检索结果-内蒙古大学图书馆

中国科技论文 2006年第4期6卷 291-295页

作者：于娜郭凤杜娃姚维凡蔡际群中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110001

[目的]对照研究自发性癫痫大鼠(SER)和正常 Wistar 大鼠(WTC)脑内Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型钠通道α亚基mRNAs与蛋白表达情况。[方法]提取枕叶皮质、齿状回及海马 CA1和 CA3区组织总 RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及建立限制性内切酶图谱检... 详细信息

[目的]对照研究自发性癫痫大鼠(SER)和正常 Wistar 大鼠(WTC)脑内Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型钠通道α亚基mRNAs与蛋白表达情况。[方法]提取枕叶皮质、齿状回及海马 CA1和 CA3区组织总 RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及建立限制性内切酶图谱检测Ⅰ、ⅡA、ⅡN、ⅢA和ⅢN的表达.应用免疫荧光定位与表达α_3亚基川 N 蛋白。[结果]SER枕叶皮质、齿状回及海马CAl和CA3区总钠通道的表达略高于 WTC,但均无显著差异(P>0.05),SERⅢ型钠通道在海马的表达高于 WTC(P<0.01),酶切图谱显示ⅢN型钠通道表达水平有明显上调。[结论]SER 脑内海马Ⅲ型电压门控性钠通道 N 亚型表达上调。

关键词：钠通道 mRNA RT-PCR 限制性内切图谱检测自发性癫痫大鼠

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PreIQ及其突变体载体构建表达纯化和活性鉴定

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中国医科大学学报 2014年第4期43卷 293-296页

作者：孙威封瑞郭凤赵金生赵美眯高青华王红梅毛楠郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110001 中国医科大学心血管研究所沈阳110001

目的构建心肌L型钙通道片段PreIQ及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达纯化和活性鉴定。方法将PreIQ及其突变体的cDNA插入pGEX-6p-1质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-... 详细信息

目的构建心肌L型钙通道片段PreIQ及其突变体与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达纯化和活性鉴定。方法将PreIQ及其突变体的cDNA插入pGEX-6p-1质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导PreIQ及其突变体的GST融合蛋白表达,GS-4B beads进行分离纯化。采用SDS-PAGE鉴定目的蛋白分子质量和相对纯度。采用Bradford方法测定纯化后蛋白浓度。采用pull-down法检测纯化后蛋白的活性。结果 PreIQ及其突变体融合蛋白得到了大量表达;纯化的PreIQ及其突变体具有较高的纯度;纯化后蛋白能与钙调蛋白(CaM)结合,具有生物活性。结论本研究成功构建了PreIQ及其突变体融合蛋白原核表达载体,获得具有生物活性的PreIQ及其突变体融合蛋白,为深入研究PreIQ的生能学功能奠定基础。

关键词：融合蛋白 PreIQ 突变体 pull—down

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17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的抑制作用

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中国药理学通报 2013年第3期29卷 351-355页

作者：赵金生李刚高青华郭凤赵美眯刘书源朱彤郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110001 沈阳医学院国际教育学院辽宁沈阳110034 中国医科大学基础医学院生理学教研室辽宁沈阳110001 东北大学环境生物研究室辽宁沈阳110004

目的观察17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的影响及其与雌激素受体(estrogen receptor,ER)的关系。方法酶机械法分离豚鼠单个心室肌细胞;膜片钳全细胞模式观察17β-雌二醇对单个心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的影响,并通过加入雌激... 详细信息

目的观察17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞L型钙电流的影响及其与雌激素受体(estrogen receptor,ER)的关系。方法酶机械法分离豚鼠单个心室肌细胞;膜片钳全细胞模式观察17β-雌二醇对单个心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的影响,并通过加入雌激素受体阻断剂tamoxifen(TAM)研究该作用与雌激素受体的关系。结果 17β-雌二醇(10-9～10-7mol.L-1)使ICa-L峰电流密度值从(-3.5±0.6)***-1分别减少至(-2.4±0.3)***-1、(-1.9±0.3)***-1和(-1.1±0.3)***-1(与对照组比较,均为P<0.01,n=5)。TAM(10-7 mol.L-1)预处理后,17β-雌二醇(10-7mol.L-1)使ICa-L峰电流密度值从(-3.5±0.6)***-1减少到(-1.0±0.2)***-1(与对照组比较,P<0.01,n=5),与未应用TAM(10-7 mol.L-1)预处理时比较,ICa-L峰电流密度值无变化(P>0.05,n=5)。结论 17β-雌二醇抑制豚鼠心室肌细胞ICa-L的作用呈浓度依赖性,雌激素受体阻断剂TAM不能阻断17β-雌二醇对豚鼠心室肌细胞ICa-L的抑制作用,提示17β-雌二醇对ICa-L的抑制作用可能与ER作用无关。

关键词： 17β-雌二醇 L型钙电流膜片钳雌激素受体雌激素受体阻断剂心室肌细胞

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壬基苯酚对H9c2心肌细胞钙信号和细胞增殖的影响及其作用机制

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中国医科大学学报 2015年第2期44卷 109-113页

作者：高青华刘水策郭凤刘书源于向沉夏尔巴提吾马尔孙雪菲毛楠赵美眯朱彤郝丽英中国医科大学基础医学院生理学教研室沈阳110122 中国医科大学药学院药物毒理学教研室沈阳110122 东北大学环境生物研究室沈阳110004

目的探讨壬基苯酚(NP)对H9c2心肌细胞内钙离子浓度和细胞增殖的影响以及GPR30受体的作用。方法采用细胞内钙测定方法来记录H9c2心肌细胞内钙离子浓度变化,采用MTT法来观察H9c2心肌细胞增殖程度。结果 1×10-10mol/L NP使细胞内钙离... 详细信息

目的探讨壬基苯酚(NP)对H9c2心肌细胞内钙离子浓度和细胞增殖的影响以及GPR30受体的作用。方法采用细胞内钙测定方法来记录H9c2心肌细胞内钙离子浓度变化,采用MTT法来观察H9c2心肌细胞增殖程度。结果 1×10-10mol/L NP使细胞内钙离子浓度升高的幅度增加,并促进H9c2细胞增殖,而1×10-6mol/L NP使细胞内钙离子浓度升高的幅度降低,并抑制细胞增殖。G15可以阻断1×10-10mol/L NP对细胞内钙离子浓度和细胞增殖的促进作用,但不能阻断1×10-6mol/L NP对细胞内钙离子和细胞增殖的抑制作用。结论 NP对H9c2细胞的快速钙信号变化和细胞增殖具有非单调的剂量依赖性作用,其机制可能是由于GPR30受体在不同浓度下参与的机制不同。

关键词：壬基苯酚 H9c2细胞钙离子细胞增殖 GPR30

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ATP对心肌Cav1.2钙通道的直接调节作用

ATP对心肌Cav1.2钙通道的直接调节作用

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中国生理学会张锡钧基金会第十三届全国青年优秀生理学学术论文交流及评奖会议、中国生理学会第十一届全国青年生理学工作者学术会议

作者：封瑞徐建军郭凤胡慧媛赵美眯孙雪菲龟山正树郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室

L型钙通道是一种电压依赖性钙通道,其由4个亚单位组成,分别为α1,α2δ,β1-4和γ,其中α1亚单位是主要的功能单位。钙离子信号与很多重要的生理功能密切相关,而L型钙通道严格控制着钙离子进出细胞的过程,因此,研究L型钙通道的精细调节... 详细信息

L型钙通道是一种电压依赖性钙通道,其由4个亚单位组成,分别为α1,α2δ,β1-4和γ,其中α1亚单位是主要的功能单位。钙离子信号与很多重要的生理功能密切相关,而L型钙通道严格控制着钙离子进出细胞的过程,因此,研究L型钙通道的精细调节机制至关重要。三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate,ATP）是体内组织细胞一切生命活动所需能量的直接来源,其参与蛋白质、脂肪、糖和核苷酸的合成。在心肌细胞中,钙离子的跨膜转运需要消耗大量的能量,ATP为其能量的重要来源之一。研究发现,ATP可缩短患者心脏发作时间,或缩短患者接受心脏手术后的恢复时间,并且,ATP可改善因心脏压力造成的心脏能量低的状态,因此,ATP在维持心脏功能方面起到了非常重要的作用,然而详细的调节机制并不清楚。早期的研究发现ATP和钙调蛋白（Camodulin,CaM）同时应用的情况下,能够逆转L型钙通道的Run-Down现象,单独应用其中任何一个都不能很好的恢复通道活性。有研究报道从心肌组织中提取的细胞内组分只有与ATP同时应用,才能维持L型钙通道活性,由此可见,不仅CaM在维持钙通道活性中起到重要作用,ATP同样也起到必不可少的作用。ATP对L型钙通道的调节作用机制复杂,其可通过激活蛋白激酶C使通道磷酸化,然也有研究报道其可能通过其他非磷酸化途径对L型钙通道进行调节,本研究拟从非磷酸途径角度对ATP与L型钙通道的关系进行探索研究。本研究应用蛋白与蛋白结合的方法,首次发现ATP能够直接与心肌Cav1.2钙通道结合。依据本研究的结果分析,推测至少2个分子的ATP可以与1个分子的Cav1.2钙通道结合,而且这两个ATP与钙通道的结合的亲和力可能不同,一个为较高亲和力,另外一个为较低亲和力,这也与前期电生理学研究结果非常相似。我们早期的实验同时应用ATP和CaM才能很好地恢复L型钙通道的活性,在CaM缺失的情况下,ATP单独不能很好的恢复具有Run-Down现象的钙通道活性,由此推测可能ATP对钙通道的调节会受到CaM的影响,即CaM可能会对ATP与钙通道的结合具有一定的调节作用。因此,进行了更进一步的研究。研究发现,CaM确实对ATP与心肌Cav1.2钙通道的结合有影响。已有很多的研究报道CaM可以直接与Cav1.2钙通道结合,对钙通道的功能进行调节。我们以前的研究报道,1个分子L型钙通道可以结合2个分子CaM,并且这2个分子的CaM,分别介导Ca依赖性易化与失活。本研究在不同分子数CaM存在的情况下,检测ATP与Cav1.2钙通道的结合情况,发现随着CaM分子数的增加,ATP与Cav1.2钙通道的结合先增加后减少,这说明CaM对ATP的结合作用具有双向调节作用,这种双向调节作用可能是ATP对L型钙通道功能的调节的基础。然ATP、CaM和Ca三种分子之间的相互作用的详细机制可能会更加复杂,需要进一步的实验研究。本研究对ATP与心肌Cav1.2钙通道的结合作用进行了一系列的研究,ATP,Ca,CaM对L型钙通道调节作用机制非常复杂,相关的研究也是非常的丰富,本研究提出了ATP对L型钙通道调节的新机制,不仅为L型钙通道调节机制增添了新的内容,也为临床上与ATP和L型钙通道相关的疾病的病因及治疗提供了新的思路。

关键词：钙通道三磷酸腺苷钙调蛋白信号通路

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钙调蛋白激酶在L型钙通道“run-down”现象发生及恢复过程中的作用

钙调蛋白激酶在L型钙通道“run-down”现象发生及恢复过程中的作用

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全国第十一届生化与分子药理学学术会议

作者：赵美眯郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室

目的:研究钙调蛋白激酶(CaMKII)在钙通道"run-down"现象发生及恢复过程中的作用机制。方法:用酶分离单个豚鼠心室肌细胞,利用膜片钳单通道技术,在细胞膜面内向外的模式下,诱发L型钙通道"run-down"现象。制备活性钙... 详细信息

目的:研究钙调蛋白激酶(CaMKII)在钙通道"run-down"现象发生及恢复过程中的作用机制。方法:用酶分离单个豚鼠心室肌细胞,利用膜片钳单通道技术,在细胞膜面内向外的模式下,诱发L型钙通道"run-down"现象。制备活性钙调蛋白激酶(CaMKIIαT286D),记录并分析它在L型钙通道"run-down"现象中的影响。结果:

关键词：钙调蛋白激酶钙通道 run-down

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钙调蛋白在钙通道钙依赖性易化与失活机制中的作用

钙调蛋白在钙通道钙依赖性易化与失活机制中的作用

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全国第十一届生化与分子药理学学术会议

作者：郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室

电压门控钙通道受钙依赖性易化和失活两种相互对立的反馈机制的调节。研究表明此调节机制的失衡与心律失常等的发病机制密切相关。目前认为不同浓度的钙离子,通过作为钙感受器的钙调蛋白(calmodulin,CaM)的介导,分别引发钙依赖性易化和... 详细信息

电压门控钙通道受钙依赖性易化和失活两种相互对立的反馈机制的调节。研究表明此调节机制的失衡与心律失常等的发病机制密切相关。目前认为不同浓度的钙离子,通过作为钙感受器的钙调蛋白(calmodulin,CaM)的介导,分别引发钙依赖性易化和失活。然而,同一分子CaM如何介导易化和失活两个相对立的过程,其具体

关键词：钙调蛋白钙通道钙依赖性

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不同生理周期大鼠缺血再灌注损伤中CaMKⅡ蛋白的变化

不同生理周期大鼠缺血再灌注损伤中CaMKⅡ蛋白的变化

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2013中国生理学会心血管生理学术会议

作者：封瑞印丹丹胡慧媛高青华孙宇孙威郭凤赵美眯郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室

目的检测不同生理周期大鼠缺血再灌注损伤时CaMKⅡ蛋白表达的变化,探讨CaMKⅡ与雌激素对心肌缺血再灌注损伤保护作用的关系。方法通过检测大鼠血液中雌二醇含量和阴道涂片法将大鼠分成动情间期组、动情前期组、动情期组和动情后期组。... 详细信息

目的检测不同生理周期大鼠缺血再灌注损伤时CaMKⅡ蛋白表达的变化,探讨CaMKⅡ与雌激素对心肌缺血再灌注损伤保护作用的关系。方法通过检测大鼠血液中雌二醇含量和阴道涂片法将大鼠分成动情间期组、动情前期组、动情期组和动情后期组。各组大鼠进行离体心脏

关键词：缺血再灌注损伤生理周期雌激素

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心肌Kv7.1钾通道IQ1基序蛋白的制备与纯化

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解剖科学进展 2022年第2期28卷 197-199,203页

作者：张瑞佳邵秀丽朱荣利张晓琳孙旋旋郝丽英封瑞中国医科大学药学院药物毒理学教研室辽宁沈阳110122

目的制备与纯化心肌Kv7.1钾通道IQ1基序的蛋白,为研究钾离子通道蛋白片段与钙调蛋白(calmodulin,CaM)的相互作用做准备,为明确相关心血管疾病发病机制奠定基础。方法采用基因重组技术,将IQ1基因片段插入pGEX-6p-1质粒,并将重组质粒转... 详细信息

目的制备与纯化心肌Kv7.1钾通道IQ1基序的蛋白,为研究钾离子通道蛋白片段与钙调蛋白(calmodulin,CaM)的相互作用做准备,为明确相关心血管疾病发病机制奠定基础。方法采用基因重组技术,将IQ1基因片段插入pGEX-6p-1质粒,并将重组质粒转化入大肠杆菌,使其在大肠杆菌中诱导表达IQ1蛋白,再采用酶裂解、超声破碎法提取IQ1蛋白,使用SDS-PAGE电泳确认制备蛋白的浓度与纯度,Pull-down assay方法检测蛋白的结合能力。结果本研究制备了较高浓度与纯度的心肌Kv7.1钾通道的IQ1蛋白,且在2mM的Ca;浓度下,CaM与IQ1的结合可能呈浓度依赖性,说明制备的IQ1蛋白具有很好的结合能力。结论采用基因重组技术与超声破碎方法能提取纯化心肌Kv7.1通道IQ1基序蛋白,并且浓度和结合能力均很好,可用来进一步的深入实验研究。

关键词：钾离子通道基因重组钙调蛋白 IQ基序蛋白长QT综合征

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壬基酚(NP)对豚鼠离体心脏的毒性作用

壬基酚(NP)对豚鼠离体心脏的毒性作用

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2013中国生理学会心血管生理学术会议

作者：孙宇王燕印丹丹胡慧媛赵美眯郝丽英中国医科大学药学院药物毒理学教研室

背景壬基酚(nonylphenol,NP)是目前对环境污染较为严重的内分泌干扰物之一,且易在生物体内蓄积。众多研究表明NP对内分泌系统、生殖系统、神经系统等均具有一定毒性作用,然而NP对心血管系统的毒性作用目前尚不明确。本文旨在探讨NP对心... 详细信息

背景壬基酚(nonylphenol,NP)是目前对环境污染较为严重的内分泌干扰物之一,且易在生物体内蓄积。众多研究表明NP对内分泌系统、生殖系统、神经系统等均具有一定毒性作用,然而NP对心血管系统的毒性作用目前尚不明确。本文旨在探讨NP对心血管系统的毒性作用。

关键词：毒性作用心血管系统离体心脏壬基酚

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