检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医科大学学报 2025年第2期54卷 97-102页

作者：杨东凝周诗李玥霖朱俊蒙郝丽英胡慧媛中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的探讨N-甲基小檗胺(N-MB)对H9c2心肌细胞内钙稳态的调节作用,从而明确N-MB心肌保护作用的可能机制。方法通过MOE软件预测N-MB与Ca_(V)1.2通道的结合并判断二者的结合能力与结合模式。通过全细胞膜片钳技术记录稳定表达hCa_(V)1.2的H... 详细信息

目的探讨N-甲基小檗胺(N-MB)对H9c2心肌细胞内钙稳态的调节作用,从而明确N-MB心肌保护作用的可能机制。方法通过MOE软件预测N-MB与Ca_(V)1.2通道的结合并判断二者的结合能力与结合模式。通过全细胞膜片钳技术记录稳定表达hCa_(V)1.2的HEK293细胞内Ca_(V)1.2钙通道电流的变化,观察N-MB (30μmol/L)对Ca_(V)1.2钙通道电流的影响。将Fluo 3-AM荧光探针装载至H9c2心肌细胞中,激光共聚焦显微镜检测N-MB (3、30μmol/L)对心肌细胞内Ca^(2+)浓度的影响。实时定量PCR检测N-MB (3、30μmol/L)对H9c2心肌细胞中Ca^(2+)调控相关基因Cacna1c、Cacnb2、Ryr2、Serca2a、Ncx1表达的影响。结果经MOE软件预测,N-MB和Ca_(V)1.2通道可以结合,二者相互作用的结合位点主要涉及Phe1191、Thr1420、Asn771等,作用方式有H-donor、pi-pi、pi-H 3种。N-MB(30μmol/L)对Ca_(V)1.2钙通道电流可产生明显抑制作用,其抑制率为(76.09±7.41)%。N-MB (3μmol/L、30μmol/L)作用于H9c2心肌细胞后细胞内钙信号的荧光强度明显增强(P <0.01)。与对照组相比,N-MB (30μmol/L)干预后,H9c2心肌细胞Cacna1c、Serca2a、Ncx1表达差异无统计学意义(P> 0.05),而Cacnb2表达显著减少(P <0.001),Ryr2表达显著增加(P <0.05)。结论 N-MB可以与Ca_(V)1.2钙通道结合。N-MB可能通过抑制Ca_(V)1.2钙通道的表达而抑制钙电流;同时可能通过促进Ryr2表达而升高细胞内Ca^(2+)浓度来参与调节细胞内钙稳态,发挥其心肌保护作用。

关键词： N-甲基小檗胺细胞内钙稳态 Ca_(V)1.2钙通道

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钙调蛋白突变体D130V与心肌CaV1.2通道IQ基序的相互作用

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中国医科大学学报 2025年第4期54卷 306-311页

作者：唐路红刘忆芳潘雪婷邢英美郝丽英苏敬阳中国医科大学药学院临床药理学教研室沈阳110122 中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的探讨钙调蛋白(CaM)突变体D130V与心肌CaV1.2通道IQ基序的结合作用。方法采用折叠识别建模、同源建模和蛋白对接方法预测突变体CaM-D130V与IQ基序的结合;利用42℃精确热击法将质粒转化至大肠杆菌BL-21感受态细胞中,诱导GST融合蛋白表... 详细信息

目的探讨钙调蛋白(CaM)突变体D130V与心肌CaV1.2通道IQ基序的结合作用。方法采用折叠识别建模、同源建模和蛋白对接方法预测突变体CaM-D130V与IQ基序的结合;利用42℃精确热击法将质粒转化至大肠杆菌BL-21感受态细胞中,诱导GST融合蛋白表达;超声破碎法提取蛋白,GS-4B beads纯化、PreScission蛋白酶切除GST标签;利用SDS-PAGE检测蛋白纯度;GST pull-down实验检测CaM-D130V与IQ基序的相互作用。结果蛋白对接结果表明,CaM-WT、CaM-D130V与心肌CaV1.2通道IQ基序均具有结合作用,但与CaM-WT相比,突变体CaM-D130V与IQ基序的结合位点减少,且结合构象发生变化,结合能减小(|S|由48.0866 kcal/mol下降至47.3095 kcal/mol)。GST pull-down实验结果显示,在2 mmol/L Ca^(2+)浓度下,与CaM-WT相比,CaM-D130V与IQ基序的结合量显著减少(P<0.01),亲和力显著降低。结论CaM-D130V与心肌CaV1.2通道IQ基序的结合能力降低,可能导致CaV1.2通道功能改变,为探讨CaM突变体相关的心血管疾病的发病机制和靶向治疗提供理论依据。

关键词：钙调蛋白突变体心肌CaV1.2通道结合能力长QT综合征

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Aβ_(25-35)与Calmodulin的分子对接分析及对CaM/CaMKⅡ/Ca_(V)1.2蛋白表达的影响

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解剖科学进展 2025年第1期31卷 114-117,121页

作者：袁媛魏郡杨琳林孙旋旋李明郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110122

目的探究Aβ_(25-35)与Ca^(2+)/calmodulin(CaM)结合的可能性,及Aβ_(25-35)对SH-SY5Y细胞CaM/CaMKⅡ/Ca_(V)1.2蛋白表达的影响。方法首先用MOE软件研究Aβ_(25-35)与Ca^(2+)/CaM的结合情况,其次筛选Aβ_(25-35)对SH-SY5Y细胞损伤的最适浓度,再检测Aβ_(25-35)对细胞SOD活性和Aβ、CaM、CaMKⅡ及Ca_(V)1.2蛋白表达的影响。结果CaM的Aβ_(25-35)结合位点靠近N末端结构域。Aβ_(25-35)能降低细胞活力和SOD活性,增高Ca_(V)1.2蛋白表达,但降低CaM和CaMKⅡ蛋白表达。结论Aβ_(25-35)与Ca^(2+)/CaM结合,可以引起细胞Ca^(2+)相关信号通路中CaM/CaMKⅡ/Ca_(V)1.2蛋白表达变化。

关键词：阿尔茨海默病 β-淀粉样蛋白 CaM CaMKⅡ Ca_(V)1.2

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钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ质粒的构建和表达及其与Ca_(V)1.2通道结合的鉴定

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中国医科大学学报 2025年第1期54卷 1-4,11页

作者：王红梅王祥卉张文竹何蕊廖天佐高青华郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122 赤峰市医院药剂科内蒙古赤峰024000 中国医科大学继续教育学院综合办公室沈阳110001 中国医科大学生命科学学院发育细胞生物学教研室沈阳110122

目的构建钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)长片段的融合蛋白质粒,表达、提取、纯化,并鉴定其与Ca_(V)1.2通道蛋白的结合。方法将提取的pGEX-6p-1/CaMKⅡ长片段质粒转化到原核大肠杆菌BL21感受态细胞,摇床培养箱中培养12 h,添加异丙... 详细信息

目的构建钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)长片段的融合蛋白质粒,表达、提取、纯化,并鉴定其与Ca_(V)1.2通道蛋白的结合。方法将提取的pGEX-6p-1/CaMKⅡ长片段质粒转化到原核大肠杆菌BL21感受态细胞,摇床培养箱中培养12 h,添加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷,促进GST融合蛋白的表达。采用DTT联合超声破碎法,谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B(GS-4B)分离、纯化GST-CaMKⅡ长片段后,经过PreScission蛋白酶处理,切除GST标签,得到CaMKⅡ长片段蛋白。采用15%SDS-PAGE鉴定CaMKⅡ长片段蛋白的分子量和相对纯度;采用Bradford方法测定纯化后蛋白的浓度;采用pull-down结合Western blotting鉴定其与Ca_(V)1.2通道蛋白的结合能力。结果测序结果表明,CaMKⅡ长片段构建成功。通过DTT联合超声破碎法,得到了较高纯度和浓度的长片段CaMKⅡ蛋白,并能够与心肌Ca_(V)1.2钙通道末端CT1蛋白结合。结论本研究成功构建了CaMKⅡ长片段钙调蛋白激酶融合蛋白质粒,提取、纯化了能够与Ca_(V)1.2通道蛋白结合并具有生物活性的CaMKⅡ长片段蛋白,为深入研究CaMKⅡ蛋白的功能奠定了基础。

关键词：钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 质粒构建分离纯化 pull-down

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电压门控钙通道钙依赖性易化和失活的分子机制

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生理科学进展 2009年第2期40卷 161-164页

作者：刘彦郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110001

电压门控钙通道受钙依赖性易化和失活两种相互对立的反馈机制调节。不同浓度的钙离子,通过作为钙感受器的钙调蛋白的介导,主要与钙通道α1亚基羧基端的多个不连续片段发生复杂的相互作用,分别引发钙依赖性易化和失活。钙/钙调蛋白依赖... 详细信息

电压门控钙通道受钙依赖性易化和失活两种相互对立的反馈机制调节。不同浓度的钙离子,通过作为钙感受器的钙调蛋白的介导,主要与钙通道α1亚基羧基端的多个不连续片段发生复杂的相互作用,分别引发钙依赖性易化和失活。钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ及其它钙结合蛋白等也参与此调节过程。新近研究表明,钙通道的钙依赖性调节机制失衡与心律失常等的发病机制密切相关。

关键词：钙通道钙依赖性易化钙依赖性失活钙调蛋白钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ

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遗传性癫痫大鼠海马内GAT-1和GAT-3表达上调

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中国药理学通报 2010年第5期26卷 629-633页

作者：毛小元俞军龄闵冬雨郭凤刘睿吴坤灿张宇轩谢妮蔡际群中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110001

目的探讨遗传性癫痫大鼠(TRM)海马内GAT-1和GAT-3mRNA与蛋白的表达。方法应用RT-PCR技术检测GAT-1和GAT-3mRNA的表达;应用Westernblot方法检测GAT-1和GAT-3蛋白的表达;应用免疫组化方法定位GAT-1和GAT-3蛋白的分布。结果TRM大鼠海马内GA... 详细信息

目的探讨遗传性癫痫大鼠(TRM)海马内GAT-1和GAT-3mRNA与蛋白的表达。方法应用RT-PCR技术检测GAT-1和GAT-3mRNA的表达;应用Westernblot方法检测GAT-1和GAT-3蛋白的表达;应用免疫组化方法定位GAT-1和GAT-3蛋白的分布。结果TRM大鼠海马内GAT-1mR-NA和蛋白表达均高于正常Wistar大鼠(P<0.01);GAT-3mRNA表达高于正常Wistar大鼠(P<0.05);GAT-3蛋白表达亦高于正常Wistar大鼠(P<0.01);免疫组化结果显示GAT-1在TRM和Wistar大鼠海马的CA1、CA3和DG区均有明显分布,且在TRM鼠海马的CA1、CA3和DG区中均比在正常Wistar鼠中明显;而GAT-3蛋白只在TRM和Wistar大鼠海马的CA1区中表达丰富,同时,和正常Wistar鼠比较,TRM鼠海马CA1区中GAT-3蛋白的表达明显增加。结论TRM大鼠海马内GAT-1和GAT-3表达上调可能促进了癫痫的发生,可能是癫痫治疗的靶点。

关键词： GAT-1 GAT-3 TRM大鼠癫痫 RT-PCR 免疫组化 Western blot

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黄芪甲苷对心肌细胞L型钙电流及细胞内钙的影响

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中国药理学通报 2013年第10期29卷 1373-1377页

作者：赵美眯孙雪菲连雯雯胡慧媛王燕曾本清封瑞高青华赵金生郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110001

目的研究黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)对豚鼠心室肌细胞L型钙电流和细胞内钙的影响。方法分离单个豚鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术测定钙电流,并采用荧光显微镜CCD成像系统动态观察细胞内钙(intracellular calcium concentrat... 详细信息

目的研究黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)对豚鼠心室肌细胞L型钙电流和细胞内钙的影响。方法分离单个豚鼠心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术测定钙电流,并采用荧光显微镜CCD成像系统动态观察细胞内钙(intracellular calcium concentration,[Ca2+]i)变化。结果 1×10-6mol·L-1AS-IV可明显抑制I Ca-L,使最大电流峰值降低32.6%。AS-IV对60 mmol·L-1KCl诱导的[Ca2+]i升高有抑制作用,最大荧光密度变化值从1.17±0.30(n=6)降低到0.26±0.16(n=5,P<0.05)。AS-IV可直接促进钙池内钙释放,使[Ca2+]i从0.08±0.02(n=10)升高到0.23±0.07(n=8,P<0.05)。结论 AS-IV抑制L型钙通道,可减少细胞外钙内流;同时它促进内钙释放,对心肌细胞内钙稳态表现为双向调节作用。

关键词：黄芪甲苷膜片钳技术钙电流细胞内钙心肌细胞 Fluo-3

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自发性癫痫大鼠皮质和海马中GLT-1、EAAC1表达异常

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中国药理学通报 2009年第5期25卷 617-620页

作者：孙凤蔡际群谢妮王清华杨丹中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110001

目的探讨自发性癫痫大鼠(SER)皮质和海马中GLT-1、EAAC1 mRNA与蛋白的表达情况。方法应用RT-PCR技术检测GLT-1、EAAC1 mRNA的表达;应用Westernblot方法检测GLT-1、EAAC1蛋白的表达;应用免疫组化方法定位GLT-1、EAAC1蛋白。结果SER皮质中... 详细信息

目的探讨自发性癫痫大鼠(SER)皮质和海马中GLT-1、EAAC1 mRNA与蛋白的表达情况。方法应用RT-PCR技术检测GLT-1、EAAC1 mRNA的表达;应用Westernblot方法检测GLT-1、EAAC1蛋白的表达;应用免疫组化方法定位GLT-1、EAAC1蛋白。结果SER皮质中GLT-1蛋白表达低于正常Wistar大鼠(P<0.05);EAAC1 mRNA及蛋白表达均低于正常Wistar大鼠(P<0.01);SER海马中GLT-1蛋白表达高于Wistar大鼠(P<0.01);免疫组化结果显示GLT-1、EAAC1在SER、Wistar大鼠皮质和海马中均有表达,且位于细胞膜上。结论SER皮质中GLT-1、EAAC1表达下调可能促进了癫痫的发生;海马中GLT-1蛋白表达上调可能是一种代偿性神经保护机制。

关键词： GLT-1 EAAC1 RT-PCR Western blot 免疫组化自发性癫痫大鼠

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mGluR1在自发性癫痫大鼠海马中的表达

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中国药理学通报 2008年第9期24卷 1143-1146页

作者：王清华杨丹蔡际群孙凤中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110001

目的检测自发性癫痫大鼠海马中mGluR1的表达情况。方法RT-PCR技术检测鼠海马中mGluR1基因的表达;利用免疫组化和Western blot方法检测鼠海马中mGluR1总蛋白的表达。结果自发性癫痫大鼠海马中mGluR1基因总水平下降(P0.05),mGluR1阳性的... 详细信息

目的检测自发性癫痫大鼠海马中mGluR1的表达情况。方法RT-PCR技术检测鼠海马中mGluR1基因的表达;利用免疫组化和Western blot方法检测鼠海马中mGluR1总蛋白的表达。结果自发性癫痫大鼠海马中mGluR1基因总水平下降(P<0.05),免疫组化显示海马DG区和CA3区的mGluR1蛋白表达均下降(P<0.05),CA1区无变化(P>0.05),mGluR1阳性的神经细胞其密度较正常鼠增强;Western blot检测mGluR1蛋白总量下降(P<0.05)。结论自发性癫痫大鼠海马中总mGluR1表达下调,单一细胞表达增强。

关键词： mGluR1 RT—PCR 免疫组化 Western blot 自发性癫痫大鼠

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N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺通过NLRP3/Caspase-1抑制巨噬细胞泡沫化及焦亡作用

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中国药理学通报 2024年第6期40卷 1035-1041页

作者：舒志云呼延子旭张文晴谢世顺成鸿源徐国兴李相军吉林大学药学院实验药理与毒理学教研室吉林长春130021 吉林大学药学院药物化学教研室吉林长春130021

目的设计并合成了嘧啶并吲哚类衍生物N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺(BFPI),探讨其是否通过NLRP3/Caspase-1通路抑制巨噬细胞焦亡和泡沫化作用。方法以2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪和2-氨基吲哚为起始原料合成BFPI,并通过1H NMR... 详细信息

目的设计并合成了嘧啶并吲哚类衍生物N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺(BFPI),探讨其是否通过NLRP3/Caspase-1通路抑制巨噬细胞焦亡和泡沫化作用。方法以2,4,6-三乙氧羰基-1,3,5-三嗪和2-氨基吲哚为起始原料合成BFPI,并通过1H NMR、13 C NMR、ESI-MS对其结构进行表征。将体外培养的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7分为空白组、模型组(PA)组和治疗组(BFPI)组,各组细胞用对应培养液处理24 h后,用MTT法检测其增殖活力,油红O染色检测细胞内脂滴形成情况,并用Western blot和RT-qPCR检测NLRP3、Caspase-1和MCP-1 mRNA和蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组细胞增殖活力明显下降,脂滴形成量明显增加,与模型组比较,治疗组细胞增殖活力明显增加,脂滴形成量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.01);与空白组比较,模型组细胞NLRP3、Caspase-1和MCP-1的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,与模型组比较,治疗组细胞上述指标表达水平均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论BFPI可通过抑制巨噬细胞NLRP3、Caspase-1和MCP-1的表达进而促进其增殖并抑制脂质吞噬能力,有助于延缓动脉粥化时巨噬细胞来源的泡沫细胞形成。

关键词： N-丁基-9 H-嘧啶并[4,5-b]吲哚-2-甲酰胺 NLRP3 动脉粥样硬化巨噬细胞细胞泡沫化细胞焦亡

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