM的平均粒径为158nm,粒径较为集中,表面Zeta电位为35.6m V,较SC粒径及Zeta电位有明显的变化,说明MPL-2成功的连接到了SC表面。SCM在水溶液中可稳定存在40天,在水溶液中有较强的稳定性。体外缓释实验表明SCM在48h内不断释放活性多肽MPL-2,有效的延长了MPL-2的作用时间。Ⅱ型糖尿病模型鼠（db/db小鼠）腹腔注射SCM,葡萄糖耐量实验结果表明MPL-2负载到载体SC上构建了SCM后,SCM在体内不断缓释MPL-2,延长了MPL-2的作用时间,增强了MPL-2的药效。在8周连续用药治疗的过程中,SCM可显著提高Ⅱ型糖尿病模型小鼠的胰岛素敏感性,药效明显强于MPL-2和SC单独用药。构建了纳米复合肽SCM,可有效的延长MPL-2的作用时间,发挥治疗Ⅱ型糖尿病的生物学作用。

关键词：垂体腺苷酸环化酶激活肽衍生肽(MPL-2) 纳米硒 Ⅱ型糖尿病胰岛素敏感性葡萄糖耐量

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PACAP及其衍生物治疗糖尿病及其并发症的研究进展

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中国生物工程杂志 2018年第1期38卷 62-68页

作者：颜秋霞马义洪岸暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广州510632 广州医科大学附属第六医院/清远市人民医院生殖医学中心清远511518

垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）是近年新发现的神经多肽,属于促胰液素/胰高血糖素/血管活性肽（VIP）家族中的新成员,广泛分布于脑和外周组织器官,尤其在内分泌胰腺、性腺、呼吸和生殖系统,在能量代谢、神经保护、免疫系统等发挥重要... 详细信息

垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）是近年新发现的神经多肽,属于促胰液素/胰高血糖素/血管活性肽（VIP）家族中的新成员,广泛分布于脑和外周组织器官,尤其在内分泌胰腺、性腺、呼吸和生殖系统,在能量代谢、神经保护、免疫系统等发挥重要生理学功能。糖尿病是一种常见的主要以高血糖为特征的慢性代谢性疾病,糖尿病并发症日益严重威胁着人们的身体健康,已成为导致糖尿病患者致死、致残的主要原因。主要对PACAP治疗糖尿病及其并发症国内外研究的最新进展进行论述。

关键词：垂体腺苷酸环化酶激活肽糖尿病糖尿病并发症

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过表达FGFR2重组HEK293细胞株的构建和鉴定

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中国医药工业杂志 2017年第1期48卷 38-42页

作者：欧阳曼王海龙赵影李小燕陈小佳暨南大学生物医药研究院暨南大学细胞生物学系基因工程药物国家工程研究中心广东省生物工程药物重点实验室广东广州510632

构建含有成纤维细胞生长因子受体蛋白2(FGFR2)基因序列的重组慢病毒表达载体,与慢病毒包装质粒共转染包装细胞293T,获得过表达FGFR2的重组病毒颗粒;用重组病毒颗粒感染人胚肾细胞(HEK)293细胞,并用嘌呤霉素(20?g/ml)进行筛选,最终获得... 详细信息

构建含有成纤维细胞生长因子受体蛋白2(FGFR2)基因序列的重组慢病毒表达载体,与慢病毒包装质粒共转染包装细胞293T,获得过表达FGFR2的重组病毒颗粒;用重组病毒颗粒感染人胚肾细胞(HEK)293细胞,并用嘌呤霉素(20?g/ml)进行筛选,最终获得过表达FGFR2的重组细胞株。蛋白质免疫印迹(Western Blot)试验结果显示,该重组细胞株与空白对照HEK293细胞相比能高表达FGFR2,实时荧光定量核苷酸扩增试验(QPCR)和酶联免疫反应(ELISA)检测结果表明FGFR2蛋白下游相关通路的u PA等分子的转录和分泌水平上调,克隆形成试验也证实重组HEK293细胞促增殖能力增强。结果表明,该重组过表达FGFR2的细胞模型可用于下一步的功能研究以及靶向FGFR2药物的筛选。

关键词：成纤维细胞生长因子受体2 慢病毒包装过表达重组细胞株

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诱导型衰老细胞模型的建立及Klotho启动子截短型突变体的构建和活性检测

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2017年第2期38卷 143-149页

作者：郭淑军吴国艺王海龙赵影李小燕陈小佳暨南大学生物医药研究院暨南大学细胞生物学系基因工程药物国家工程研究中心广东省生物工程药物重点实验室广东省生物技术药物工程技术研究中心广东广州510632

目的:建立诱导型衰老细胞模型并检测抗衰老相关的Klotho基因启动子的不同截短型突变体的活性,为下一步研究奠定基础.方法:原代的人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)经过流式细胞术分离鉴定后,通过设置不同过氧化氢的浓度,按时间梯度摸索诱导原代... 详细信息

目的:建立诱导型衰老细胞模型并检测抗衰老相关的Klotho基因启动子的不同截短型突变体的活性,为下一步研究奠定基础.方法:原代的人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)经过流式细胞术分离鉴定后,通过设置不同过氧化氢的浓度,按时间梯度摸索诱导原代HUVEC细胞衰老的条件并最终通过SA-β-gal染色及定量PCR技术来确定其诱导条件.以全长的Klotho启动子为模版,通过PCR的方法,获得不同长度的Klotho启动子截短型突变体,并通过双萤光素酶报告基因系统检测试剂盒检测不同的启动子截短型突变体在诱导型衰老细胞内的激活程度.结果:培养基中过氧化氢浓度为600μM,处理96 h后,成功构建了诱导型衰老细胞模型;通过PCR的方法成功构建了长度分别为1 711 bp、1 262 bp、785 bp和735 bp的4个长度截短型突变体,并发现735 bp的截短型突变体在诱导型衰老细胞内的激活程度存在明显差异.结论:成功建立了诱导型衰老细胞模型,并成功构建了Klotho基因的启动子截短型突变体,检测和发现这些突变子在诱导型衰老细胞内的激活程度存在明显差异,为下一步治疗衰老相关疾病奠定了良好的工作基础.

关键词：诱导型衰老细胞模型 Klotho 启动子截短型突变体

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Fas凋亡抑制分子FAIM 1表达缺失诱发单纯性肥胖的初步研究

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中国生物工程杂志 2017年第6期37卷 37-42页

作者：李艳伟马义韩磊肖兴党诗莹文涛王得华范志勇暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广州510632 广州中医药大学第二附属医院<广东省中医院> 广州510405

利用肥胖患者血液和肥胖动物模型研究Fas凋亡抑制分子FAIM 1与单纯性肥胖的关系,为揭示单纯性肥胖发生的分子机理和诊治肥胖提供新的实验基础。检测40例单纯性肥胖患者和17例正常者血液白细胞的FAIM 1蛋白的表达量,分析FAIM 1与单纯性... 详细信息

利用肥胖患者血液和肥胖动物模型研究Fas凋亡抑制分子FAIM 1与单纯性肥胖的关系,为揭示单纯性肥胖发生的分子机理和诊治肥胖提供新的实验基础。检测40例单纯性肥胖患者和17例正常者血液白细胞的FAIM 1蛋白的表达量,分析FAIM 1与单纯性肥胖的相关性。为进一步揭示FAIM 1与单纯性肥胖发生、发展的内在关系,利用高脂饲料建立肥胖模型,并测定肥胖组和对照组大鼠的体重和血糖水平;造模成功的肥胖组大鼠和对照组大鼠禁食12h,麻醉心脏取血,分析血脂中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)的变化;取肥胖组和对照组大鼠的附睾脂肪垫和肾周脂肪,分析重量变化;取肥胖组和对照组大鼠,利用Western-blot检测FAIM 1及胰岛素受体β(IRβ)的表达变化。实验结果表明:与正常者相比,单纯性肥胖患者血液白细胞的FAIM 1表达量平均减少36.4%;与对照组相比,肥胖组大鼠血清TC、TG和LDL-C分别增加37.1%、25.6%和39.1%,而HDL-C则降低33.3%;肥胖组大鼠附睾脂肪垫和肾周脂肪分别是对照组的1.85倍和2.24倍;与对照组相比,肥胖组大鼠肝脏FAIM 1、IRβ的表达量分别降低45.9%和32.6%,与临床血液样本的检测结果一致。研究表明,FAIM 1表达与单纯性肥胖发生具有显著的负相关性,FAIM 1可成为单纯性肥胖诊断和治疗的新靶点。

关键词： Fas凋亡抑制分子肥胖高脂饮食临床血液胰岛素受体β

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新型基因重组PACAP衍生物MPL-2的制备及其抗2型糖尿病作用研究

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中国生物工程杂志 2017年第5期37卷 59-65页

作者：王得华马义韩磊肖兴李艳伟党诗莹范志勇文涛洪岸暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广州510632 广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院) 广州510405

利用基因工程技术高效制备具有治疗2型糖尿病功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生物MPL-2,并以2型糖尿病小鼠(db/db小鼠)为模型在体内研究其抗2型糖尿病的生物学作用。实验结果表明:利用基因工程技术制备的PACAP27衍生多肽MPL-2的... 详细信息

利用基因工程技术高效制备具有治疗2型糖尿病功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生物MPL-2,并以2型糖尿病小鼠(db/db小鼠)为模型在体内研究其抗2型糖尿病的生物学作用。实验结果表明:利用基因工程技术制备的PACAP27衍生多肽MPL-2的分子质量为3 902Da.,纯度达97%,其产率可达29.3mg/L发酵产物;在以db/db小鼠为模型的体内葡萄糖耐量实验中,MPL-2可有效促进小鼠胰岛素第一时相(5~15min)分泌,显著提高小鼠的葡萄糖耐受能力。在MPL-2的长效药效学实验中,经过8周连续用药治疗后,MPL-2可显著提高db/db小鼠的胰岛素敏感性,胰岛素耐量实验60min时MPL-2可将小鼠血糖降至初始值的63.52%;同时,在8周连续用药治疗过程中,与生理盐水(NS)处理组相比,MPL-2可有效降低db/db小鼠的体重、空腹血糖、饮食量、饮水量,分别低于NS组21.98%、21.46%、22.20%、60.07%,而且可显著改善db/db小鼠的血脂常数,生物学作用显著优于多肽BAY55-9837。建立了新型基因重组PACAP27衍生多肽MPL-2的高效制备技术,重组多肽MPL-2可有效改善2型糖尿病db/db小鼠的葡萄糖耐量、胰岛素敏感性、血脂常数,显著降低db/db小鼠的体重、空腹血糖、饮食和饮水量,从而发挥治疗2型糖尿病的生物学作用,可为MPL-2的药用研发提供实验数据。

关键词：基因工程垂体腺苷酸环化酶激活肽衍生物 2型糖尿病胰岛素敏感性葡萄糖耐量

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一种体外快速分离脂肪来源干细胞的方法

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激光生物学报 2017年第1期26卷 91-96页

作者：郭淑军刘伟金媛王强李雅丹陈小佳暨南大学生物医药研究院广东广州510632 暨南大学细胞生物学系广东广州510632 基因工程药物国家工程研究中心广东广州510632 广东省生物工程药物重点实验室广东广州510632 广东省生物技术药物工程技术研究中心广东广州510632

目的:以小鼠为模型,建立一种基于流式细胞仪为检测手段的快速分离脂肪来源干细胞的方法,解决间充质干细胞进入实际应用过程中遇到的难题。方法:取BALB/c小鼠腹股沟内侧的皮下脂肪组织,采用Ⅰ型胶原酶消化等系列措施,获取脂肪干细胞(adip... 详细信息

目的:以小鼠为模型,建立一种基于流式细胞仪为检测手段的快速分离脂肪来源干细胞的方法,解决间充质干细胞进入实际应用过程中遇到的难题。方法:取BALB/c小鼠腹股沟内侧的皮下脂肪组织,采用Ⅰ型胶原酶消化等系列措施,获取脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)。所得细胞分离培养4代后,流式细胞仪分选出CD73+CD45-ADSCs后成骨诱导分化。碱性磷酸酶染色和实时荧光定量PCR检测其分化情况。结果:刚分离培养的ADSCs细胞普遍呈圆形或椭圆形,传至第三代的细胞,非MSCs细胞逐渐被淘汰,剩余的细胞形态逐渐变得一致,细胞形态呈梭形。流式细胞仪检测发现ADSCs细胞表面抗原标记CD73+CD45-为20.7%。所得的ADSCs成骨诱导分化后碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色呈阳性,实时荧光定量PCR检测成骨标志基因发现它们表达上调,其中ALP的表达高达22倍。结论:本方法可以获得纯度较高的ADSCs,且耗时少成本低;且提示可采用该方法来获得大量的人源ADSCs用于组织工程修复。

关键词：脂肪间充质干细胞分离

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基于FGF2的新型抗肿瘤小分子短肽的研发

基于FGF2的新型抗肿瘤小分子短肽的研发

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中国生物工程学会第二届青年科技论坛暨首届青年工作委员会学术年会

作者：陈小佳欧阳曼王海龙管文华 Ruiwu Liu Kit.S Lam 洪岸暨南大学生物医药研究院&暨南大学细胞生物学系基因组药物国家工程研究中心广东省生物工程药物重点实验室 Department of Biochemistry and Molecular Medicine University of California Davis University of California Davis NCI-designated Comprehensive Cancer Center

成纤维细胞生长因子受体(Fibroblast growth factor receptors,FGFRs)是酪氨酸激酶受体家族的重要成员,包括FGFR1,FGFR2,FGFR3,FGFR4和FGFRL1等。它们在肿瘤的发生发展中也扮演着关键的作用,因此也是非常重要的靶点。为开发靶向FGFR2的... 详细信息

成纤维细胞生长因子受体(Fibroblast growth factor receptors,FGFRs)是酪氨酸激酶受体家族的重要成员,包括FGFR1,FGFR2,FGFR3,FGFR4和FGFRL1等。它们在肿瘤的发生发展中也扮演着关键的作用,因此也是非常重要的靶点。为开发靶向FGFR2的小分子短肽,依据FGF2的生物学活性特点,我们采用生物软件

关键词：小分子短肽抗肿瘤活性

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新型人血清白蛋白特异结合肽ML的筛选及鉴定

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中国生物工程杂志 2015年第5期35卷 74-80页

作者：马义赵绍军洪岸暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心广州510632

利用噬菌体展示技术筛选和鉴定新型人血清白蛋白(HSA)特异结合7肽,分析与垂体腺苷酸环化酶激活肽27(PACAP27)构成的融合多肽ML-PACAP27与HSA的亲和结合力,以确定筛选的7肽(ML1和ML2)在与其他药物多肽或蛋白融合状态下仍具有较高的HSA结... 详细信息

利用噬菌体展示技术筛选和鉴定新型人血清白蛋白(HSA)特异结合7肽,分析与垂体腺苷酸环化酶激活肽27(PACAP27)构成的融合多肽ML-PACAP27与HSA的亲和结合力,以确定筛选的7肽(ML1和ML2)在与其他药物多肽或蛋白融合状态下仍具有较高的HSA结合活力。利用噬菌体展示7肽库,经四轮筛选、筛选克隆的DNA测序、酶联免疫吸附技术分析(ELISA)初步鉴定筛选克隆与HSA的亲和作用,并利用等离子共振技术(SPR)定量测定合成的ML-PACAP27融合多肽与人血清白蛋白的亲和力常数。实验结果表明:经筛选获得2个与人血清白蛋白特异性结合的7肽序列,其氨基酸序列分别为:ML1:LKSCKPL和ML2:SLKSHAL;ELISA分析结果显示,含有ML1和ML2的噬菌体均可亲和结合HSA,而且ML2的亲和结合作用高于ML1;SPR分析结果显示,ML1-PACAP27和ML2-PACAP27与HSA的解离常数(KD)分别为:8.1×10-6mol/L和3.7×10-6mol/L,ML1-PACAP27与HSA的结合力高于ML1-PACAP27。筛选和鉴定了两个可与HSA特异性结合的7肽序列,该7肽序列可用于特异偶联HSA的长效分子药物的重组融合表达或设计,可为延长分子药物的半衰期及新型药物研发提供新工具。

关键词：人血清白蛋白噬菌体展示特异性结合药物半衰期

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