检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2013年第5期40卷 461-470页

作者：苏焱孙晗笑李秀英莫雪梅张光暨南大学药学院基因组药物研究所广州510632

通过减少炎性组织或细胞趋化因子及炎性因子的表达量能将炎症性病理过程抑制在起始阶段.我们通过体外构建人外周血单个核细胞LPS激活的急性炎症模型及内毒素耐受模型,进行噬菌体肽库亲和筛选,ELISA检测与炎性PBMC的结合能力,分泌抑制实... 详细信息

通过减少炎性组织或细胞趋化因子及炎性因子的表达量能将炎症性病理过程抑制在起始阶段.我们通过体外构建人外周血单个核细胞LPS激活的急性炎症模型及内毒素耐受模型,进行噬菌体肽库亲和筛选,ELISA检测与炎性PBMC的结合能力,分泌抑制实验筛选抑制性噬菌体克隆,经趋化抑制、竞争结合及生成抑制实验检测体外活性,大鼠足肿胀及关节炎模型检验多肽体内作用,SqRT-PCR检测趋化因子及TTP的mRNA水平,探讨其作用机制.筛选到的目标多肽CI-S5趋化抑制率达到48.72%,明显抑制噬菌体阳性克隆P15与LPS激活PBMC的结合,动物试验能明显降低大鼠足肿胀及关节炎症.机制研究显示,CI-S5多肽能降低3种趋化因子的表达量,并调节TTP使其表达增加,提示CI-S5能够靶向炎症前期PBMC,为炎症治疗提供了针对早期急性炎症反应的广谱小分子抑制肽.

关键词：内毒素耐受混合靶标噬菌体展示广谱趋化因子抑制生物活性肽 TTP

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人类巨细胞病毒编码US28受体拮抗性多肽的筛选鉴定及体外活性研究

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生物化学与生物物理进展 2010年第6期37卷 618-626页

作者：李璐何滔莫雪梅李秀英张光孙晗笑暨南大学药学院基因组药物研究所广州510632

立足US28的广谱趋化因子结合活性,寻找拮抗剂多肽的先导物.通过预测US28的结合模拟位设计多肽序列,合成相关多肽,再利用自建的25种趋化因子随机构成的噬菌体12肽库筛选结合模拟位,竞争性ELISA方法验证,从而获得30个阳性克隆,测序并推导... 详细信息

立足US28的广谱趋化因子结合活性,寻找拮抗剂多肽的先导物.通过预测US28的结合模拟位设计多肽序列,合成相关多肽,再利用自建的25种趋化因子随机构成的噬菌体12肽库筛选结合模拟位,竞争性ELISA方法验证,从而获得30个阳性克隆,测序并推导氨基酸序列,得到7种序列:GSESLNAHCALW、EIDGFNAHCALL、VIARLNAHCALR、ATECLNAHCALW、VIESLNAHCALW、DNGSINAHCALL及VKKTLNAHCALR.所有序列富含疏水氨基酸,其中8个克隆有LNAHCAL保守序列.采用趋化抑制实验检测多肽对生理性趋化因子引起的细胞迁移活性的影响,流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度变化.结果表明,利用人源趋化因子序列构建肽库并筛选有效序列的方法取得成功,筛选出的阳性克隆保守序列LNAHCAL可以模拟HumanMIP-1β与US28N端的结合位,从而与合成多肽H22结合,多肽H22可以阻断受体结合生理性趋化因子形成的趋化作用,本身不引起趋化运动,不影响胞内信号转导和细胞自然活性,具有广谱趋化因子拮抗剂的可能性.

关键词：人类巨细胞病毒 US28 结合模拟位趋化抑制拮抗剂

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C25P肽对小鼠的急性毒性及体外致癌作用

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南方医科大学学报 2011年第6期31卷 943-948页

作者：莫雪梅孙晗笑汤曼莉暨南大学药学院基因组药物研究所广东广州510632

目的研究C25P肽对小鼠的急性毒性作用以及体外致癌性,为临床应用提供依据。方法采用最大耐受剂量法(MTD)进行对小鼠的急性毒性试验。对照组小鼠尾静脉注射生理盐水(40ml/kg);用药组小鼠尾静脉注射C25P多肽(3.64g/kg)。给药后连续观察14d... 详细信息

目的研究C25P肽对小鼠的急性毒性作用以及体外致癌性,为临床应用提供依据。方法采用最大耐受剂量法(MTD)进行对小鼠的急性毒性试验。对照组小鼠尾静脉注射生理盐水(40ml/kg);用药组小鼠尾静脉注射C25P多肽(3.64g/kg)。给药后连续观察14d。14d处死小鼠,测定血常规及血液生化学指标,并解剖小鼠进行病理组织学检查。并采用染色体畸变试验、细胞转化试验、非锚定依赖性生长试验对C25P多肽进行体外的致癌性评价。结果未出现小鼠死亡,用药组有3只小鼠发生轻微毒性反应;每组小鼠体质量均有增长,各组间的平均增长率无显著差异;所测血液生化指标中,用药组GPT(谷丙转氨酶)值比对照组呈显著性升高(P<0.05);用药组ALP(碱性磷酸酶)值比对照组呈显著性降低(P<0.05);大部分小鼠器官正常,发生毒性反应的3只小鼠的肺、脾、肝脏出现病变。C25P多肽的染色体畸变试验、细胞转化试验、非锚定依赖性生长试验均呈阴性。结论 C25P肽对受试动物无明显急性毒性作用以及无明显致癌性作用,属于低毒类药物。

关键词：急性毒性致癌性安全性 C25P肽

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荧光定量PCR法研究重组病毒巨噬细胞炎症蛋白联合用药体外抗HIV-1的作用

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中国药学杂志 2010年第11期45卷 814-817页

作者：孙晗笑莫雪梅闫莉李秀英张光暨南大学药学院基因组药物研究所广州510632

目的建立荧光定量PCR技术测定HIV-1病毒载量的方法 ,并用于研究重组病毒巨噬细胞炎症蛋白(rvMIP)联合用药前后的病毒载量变化。方法选择HIV-1的gag和env保守区域设计引物,建立荧光定量PCR测定HIV-1病毒载量的体系。分别设置rvMIP、AZT、... 详细信息

目的建立荧光定量PCR技术测定HIV-1病毒载量的方法 ,并用于研究重组病毒巨噬细胞炎症蛋白(rvMIP)联合用药前后的病毒载量变化。方法选择HIV-1的gag和env保守区域设计引物,建立荧光定量PCR测定HIV-1病毒载量的体系。分别设置rvMIP、AZT、T-20、rvMIP+AZT、rvMIP+T-20 5个不同用药组,运用荧光定量PCR法检测用药后各组病毒载量的变化。结果所建立的荧光定量PCR体系的检测下限为101拷贝,其标准曲线的相关系数为0.997 4,斜率为-2.524,截距为29.716;除了浓度6 ***-1的rvMIP组、AZT组、T-20组外,各用药组病毒载量值与阳性对照均有差别,且随药物浓度增加,病毒载量逐渐减小。各相同浓度用药组病毒载量相比,rvMIP+T-20组(rvMIP+AZT组(rvMIP组(T-20组(AZT组。结论所建立的荧光定量PCR检测体系可靠;rvMIP与T-20或AZT联用可以增强rvMIP对HIV-1病毒的抑制作用。

关键词：荧光定量PCR 重组病毒巨噬细胞炎症蛋白 HIV-1病毒载量

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病毒受体拮抗性诱获配体H9的体外活性及其对人趋化因子受体CX_3CR1的作用

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第6期27卷 597-601页

作者：张敏孙晗笑莫雪梅李秀英张光暨南大学药学院基因组药物研究所广东广州510632

目的:来源于US28受体N末端的诱惑配体多肽H9,以阐明H9的体外活性及其对细胞表面趋化因子受体CX3CR1内化及调变研究,探讨H9对人趋化因子受体CX3CR1的作用及影响。方法:立足US28的广谱趋化因子结合活性,得到趋化因子受体拮抗性多肽H9。采... 详细信息

目的:来源于US28受体N末端的诱惑配体多肽H9,以阐明H9的体外活性及其对细胞表面趋化因子受体CX3CR1内化及调变研究,探讨H9对人趋化因子受体CX3CR1的作用及影响。方法:立足US28的广谱趋化因子结合活性,得到趋化因子受体拮抗性多肽H9。采用趋化抑制实验检测多肽对生理性趋化因子引起的细胞迁移活性的影响,流式细胞术方法(FCM)检测细胞内钙离子浓度变化,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别定性、定量检测CX3CR1的内化,以阐明H9的生物活性及其对人源受体CX3CR1的作用及其机制。结果:多肽H9可以阻断受体结合生理性趋化因子形成的趋化作用,本身不引起趋化运动,不影响胞内信号转导和细胞自然活性;200 ng/mL H9在给药后的最初50min钟内能使细胞表面受体CX3CR1内化达到最大值,内化率约为70%,第100分钟,内化到细胞内的CX3CR1逐渐再循环到细胞表面。证明了H9能引起细胞表面受体CX3CR1内化,内化的受体部分再循环到细胞表面。结论:H9是一种趋化因子受体抑制短肽,影响人受体CX3CR1的内化,但内化后受体再循环到细胞表面,对人受体CX3CR1生理功能没有明显影响,可以作为特异性抗病毒多肽。

关键词：病毒受体趋化因子受体趋化抑制诱惑配体趋化因子受体拮抗剂受体内化

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vMIP-Ⅱ-TfN融合蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化

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中国生物工程杂志 2011年第10期31卷 23-28页

作者：王峰孙晗笑李秀英张光莫雪梅暨南大学药学院基因组药物研究所广州510632

目的:构建pPIC-vMIP-II-TfN酵母表达载体,表达纯化vMIP-II-TfN融合蛋白。方法:利用PCR方法扩增编码人转铁蛋白N端半分子的基因片段,通过酶切、连接、转化等分子克隆方法构建pPIC-vMIP-II-TfN酵母表达载体;电击法转化X33酵母菌;用甲醇诱... 详细信息

目的:构建pPIC-vMIP-II-TfN酵母表达载体,表达纯化vMIP-II-TfN融合蛋白。方法:利用PCR方法扩增编码人转铁蛋白N端半分子的基因片段,通过酶切、连接、转化等分子克隆方法构建pPIC-vMIP-II-TfN酵母表达载体;电击法转化X33酵母菌;用甲醇诱导重组酵母菌表达融合蛋白,利用硫酸铵沉淀、透析、Ni-NTA层析等技术进行蛋白纯化,SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达和纯化情况,利用趋化实验进行纯化蛋白活性检测。结果:经过两次PCR扩增了一个长约1.1kb的包含Xba I酶切位点的IgG3-TfN基因片段,插入pPIC-vMIP-II的Xba I酶切位点,经菌液PCR鉴定获得重组子,测序结果表明构建载体pPIC-vMIP-II-TfN的表达框正确无误,转化X33酵母菌,用甲醇诱导表达出48kDa的vMIP-II-TfN融合蛋白,经硫酸铵沉淀、透析、Ni-NTA纯化后得到纯度约为95%的vMIP-II-TfN融合蛋白。Western印迹结果表明融合蛋白能与转铁蛋白抗体特异性结合。活性检测表明经过诱导表达的vMIP-II-TfN融合蛋白具有趋化抑制活性。结论:成功构建pPIC-vMIP-II-TfN酵母表达载体,重组酵母工程菌经甲醇诱导成功表达出vMIP-II-TfN融合蛋白,纯化后的vMIP-II-TfN融合蛋白具有趋化抑制活性。

关键词： vMIP-II 转铁蛋白蛋白表达纯化

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趋化因子及其受体与艾滋病的研究进展

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中国新药杂志 2007年第16期16卷 1243-1246页

作者：王峰孙晗笑暨南大学药学院基因组药物研究所暨南大学药学院基因组药物研究所广州510632

HIV感染和艾滋病(AIDS)是严重危害人类健康的疾病,用抗HIV药物可以明显延缓AIDS进程降低死亡率。趋化因子是一系列结构相似的具有趋化功能的细胞因子。趋化因子受体CXCR4和CCR5是HIV感染重要的辅助受体,这一发现为进一步了解HIV感染机制... 详细信息

HIV感染和艾滋病(AIDS)是严重危害人类健康的疾病,用抗HIV药物可以明显延缓AIDS进程降低死亡率。趋化因子是一系列结构相似的具有趋化功能的细胞因子。趋化因子受体CXCR4和CCR5是HIV感染重要的辅助受体,这一发现为进一步了解HIV感染机制和AIDS治疗提供了新的思路。现主要综述趋化因子及其受体的结构和功能,以及它们在抗HIV感染方面的作用。

关键词：趋化因子趋化因子受体辅助受体艾滋病

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先天性心脏病相关易感基因的预测性研究

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中国病理生理杂志 2011年第5期27卷 928-933页

作者：刘毅李秀英莫雪梅张光孙晗笑暨南大学药学院基因组药物研究所广东广州510632

目的:应用生物信息学预测先天性心脏病相关易感基因,为先天性心脏病的临床诊断和治疗提供理论依据。方法:通过OMIM数据库获取已知的先天性心脏病相关易感基因。将已知的疾病相关易感基因作为"种子基因",利用蛋白质相互作用网... 详细信息

目的:应用生物信息学预测先天性心脏病相关易感基因,为先天性心脏病的临床诊断和治疗提供理论依据。方法:通过OMIM数据库获取已知的先天性心脏病相关易感基因。将已知的疾病相关易感基因作为"种子基因",利用蛋白质相互作用网络寻找邻近节点中富集了疾病相关易感基因的"种子基因",并视其邻居基因为候选的疾病相关易感基因。对已知的疾病相关易感基因进行GO、Pathway和Human Phenotype富集分析,并据此注释候选基因;运用文献挖掘法对候选基因进行验证性分析。结果:通过OMIM共获取已知的先天性心脏病相关易感基因28个,发现邻近节点中富集了疾病相关易感基因的"种子基因"4个,得到候选的疾病相关易感基因20个,通过功能富集分析从中预测出新的先天性心脏病易感基因7个。文献挖掘发现这7个基因在心脏发育过程中均起着极其重要的作用。结论:通过生物信息学分析发现7个候选基因与已知的先天性心脏病相关易感基因关系密切,提示该病的发生是多种基因相互作用的结果,为后续深化该病机制研究提供了有效的指导。

关键词：心脏病,先天性蛋白质相互作用网络疾病易感基因功能富集分析

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人TRIM5α嵌合体蛋白与HIV-1gag蛋白体外分子间相互作用的鉴定

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中国生物工程杂志 2009年第5期29卷 1-5页

作者：孟祥平李秀英孙晗笑莫雪梅暨南大学药学院基因组药物研究所广州510632

目的:表达和纯化人TRIM5α嵌合体蛋白[TRIM5αH(R328-332)],并探讨该蛋白和HIV-1gag间的相互作用。方法:将构建的TRIM5α嵌合体pET28aTRIM5αH(R328-332),转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组表达质粒pETTRIM5αH(R328-332),30℃下经IPTG诱导,该融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。获得的重组的蛋白再经过纯化,SDS-PAGE分析重组蛋白,并用免疫共沉淀技术和ELISA等检测重组蛋白与HIV-1gag间的相互作用。结果:构建的重组质粒在大肠杆菌中获得表达,重组TRIM5αH(R328-332)蛋白经纯化复性后,通过免疫共沉淀和ELISA等技术,证明TRIM5αH(R328-332)蛋白能够与HIV-1gag间的相互作用。结论:在大肠杆菌表达系统中成功表达了重组TRIM5αH(R328-332)蛋白,并且证实其在体外与HIV-1gag有结合作用。

关键词： TRIM5α 纯化免疫共沉淀 ELISA

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多靶点趋化因子功能抑制剂的研究进展

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华西药学杂志 2010年第2期25卷 232-235页

作者：刘毅孙晗笑暨南大学药学院基因组药物研究所广东广州510632

趋化因子系统作为各种急慢性炎症疾病新的治疗靶点,由于自身的冗余性,使得传统的以单一趋化因子或其受体为靶标的特异性拮抗剂的效果甚微,开发具有多靶点抑制趋化因子功能的药物已成为必然。

关键词：趋化因子多靶点抑制炎症

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