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第三军医大学学报 2017年第24期39卷 2352-2358页

作者：邓琴傅若秋高宁第三军医大学药学院生药学教研室重庆400038

目的探讨千金藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬的影响及其机制。方法激光共聚焦显微镜观察千金藤素对转染了EGFP-LC3、tf LC3(m RFP-EGFP-LC3)质粒的MDA-MB-231细胞自噬体形成及自噬流变化的影响;Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、p62... 详细信息

目的探讨千金藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬的影响及其机制。方法激光共聚焦显微镜观察千金藤素对转染了EGFP-LC3、tf LC3(m RFP-EGFP-LC3)质粒的MDA-MB-231细胞自噬体形成及自噬流变化的影响;Western blot检测自噬相关蛋白LC3B、p62以及Beclin1的表达水平。激光共聚焦显微镜观察千金藤素、Bafilomycin A1、Rapamycin分别对转染了EGFP-LC3、tf LC3(m RFP-EGFPLC3)质粒的MDA-MB-231细胞自噬体形成及自噬流变化的影响;Western blot检测溶酶体相关膜蛋白LAMP1、LAMP2的表达。结果千金藤素处理后细胞中的自噬体(EGFP-LC3荧光团)数量明显多于对照组[(30.40±6.42)vs(5.00±2.12),P<0.01],自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、p62的表达也呈量效和时效增多。转染tf LC3质粒后,千金藤素组和Bafilomycin A1组红绿荧光重叠呈现较多的黄色荧光团,而Rapamycin组出现较多的红色荧光团。千金藤素联用Bafilomycin A1并未进一步升高p62和LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平,但联用Rapamycin明显升高了LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平,同时,逆转了Rapamycin导致的p62蛋白表达水平减少。千金藤素既不影响对溶酶体的染色,也不减少LAMP1、LAMP2蛋白的表达水平,但影响了m RFP-LC3和m GFP-LAMP1的共定位。结论千金藤素通过阻断自噬体与溶酶体的融合抑制MDA-MB-231细胞自噬体降解。

关键词：千金藤素 MDA—MB-231 自噬溶酶体

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生姜中姜酚类活性成分的抗肿瘤作用及其机制

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第三军医大学学报 2017年第9期39卷 884-890页

作者：刘鑫张宏伟傅若秋高宁第三军医大学药学院生药学教研室重庆400038

目的从生姜中提取、分离和鉴定姜酚类物质,初步研究其抗肿瘤作用的分子机制。方法采用CO_2超临界流体对生姜原料进行提取,通过硅胶、RP-C_(18)、Sephadex LH-20和HPLC等色谱方法进行分离和纯化,进而借助MS和NMR等光谱方法鉴定化合物结构... 详细信息

目的从生姜中提取、分离和鉴定姜酚类物质,初步研究其抗肿瘤作用的分子机制。方法采用CO_2超临界流体对生姜原料进行提取,通过硅胶、RP-C_(18)、Sephadex LH-20和HPLC等色谱方法进行分离和纯化,进而借助MS和NMR等光谱方法鉴定化合物结构,然后采用MTT法检测化合物对不同肿瘤细胞活性的抑制作用,采用流式细胞术及Western blot检测其抑制肿瘤细胞活性的变化。结果从生姜中提取分离得到5个姜酚类化合物,分别为4,6,8,10-姜酚和5'-羟基-6-姜酚。其中8-姜酚和10-姜酚对多种肿瘤细胞的活性均有较好的抑制作用,尤以10-姜酚作用最强,给药72 h后其对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞的IC_(50)分别为(25.80±1.39)、(35.29±2.70)μmol/L。流式细胞术检测发现8-姜酚和10-姜酚可导致乳腺癌细胞的G_1期阻滞,其中10-姜酚作用于MDA-MB-231和MCF-7细胞24 h后G_1期细胞的百分比分别为(66.73±2.93)%、(66.59±2.49)%,相对于对照组的(47.39±1.97)%和(49.17±3.52)%,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测结果显示,8-姜酚和10-姜酚可下调MDA-MB-231和MCF-7细胞中G_1期相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达;并可降低MAPK信号通路中ERK的磷酸化水平,增强P38的磷酸化水平。结论从生姜中提取出的8-姜酚和10-姜酚具有明显的抑制肿瘤细胞活性的作用,其机制可能与其影响MAPK通路中ERK、P38磷酸化水平,导致细胞G_1期阻滞有关。

关键词：姜酚抗肿瘤提取结构鉴定细胞周期

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PEDF下调HIF-1α表达抑制缺氧状态下NSCLC细胞增殖、迁移的作用机制

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现代肿瘤医学 2019年第17期27卷 3005-3009页

作者：马建梅陈承张星星张彦史红阳尹郸丹西安医学院临床医学院诊断学教研室陕西西安710021 西安市第一医院眼科陕西西安710002 西安医学院药学院生药学教研室陕西西安710021 西安交通大学第二医院呼吸科陕西西安710004 空军军医大学唐都医院血液科陕西西安710038

目的:研究色素上皮衍生因子(PEDF)对缺氧状态下非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法:体外培养NSCLC细胞A549,氯化钴(CoCl2)100μmol/L模拟缺氧环境。实验分为4组:正常对照组(A组)、氯化钴干... 详细信息

目的:研究色素上皮衍生因子(PEDF)对缺氧状态下非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法:体外培养NSCLC细胞A549,氯化钴(CoCl2)100μmol/L模拟缺氧环境。实验分为4组:正常对照组(A组)、氯化钴干预组(B组)、氯化钴+PEDF 50 ng/ml干预组(C组)及氯化钴+PEDF 200 ng/ml干预组(D组)。MTT检测各组细胞增殖能力,进行划痕实验,在光镜下观察实验组和对照组细胞的移行情况;进行Transwell小室侵袭实验,计算细胞穿透数;进行ELISA法检测各组细胞培养液上清中HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果:细胞增殖能力:B组较A组增加,C组较B组降低,D组较C组降低,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞迁移能力:B组较A组增加,C组较B组降低,D组较C组降低,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞穿透数:B组较A组增多,C组较B组减少,D组较C组减少,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05);HIF-1α和VEGF的表达水平:B组较A组升高,C组较B组下降,D组较C组下降,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:肺癌A549细胞在缺氧环境较常氧具有更强的增殖力和移行能力;可以分泌HIF-1α,HIF-1α对VEGF的表达有一定的促进作用。PEDF对缺氧状态下A549细胞高表达的VEGF具有一定抑制作用,且该抑制作用可能与PEDF调控HIF-1α有关。

关键词： NSCLC PEDF HIF-1α 增殖迁移

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不同产地薏苡中有效成分甘油三油酸酯和薏苡素的测定

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中草药 2017年第3期48卷 578-581页

作者：杨阳杜疏炀孙艺琦韩婷贾敏秦路平福建中医药大学药学院福建福州350108 第二军医大学药学院生药学教研室上海200433

目的比较不同产地薏苡Coix lacrymajobi有效成分甘油三油酸酯和薏苡素量的差异。方法甘油三油酸酯的检测以Discovery C_(18)为色谱柱,乙腈-二氯甲烷(66∶34)为流动相,体积流量0.7 m L/min,柱温30℃,蒸发光散射检测器,漂移管温度45℃,氮... 详细信息

目的比较不同产地薏苡Coix lacrymajobi有效成分甘油三油酸酯和薏苡素量的差异。方法甘油三油酸酯的检测以Discovery C_(18)为色谱柱,乙腈-二氯甲烷(66∶34)为流动相,体积流量0.7 m L/min,柱温30℃,蒸发光散射检测器,漂移管温度45℃,氮气体积流量1.5 L/min;薏苡素检测采用HPLC法,以Agilent ZORBAX SB-C_(18)为色谱柱,乙腈-水(25∶75)为流动相,体积流量1 m L/min,柱温25℃,检测波长232 nm。结果浙江泰顺薏苡仁中甘油三油酸酯量最高,达到1.04%,质量分数最低的是安徽亳州产薏苡仁,为0.53%;上海产薏苡中的薏苡素量最高,达到3.469 7 mg/g,但安徽产薏苡中的薏苡素质量分数最低,为0.619 3 mg/g。结论 8个不同产地的薏苡中甘油三油酸酯和薏苡素的量均存在较大差异,其中浙江、福建2地产薏苡甘油三油酸酯和薏苡素量相对较高,药材品质较佳。

关键词：薏苡甘油三油酸酯薏苡素有效成分 HPLC 康莱特

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蔓越莓提取物对脂多糖诱导RAW246.7细胞炎症反应的抑制作用

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食品研究与开发 2018年第16期39卷 1-7页

作者：高纳影赵艳敏刘岱琳孙华庚高晓霞广东药科大学药学院广东广州510006 中国人民武装警察部队后勤学院生药学与药剂学教研室天津300162 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司天津300309

研究蔓越莓提取物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW246.7细胞炎症反应的抑制作用及其作用机制。筛选LPS浓度建立细胞炎症模型;采用噻唑蓝[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide,MTT]法测定蔓越莓提取物对RAW246.7细胞活力的影响;利用4,6-联脒-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色法观察蔓越莓提取物对细胞核形态的影响;采用荧光分析法测定一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的活力;酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒测定IL-1、IL-6、TNF-α细胞因子的水平;蛋白质印迹法(Western-Blot)法检测Nrf2/NF-κB通路相关蛋白的水平。实验结果显示5μg/m L的LPS建立炎症模型,LPS与细胞共培养24 h时炎症水平达到最高,蔓越莓提取物在5μg/m L^400μg/m L范围内对RAW246.7细胞无显著性毒性作用,细胞核形态完整,无明显损伤;与模型组比较,蔓越莓提取物在无毒性浓度范围内显著降低LPS诱导RAW246.7细胞炎症反应的NOS活力和IL-1、IL-6、TNF-α水平,且呈现出剂量依赖关系。Western-Blot实验结果显示蔓越莓提取物量效依赖性地降低Keap1、IKKα/β、NF-κBp65蛋白表达的水平,而上调了Nrf2、HO-1的蛋白表达水平。结果证明蔓越莓提取物能够有效地抑制LPS诱导的炎症反应,其作用机制可能与经典的抗氧化通路Keap1/Nrf2/HO-1和炎症通路NF-κBp65蛋白表达有关。

关键词：蔓越莓提取物脂多糖 RAW246.7细胞炎症

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卫气营血传变规律与重症流感机体免疫功能的相关性及中药防治流感的策略

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中国中西医结合杂志 2017年第5期37卷 603-606页

作者：朱海燕力弘史训龙陈道峰复旦大学药学院微生物与生化药学教研室上海201203 复旦大学药学院药理学与生物化学教研室上海201203 复旦大学药学院生药学教研室上海201203

重症流感属中医学温病范畴,辨证以卫气营血辨证为纲。本文针对卫分证、气分证、营分血分证的病机与机体抗病毒的免疫调控的相关性进行了阐释,认为卫分、气分证候阶段,是免疫调控药物能有效发挥治疗流感作用的阶段。若将温病辨证与中药... 详细信息

重症流感属中医学温病范畴,辨证以卫气营血辨证为纲。本文针对卫分证、气分证、营分血分证的病机与机体抗病毒的免疫调控的相关性进行了阐释,认为卫分、气分证候阶段,是免疫调控药物能有效发挥治疗流感作用的阶段。若将温病辨证与中药药理有机结合起来应用,既辨证,又辨明其免疫调节药理,对临床上中药的选择大有裨益,是中医药与现代医学结合的一种方式。

关键词：卫气营血辨证温病重症流感免疫调节

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基于ISSR标记的麻花艽遗传多样性分析

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中草药 2017年第15期48卷 3168-3174页

作者：王笠赵志礼倪梁红嘎务米玛上海中医药大学中药学院生药学教研室上海201203 西藏藏医学院西藏拉萨850000

目的探讨秦艽基原植物之一麻花艽Gentiana straminea的遗传多样性,并构建DNA指纹谱。方法在其自然分布区广泛取样,共涉及西藏、青海、甘肃及四川等地28个居群83份样本,应用ISSR分子标记技术,POPGEN软件分析遗传信息参数,NTSYS软件构建... 详细信息

目的探讨秦艽基原植物之一麻花艽Gentiana straminea的遗传多样性,并构建DNA指纹谱。方法在其自然分布区广泛取样,共涉及西藏、青海、甘肃及四川等地28个居群83份样本,应用ISSR分子标记技术,POPGEN软件分析遗传信息参数,NTSYS软件构建亲缘关系UPGMA聚类图。结果从100条引物中筛出7条多态性好、条带清晰的引物用于ISSR分析。共检测到95个条带,其中多态性条带88个,多态性条带百分率(PPL)为92.63%;麻花艽居群间的期望杂合度(H_e)为0.288 2,多样性信息指数(I_m)为0.437 1,种群间基因分化系数(G_(st))为0.678 3,基因流(N_m)为0.237 1,遗传距离为0.074 3~0.490 0。UPGMA树将麻花艽居群主要分为2大支。结论麻花艽种群遗传多样性水平较高,居群间遗传多样性水平高于居群内;其遗传变异主要存在于居群间;遗传特性与地理分布具有一定相关性。该工作可为麻花艽品种鉴定、物种就地保护、探讨环境等因素对于遗传分化的影响及药材道地性研究提供基础资料。

关键词：麻花艽 ISSR 遗传多样性 DNA指纹谱多态性条带百分率

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西红花苷保护心血管疾病药理研究进展

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中华中医药学刊 2018年第2期36卷 336-340页

作者：朱安运邓亮孙琳夏嫱王雅溶李小波杜联峰张浩陈阳遵义医学院珠海校区珠海市中药基础及应用研究重点实验室广东珠海519000 昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室云南昆明650500 四川大学华西药学院生药学教研室四川成都610041

西红花苷来源于传统中药栀子和名贵药材西红花,是天然界存在的唯一水溶性类胡萝卜素,主要包括西红花苷-1、西红花苷-2、西红花苷-3、西红花苷-4和顺式西红花苷-1。多年来的研究显示,这类成分具有显著的抗心血管疾病药理活性。综合近10... 详细信息

西红花苷来源于传统中药栀子和名贵药材西红花,是天然界存在的唯一水溶性类胡萝卜素,主要包括西红花苷-1、西红花苷-2、西红花苷-3、西红花苷-4和顺式西红花苷-1。多年来的研究显示,这类成分具有显著的抗心血管疾病药理活性。综合近10年来相关文献报道,从降血脂、抗动脉粥样硬化、降血压与心脏保护、心肌缺血再灌注损伤、心肌缺血、抗血小板聚集及心肌肥厚等方面对西红花苷保护心血管疾病进行概述并汇总相关文献,为西红花苷的药理学研究及开发利用提供参考依据。

关键词：西红花苷药理作用心血管疾病

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青葙总皂苷对高血脂动物脂质代谢的影响

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药学实践杂志 2018年第6期36卷 493-498页

作者：吴文丹梁琳唐颖倪海莱郭美丽第二军医大学药学院生药学教研室上海200433 第二军医大学附属长海医院预防保健科上海200433

目的探讨青葙总皂苷(CES)对高血脂动物脂质代谢的影响。方法建立金黄地鼠、家兔高血脂模型,对实验动物血液和肝组织脂质指标和脂质过氧化指标进行检测,并对动物肝脏进行病理组织学观察。结果经口给予CES 10～90mg/kg两周,可降低高血脂... 详细信息

目的探讨青葙总皂苷(CES)对高血脂动物脂质代谢的影响。方法建立金黄地鼠、家兔高血脂模型,对实验动物血液和肝组织脂质指标和脂质过氧化指标进行检测,并对动物肝脏进行病理组织学观察。结果经口给予CES 10～90mg/kg两周,可降低高血脂金黄地鼠血清和肝脏组织中血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDLc)含量(P<0.05或P<0.01);经口给予高血脂家兔CES 6～24.0mg/kg,给药10d时,可降低血清TC和LDL-c含量(P<0.01);给药20d和30d,不仅降低了血清TC、LDL-c含量(P<0.01),还降低了TG含量(P<0.05),表现出作用持续时间长而平稳的特点。同时,CES还可降低肝脏组织中TC、TG含量(P<0.05)和丙二醛(MDA)、血清脂肪酶(LPS)含量(P<0.05)。病理组织学观察显示:家兔模型组肝细胞胞浆内脂肪堆积明显,肝细胞受损程度严重,有大面积点状坏死现象。随着CES给药剂量的增加,肝细胞胞浆内脂肪堆积明显减少,肝细胞受损程度也明显减轻。结论 CES对动物高血脂脂代谢紊乱有明显治疗作用,其对高血脂脂代谢紊乱的治疗作用可能与其降低肝组织中MDA和LPS的含量有关。

关键词：青葙子青葙总皂苷(CES) 高脂血模型降血脂

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青海产三种特色果实多糖及其活性比较

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天然产物研究与开发 2017年第1期29卷 34-39页

作者：张庆琳高慧琴凌丽君季崇敏卢燕陈道峰复旦大学药学院生药学教研室上海201203 青海博智生物科技有限公司西宁810000

用水提醇沉法提取了青海产宁夏枸杞、黑枸杞、西伯利亚白刺三种特色果实的水溶性总多糖,利用理化方法测定并比较了三种多糖的理化性质及其抗氧化活性和对腹腔巨噬细胞NO分泌功能的影响。三种植物多糖分子量范围为130000~2350000;单糖组... 详细信息

用水提醇沉法提取了青海产宁夏枸杞、黑枸杞、西伯利亚白刺三种特色果实的水溶性总多糖,利用理化方法测定并比较了三种多糖的理化性质及其抗氧化活性和对腹腔巨噬细胞NO分泌功能的影响。三种植物多糖分子量范围为130000~2350000;单糖组成都含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖及阿拉伯糖,但半乳糖醛酸、葡萄糖和阿拉伯糖的相对含量差异明显;三者的糖醛酸含量及蛋白质含量也有明显差异。活性测定结果表明,西伯利亚白刺多糖具有明显的DPPH清除能力,其IC50值达到0.19 mg/m L,表现出较强的抗氧化活性,而黑枸杞与宁夏枸杞多糖的活性较弱;三种多糖均可显著增强小鼠腹腔巨噬细胞的NO分泌水平,显示一定的免疫增强活性。

关键词：宁夏枸杞黑枸杞西伯利亚白刺多糖抗氧化免疫增强

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