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超临界流体萃取-胶束电动毛细管色谱法测定银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素的含量

第二军医大学学报 2000年第10期21卷 958-960页

作者：佘佳红柳正良王春燕陈燕第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 第二军医大学药学院药物分析教研室上海200433

目的 :以超临界流体萃取 ( SFE)银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素 ,以胶束电动毛细管色谱法 ( MECC)测定这两种成分的含量。方法 :采用正交设计法考察 SFE提取工艺 ,SFE条件 :压力 42 m Pa;温度 6 0℃ ;静态萃取时间 4m in;动态萃取体积 4... 详细信息

目的 :以超临界流体萃取 ( SFE)银杏叶粗提物中槲皮素和山奈素 ,以胶束电动毛细管色谱法 ( MECC)测定这两种成分的含量。方法 :采用正交设计法考察 SFE提取工艺 ,SFE条件 :压力 42 m Pa;温度 6 0℃ ;静态萃取时间 4m in;动态萃取体积 4m l;改性剂 0 .2 ml乙醇。 MECC条件 :空心熔融石英毛细管柱 ( 5 5 cm× 75μm ) ;缓冲液为磷酸二氢钠 -硼砂 =2 5 - 6 .2 5mm ol/L ( p H 8.5 ) ;SDS 35 mmol/L ;检测波长 2 5 4nm。结果 :SFE时改性剂对萃取效率的影响最大 ;MECC以肉桂酸为内标 ,在 2 1.2～ 10 6 .0μg/ml和 2 0 .0～ 10 0 .0μg/ml范围内 ,槲皮素和山奈素均呈良好的线性关系和重现性。 40 ,6 0和 80μl槲皮素的加样回收率分别为 93.87% ,94.0 2 %和 94.10 % ;40 ,6 0和 80μl山奈素的加样回收率分别为 94.5 0 % ,94.17%和 94.2 5 %。结论 :SFE与 MECC法联用 ,简便快速 ,可用于银杏叶粗提物中的黄酮类成分的分离分析。

关键词：银杏叶粗提物斛皮素山奈素 SFE-MECC法

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番石榴叶总三萜改善3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗

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中国病理生理杂志 2016年第2期32卷 314-320页

作者：李秀存马锦锦赵晶晶叶开和吕艳青王小康魏崧丞张晓琦叶春玲暨南大学药学院药理学教研室广东广州510632 广东省妇幼保健院药学部广东广州511400 暨南大学中药与天然药物研究所广东广州510632

目的：观察番石榴叶总三萜（TTPGL）对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（IR）的改善作用,并探讨其可能的作用机制。方法：培养3T3-L1前脂肪细胞并诱导其分化,给予TTPGL（0.3、1、3、10μg/L）,并设溶媒（0.1%DMSO）组、阳性药正钒酸钠（Van,10... 详细信息

目的：观察番石榴叶总三萜（TTPGL）对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗（IR）的改善作用,并探讨其可能的作用机制。方法：培养3T3-L1前脂肪细胞并诱导其分化,给予TTPGL（0.3、1、3、10μg/L）,并设溶媒（0.1%DMSO）组、阳性药正钒酸钠（Van,10μmol/L）组、正常对照（control）组和模型（model）组,药物作用48 h。MTT法检测药物对前脂肪细胞活力的影响,油红O染色法观察其对细胞分化的影响。建立IR模型后,药物处理48 h,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法（GOD-POD）检测IR脂肪细胞上清液中葡萄糖消耗量;比色法检测游离脂肪酸（FFA）水平;ELISA法检测脂肪因子分泌水平;real-time PCR检测IR脂肪细胞蛋白酪氨酸激酶1B（PTP1B）的mRNA表达量;Western blot检测磷酸化胰岛素受体底物1/胰岛素受体底物1（p-IRS-1/IRS-1）和磷酸化蛋白激酶B/蛋白激酶B（p-Akt/Akt）的蛋白水平。结果：与溶媒组比较,TTPGL显著提高了前脂肪细胞的活力并抑制其分化（P〈0.01）。与IR溶媒组比较,无论在基础状态下还是胰岛素刺激状态下,TTPGL（1-10μg/L）均显著地促进了IR脂肪细胞葡萄糖消耗（P〈0.01）;TTPGL（0.3～3μg/L）显著抑制FFA的产生（P〈0.01）。与模型组比较,TTPGL（0.3和3μg/L）显著增加IR脂肪细胞脂联素的分泌（P〈0.05）并抑制TNF-α的分泌（P〈0.01）,TTPGL（3μg/L）对抵抗素的分泌有显著抑制作用（P〈0.05）,对瘦素分泌无显著作用;TTPGL（3μg/L）显著下调IR脂肪细胞PTP1B的mRNA表达（P〈0.01）;TTPGL（3μg/L）极显著上调p-IRS-1/IRS-1的水平;TTPGL（0.3和3μg/L）显著上调p-Akt/Akt的蛋白水平（P〈0.05）。结论：TTPGL具有显著改善3T3-L1脂肪细胞IR的作用,其作用机制可能与TTPGL下调了IR脂肪细胞PTP1B mRNA的表达、同时上调p-IRS-1/IRS-1和p-Akt/Akt的蛋白水平有关。

关键词：番石榴叶总三萜胰岛素抵抗蛋白酪氨激酶1B 胰岛素受体底物1 蛋白激酶B

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托吡酯对遗传性癫痫大鼠脑内GAT-1和GAT-3表达的影响

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中国药理学通报 2010年第8期26卷 1069-1074页

作者：毛小元程振国俞军龄闵冬雨郭凤刘睿吴坤灿张宇轩谢妮蔡际群中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学生物科学与生物技术系辽宁沈阳110001

目的探讨托吡酯对TRM大鼠脑内GAT-1和GAT-3 mRNA和蛋白表达的影响。方法分别应用实时定量PCR法和Western blot方法检测Wistar正常组、TRM组、TPM40组和TPM80组脑内GAT-1和GAT-3 mRNA和蛋白表达。结果 GAT-1、GAT-3和β-actin标准曲线相... 详细信息

目的探讨托吡酯对TRM大鼠脑内GAT-1和GAT-3 mRNA和蛋白表达的影响。方法分别应用实时定量PCR法和Western blot方法检测Wistar正常组、TRM组、TPM40组和TPM80组脑内GAT-1和GAT-3 mRNA和蛋白表达。结果 GAT-1、GAT-3和β-actin标准曲线相关性良好,基因特异性强。GAT-1 mRNA在TRM组的海马高于正常组(P<0.01);与TRM组比较,TPM80组海马中GAT-1 mRNA明显降低(P<0.05);GAT-3 mRNA在TRM组海马中的表达高于正常组(P<0.05);GAT-1蛋白表达在TRM组的海马高于正常组(P<0.01);与TRM组比较,TPM80组海马中GAT-1蛋白明显降低(P<0.01);GAT-3蛋白在TRM组海马中的表达高于正常组(P<0.05)。结论 TRM组海马内GAT-1及GAT-3的表达增加可能促进了癫痫的发生。托吡酯的抗癫痫作用可能是通过降低海马内GAT-1的表达来实现的,这种调节存在剂量依赖性。

关键词： GAT-1 GAT-3 TRM大鼠癫痫托吡酯实时定量PCR Western blot

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不同缺血时间对豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响

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中国药理学通报 2013年第1期29卷 73-78页

作者：王燕赵美眯闵冬雨胡慧媛孙雪菲封瑞郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110001 辽宁中医药大学附属医院中心实验室辽宁沈阳116600

目的探讨不同缺血时间对豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响。方法将23只豚鼠离体心脏随机分成4组:正常组(Control,n=6)、缺血30 min再灌60 min组(I30R60,n=6)、缺血40 min再灌60 min(I40R60,n=5)、缺血50 min再灌60 min组(I50R60,n=6)... 详细信息

目的探讨不同缺血时间对豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响。方法将23只豚鼠离体心脏随机分成4组:正常组(Control,n=6)、缺血30 min再灌60 min组(I30R60,n=6)、缺血40 min再灌60 min(I40R60,n=5)、缺血50 min再灌60 min组(I50R60,n=6),观察不同缺血组缺血前及再灌期间心率和冠脉流量,测定灌流液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶(creatine ki-nase,CK)漏出量及组织中超氧化物歧化酶(superoxide dis-mutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,并以2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chlorid,TTC)染色法测定梗死面积。结果与Control组相比,I30R60组各指标尚未全部发生明显变化;而I40R60和I50R60组心率和冠脉流量降低,梗死面积加大,灌流液中LDH和CK漏出值升高,组织中SOD和MDA值降低;上述所观察指标中,I50R60组变化更为明显。结论豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤受缺血时间的影响,豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型的建立以缺血50 min为宜,再灌时间可考虑限制于15～60 min之间。

关键词：缺血时间豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤 Lan— gendorff 乳酸脱氢酶

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积雪草酸改善小鼠脂肪细胞胰岛素抵抗的机制研究

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中国病理生理杂志 2013年第7期29卷 1313-1317页

作者：刘清霞叶开和王婧茹叶春玲黄仪张晓琦叶文才暨南大学药学院药理学教研室广东广州510632 暨南大学药学院中药及天然药物研究所中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室广东广州510632

目的:观察番石榴叶三萜化合物积雪草酸对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化以及胰岛素抵抗脂肪细胞糖脂代谢的影响并探讨其作用机制。方法:MTT法检测药物对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响;油红O染色法观察药物对其分化的影响。地塞米松诱导... 详细信息

目的:观察番石榴叶三萜化合物积雪草酸对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化以及胰岛素抵抗脂肪细胞糖脂代谢的影响并探讨其作用机制。方法:MTT法检测药物对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响;油红O染色法观察药物对其分化的影响。地塞米松诱导建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型,药物干预后采用葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖消耗量;比色法检测游离脂肪酸浓度;ELISA法检测脂联素水平;Western blotting法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)蛋白表达的变化。结果:与溶媒对照组相比,积雪草酸在10～100μmol/L时能显著促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,但明显抑制其分化(P<0.05或P<0.01);在30和100μmol/L时,无论是基础状态还是胰岛素刺激状态,均能显著增加胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖的消耗,减少游离脂肪酸的产生(P<0.05);其对胰岛素抵抗脂肪细胞的脂联素分泌和PPARγ蛋白表达无明显影响(P>0.05),但能显著下调PTP1B蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:积雪草酸能显著改善脂肪细胞胰岛素抵抗,增加胰岛素抵抗脂肪细胞葡萄糖的消耗和减少游离脂肪酸的产生,其机制可能是其下调胰岛素信号转导的负性调节因子PTP1B的表达,增强胰岛素信号转导,从而改善胰岛素抵抗。

关键词：番石榴叶三萜化合物积雪草酸 3T3-L1前脂肪细胞胰岛素抵抗过氧化物酶体增殖物激活受体γ 蛋白酪氨酸磷酸酶1B

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瞬时受体电位通道7参与匹鲁卡品诱导的癫痫体外模型凋亡的调控

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中国医科大学学报 2022年第4期51卷 289-293,300页

作者：李晓娜何苗梁洪玥史瑞雪付钰顾宇婧李艾凝郭凤中国医科大学附属第四医院药学部沈阳110032 中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

目的探讨瞬时受体电位通道7(TRPM7)在癫痫中与凋亡的关系。方法采用CCK-8法检测匹鲁卡品(PILO)对Neuro-2A细胞活性的影响;设置对照组和PILO模型组,采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白... 详细信息

目的探讨瞬时受体电位通道7(TRPM7)在癫痫中与凋亡的关系。方法采用CCK-8法检测匹鲁卡品(PILO)对Neuro-2A细胞活性的影响;设置对照组和PILO模型组,采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和细胞色素C蛋白(Cyt C)的表达;采用实时荧光定量PCR法检测TRPM7 mRNA的表达;设置对照组(Neuro-2A细胞转染无序siRNA序列)、PILO模型组(Neuro-2A细胞转染无序siRNA序列后经PILO处理24 h)和PILO+siRNA组(Neuro-2A细胞转染TRPM7 siRNA序列后经PILO处理24 h),采用蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白表达;采用TUNEL染色观察细胞凋亡情况。结果Neuro-2A细胞活性随PILO浓度升高而降低;与正常对照组相比,模型组凋亡相关蛋白caspase-3、Bax、Cyt C和TRPM7 mRNA在24 h时表达明显增加(均P<0.05);与PILO模型组相比,PILO+siRNA组凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和Cyt C表达和细胞凋亡率明显减少(均P<0.05)。结论TRPM7参与PILO诱导的癫痫体外模型的凋亡。

关键词：癫痫瞬时受体电位通道凋亡匹鲁卡品小鼠脑神经瘤细胞

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番石榴叶总三萜对2型糖尿病大鼠的降血糖和血脂作用

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中国病理生理杂志 2012年第6期28卷 1109-1113页

作者：王婧茹赵晶晶叶春玲叶开和张晓琦王英叶文才暨南大学药学院药理学教研室广东省妇幼保健院药学部广东广州510010 暨南大学药学院中药及天然药物研究所暨南大学中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室广东广州510632

目的:探讨番石榴叶总三萜(TTPGL)对2型糖尿病大鼠血糖及血脂的影响。方法:采用高糖高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ,35 ***-1)方法建立2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的糖尿病大鼠随机分为5组:糖尿病模型组,TTPGL低、中、高剂量... 详细信息

目的:探讨番石榴叶总三萜(TTPGL)对2型糖尿病大鼠血糖及血脂的影响。方法:采用高糖高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ,35 ***-1)方法建立2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的糖尿病大鼠随机分为5组:糖尿病模型组,TTPGL低、中、高剂量组(60、120、240 ***-1),罗格列酮阳性对照组(3 ***-1)。另取12只正常大鼠设为正常对照组。给药组每天灌胃给药1次,连续给药6周;模型组和正常对照组则给予同体积的生理盐水灌胃。给药6周后,采用葡萄糖氧化酶法测定大鼠的空腹血糖(FBG);放射免疫法测定空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素敏感指数(ISI);酶联免疫法测定大鼠的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、游离脂肪酸(FFA)和糖化血红蛋白(GHb);果糖胺法测定糖化血清蛋白(GSP);Western blotting检测脂肪组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达情况。结果:与正常对照组相比,糖尿病模型组血脂、FBG以及GHb显著升高,FINS及ISI显著下降,脂肪细胞PPARγ蛋白表达水平降低。与模型组相比,TTPGL中、高剂量组大鼠的FBG和GSP显著降低,FINS以及ISI显著升高,脂肪组织PPARγ蛋白的表达水平升高(P<0.01或P<0.05);此外,TTPGL能显著降低糖尿病大鼠血脂水平,TG、TCH和FFA含量均明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论:TTPGL能显著降低2型糖尿病大鼠的血糖和血脂水平,明显改善糖尿病动物的糖脂代谢紊乱,升高血清胰岛素水平,提高胰岛素敏感指数;其抗糖尿病作用机制可能与其增加PPARγ蛋白的表达有关。

关键词：番石榴叶总三萜糖尿病,2型血糖血脂过氧化物酶体增殖物激活受体γ

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壬基苯酚对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流的影响

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中国医科大学学报 2010年第2期39卷 81-83页

作者：高青华朱彤郭凤杨磊赵美眯李刚郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110001 中国医科大学基础医学院生理学教研室沈阳110001 东北大学环境生物研究室沈阳110004

目的观察环境激素壬基苯酚(NP)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响。方法应用酶机械法分离豚鼠单个心室肌细胞;应用膜片钳全细胞方法观察NP对单个心室肌细胞ICa-L的影响。结果NP可抑制不同膜电位下的ICa-L,NP(10-6mol·L-1、1... 详细信息

目的观察环境激素壬基苯酚(NP)对豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响。方法应用酶机械法分离豚鼠单个心室肌细胞;应用膜片钳全细胞方法观察NP对单个心室肌细胞ICa-L的影响。结果NP可抑制不同膜电位下的ICa-L,NP(10-6mol·L-1、10-5mol·L-1)使ICa-L峰值电流密度从(-3.2±1.5)***-1减少到(-1.6±0.8)pA·pF-1(P<0.01)和(-1.4±0.7)pA·pF-1(P<0.01);但对ICa-L激活动力学曲线无明显影响。结论NP可剂量依赖性抑制豚鼠心室肌细胞ICa-L。

关键词：壬基苯酚 L-型钙电流膜片钳

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体外重组Ca_V1.2钙通道CT1蛋白片段制备方法的优化

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解剖科学进展 2019年第5期25卷 528-531页

作者：康泽邵冬雪彭羽苏敬阳封瑞孙雪菲郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室

目的通过改变多种实验条件提高CaV 1.2钙通道C末端GST融合蛋白(GST-CT1)在大肠杆菌BL21中的表达量及分离纯化产量。方法把pGEX-6p-3/CT1质粒转入大肠杆菌BL21中,筛选其中转化成功的菌株培养并用异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thioga... 详细信息

目的通过改变多种实验条件提高CaV 1.2钙通道C末端GST融合蛋白(GST-CT1)在大肠杆菌BL21中的表达量及分离纯化产量。方法把pGEX-6p-3/CT1质粒转入大肠杆菌BL21中,筛选其中转化成功的菌株培养并用异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)在不同细菌浓度,不同诱导时间或不同温度下诱导表达GST-CT1蛋白,Glutathione-Sepharose 4B beads(GS-4B beads)纯化蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白表达水平。结果当吸光度为0.6~1.0时,GST-CT1在大肠杆菌BL21中的表达量较高,IPTG诱导表达蛋白大于4h后无明显表达量差异,并且当诱导温度为25℃时,蛋白的产量将大大增加。结论可以通过控制细菌数量、控制诱导时长和降低诱导温度的方法来提高GST-CT1蛋白的产量。

关键词：钙通道融合蛋白包涵体蛋白表达

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RAS两大功能轴及其在疾病中的作用

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生理科学进展 2021年第4期52卷 285-291页

作者：杨琳林高雅馨胡慧媛郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122

肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)联系着人体的众多生理机能,同时与心血管疾病、肾脏疾病、炎症反应及糖尿病、阿尔兹海默症、新型冠状病毒肺炎等疾病的发生发展密切相关。近年来,随着研究的深入,RAS代谢通路中的关... 详细信息

肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)联系着人体的众多生理机能,同时与心血管疾病、肾脏疾病、炎症反应及糖尿病、阿尔兹海默症、新型冠状病毒肺炎等疾病的发生发展密切相关。近年来,随着研究的深入,RAS代谢通路中的关键节点已成为多种药物设计的重要依据。本文将结合现阶段研究进展对RAS两大主要功能轴(ACE-Ang II-AT 1R轴及ACE 2-Ang-(1-7)-MasR轴)的生理功能、病理机制及相关药物的临床应用加以概述。

关键词：肾素-血管紧张素系统血管紧张素Ⅱ 血管紧张素(1-7) 病理生理

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