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南方医科大学学报 2009年第2期29卷 289-291页

作者：王毅飞蔡德鸿陈宏莫永炎伊娜邢飞跃南方医科大学珠江医院内分泌科广东广州510282 南方医科大学病理生理学教研室广东广州510515 广州市中医院内分泌科广东广州510130 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632

目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标... 详细信息

目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标记的PPARγ2启动子寡核苷酸结合,丙烯酰胺非变性胶电泳分离,Odyssey红外荧光成像系统扫描分析。结果一条DNA-蛋白结合复合物图像清晰直观,信号强度随着蛋白量的增加而增加。结论红外荧光技术可用于DNA-蛋白复合物电泳迁移率变动的分析,具有灵敏度高、操作方便的优点。

关键词：红外荧光电泳迁移率 DNA-蛋白复合物糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白过氧化物酶体增殖物活化受体γ2

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His-GILZ原核表达载体的构建及其表达与纯化

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广东医学 2009年第2期30卷 191-193页

作者：王毅飞蔡德鸿陈宏莫永炎伊娜邢飞跃南方医科大学珠江医院内分泌科广州510282 南方医科大学病理生理学教研室广州510515 广东省广州市中医院内分泌科 510130 暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的获取糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)的His融合蛋白,为下阶段深入研究GILZ的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础。方法利用基因工程技术,BamHⅠ/XhoⅠ酶切真核表达质粒HA-GILZ/PcDNA3获得GILZ cDNA,重组于能表达6个组... 详细信息

目的获取糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)的His融合蛋白,为下阶段深入研究GILZ的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础。方法利用基因工程技术,BamHⅠ/XhoⅠ酶切真核表达质粒HA-GILZ/PcDNA3获得GILZ cDNA,重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒pET-30a中。然后用该亚克隆重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA柱纯化。结果亚克隆获得GILZ/pET-30a高效原核表达重组载体,诱导表达的融合蛋白占细菌总蛋白高达40%以上,纯化的蛋白分子量约为24kD。结论成功构建His-GILZ融合蛋白原核表达载体,并高效表达、纯化,为进一步研究其结构功能关系和临床应用奠定了基础。

关键词：糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白融合蛋白原核蛋白构建纯化

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GILZ真核表达载体的构建及其表达定位

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中国病理生理杂志 2009年第3期25卷 618-621页

作者：王毅飞邢飞跃蔡德鸿陈宏莫永炎伊娜南方医科大学珠江医院内分泌科广东广州510282 暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫中心广东广州510632 南方医科大学病理生理教研室广东广州510515 广州市中医院内分泌科广东广州510130

目的:克隆、构建HA标签的糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ表达载体,观察其在细胞中表达与定位,为研究GILZ在脂肪细胞分化中的作用提供工具。方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从C3H10T1/2细胞中扩增带有HA标签的GILZcDNA编码区,并将其重... 详细信息

目的:克隆、构建HA标签的糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白GILZ表达载体,观察其在细胞中表达与定位,为研究GILZ在脂肪细胞分化中的作用提供工具。方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)法从C3H10T1/2细胞中扩增带有HA标签的GILZcDNA编码区,并将其重组于真核表达载体pcDNA3中。经酶切、序列鉴定分析后,将该重组质粒通过Lipofectamine2000脂质体和CaCl2方法,分别转染C3H10T1/2和293T细胞,用HA抗体免疫荧光和免疫印迹法检测GILZ在细胞内的表达、分布及分子量大小。结果:HA-GILZ表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功,并在C3H10T1/2和293T细胞中获得了高效表达。在荧光显微镜下,GILZ主要表达于细胞质内,分子量约20kD。结论:成功构建HA-GILZ基因表达载体并表达于C3H10T1/2细胞质中,为GILZ的功能研究奠定了基础。

关键词：糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白 C3H10T1/2细胞真核表达载体

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姜黄素对gp120所致大鼠学习记忆障碍的作用及机制研究

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第4期24卷 328-331页

作者：董军陆大祥潘锐唐红梅暨南大学医学院病理生理教研室暨南大学附属第一医院骨科广东广州510632

目的:探讨姜黄素改善HIV-1包膜糖蛋白gp120所致大鼠学习记忆障碍的作用及机制。方法:用gp120侧脑室灌注制备拟艾滋痴呆症动物模型,并用水迷宫实验观察侧脑室灌注gp120造成的大鼠认知功能的障碍。SD大鼠随机分为6组:对照组、假手术组、... 详细信息

目的:探讨姜黄素改善HIV-1包膜糖蛋白gp120所致大鼠学习记忆障碍的作用及机制。方法:用gp120侧脑室灌注制备拟艾滋痴呆症动物模型,并用水迷宫实验观察侧脑室灌注gp120造成的大鼠认知功能的障碍。SD大鼠随机分为6组:对照组、假手术组、模型组、姜黄素低、中和高剂量治疗组。除对照组、假手术组外其余4组侧脑室缓慢注射5μL的gp120,连续3d。第4天开始,姜黄素低、中、高剂量治疗组分别给予50mg/(kg·d)、100mg/(kg·d)、200mg/(kg·d)的姜黄素灌胃,对照组、假手术组和模型组大鼠用双蒸水灌胃,连续灌胃14d。然后各组大鼠进行水迷宫测试,并分组进行NMDA2B受体免疫组化染色。结果:50ng/d的gp120侧脑室灌注3d,可制备拟艾滋痴呆症动物模型。Morris水迷宫可见模型组大鼠逃避潜伏期与对照组相比明显延长(P<0.05),姜黄素低、中、高剂量治疗组大鼠的逃避潜伏期与模型组相比缩短,其中姜黄素低剂量组效果更好(P<0.05)。免疫组化结果显示模型组大鼠海马内N-甲基天冬氨酸受体(NMDA2B)的表达与对照组相比有所降低(P<0.01),姜黄素各剂量治疗组NMDA2B受体的表达与模型组相比有所上调。结论:gp120侧脑室灌注可制备拟艾滋痴呆症动物模型,姜黄素具有改善侧脑室灌注gp120所致大鼠学习记忆障碍的作用,其机制可能与对抗NMDA2B受体表达下调有关。

关键词：艾滋痴呆症 gp120 姜黄素 N-甲基天冬氨酸受体

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视觉诱发电位对危重患者病情评估及预后判断的研究

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中华危重病急救医学 2008年第11期20卷 -页

作者：曾红科江稳强陈纯波吕波叶珩王桥生孙诚陆大祥 510632 广东广州暨南大学医学院病理生理教研室 510632 广东广州暨南大学医学院病理生理教研室广东人民医院急危重症医学部暨南大学医学院病理生理教研室广东广州510632

目的探讨危重患者闪光视觉诱发电位(fVEP)变化与病情严重程度及预后的关系.方法将69例危重病患者按28 d临床结局分为死亡组和存活组,比较两组患者fVEP N2波峰潜伏期差异及其与病情严重程度和预后相关评分的关系.根据原发病情况将患者... 详细信息

目的探讨危重患者闪光视觉诱发电位(fVEP)变化与病情严重程度及预后的关系.方法将69例危重病患者按28 d临床结局分为死亡组和存活组,比较两组患者fVEP N2波峰潜伏期差异及其与病情严重程度和预后相关评分的关系.根据原发病情况将患者分为原发颅内病变组和其他意识障碍组,分别进行病情严重程度和预后相关分析,评价fVEP及相关临床评分对预后预测的效果.结果死亡组fVEP N2波峰潜伏期明显较存活组延迟[(228.6±41.7)ms比(190.5±49.2)ms,P＜0.01];死亡组急性生理学与慢性健康状况评分系统I(APACHEⅡ)评分((25.9±6.4)分比(22.5±6.7)分]和感染相关器官衰竭评分系统(SOFA)评分[(6.7±2.0)分比(5.4±2.5)分]高于存活组(P均＜0.05),死亡组格拉斯哥昏迷评分(GCS)低于存活组[(6.3±2.4)分比(7.0±3.0)分,P＜0.05];N2波峰潜伏期与GCS呈显著负相关(r=-0.332,P＜0,01).原发颅内病变组与总体病死趋势类似.其他意识障碍组死亡患者N2波峰潜伏期明显长于存活组[(226.0±46.7)ms比(1 68.8±54.1)ms,P＜0.05],N2波峰潜伏期与SOFA评分呈显著正相关(r=0.526,P＜0.05);N2波峰潜伏期和SOFA评分预测死亡的受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积分别为0.800±0.104(P＜0.05)和0.6504-0.131(P＞0.05),N 2波峰潜伏期用于判断预后有显著意义.结论 fVEP的变化在一定程度上反映了危重患者病情严重程度和预后;对非原发颅内病变意识障碍患者,fVEP在预测多器官功能障碍综合征(MODS)的发生和死亡上有一定意义.

关键词：闪光视觉诱发电位危重患者预后感染相关器官衰竭评分系统评分急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ评分

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结膜碱性烧伤致干眼模型的探讨

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广东医学 2008年第5期29卷 753-755页

作者：黄佳杨水平陈敏陈剑王彦平暨南大学附属第一医院眼科广州510630 暨南大学医学院病理生理教研室广州510630

目的建立并评价新型干眼动物模型造模方法。方法新西兰白兔20只,随机分为实验组和对照组,1.0mmol/L的NaOH溶液结膜化学烧伤干眼造模,定期行干眼临床检查、结膜印迹细胞学和免疫组化检测。结果实验眼结膜充血及分泌物、荧光素钠和虎红染... 详细信息

目的建立并评价新型干眼动物模型造模方法。方法新西兰白兔20只,随机分为实验组和对照组,1.0mmol/L的NaOH溶液结膜化学烧伤干眼造模,定期行干眼临床检查、结膜印迹细胞学和免疫组化检测。结果实验眼结膜充血及分泌物、荧光素钠和虎红染色积分术后第1天表现最明显,后逐渐下降;泪膜破裂时间7d下降最明显,后逐渐延长,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);基础泪液分泌与对照组比较差异无显著性(P>0.05);杯状细胞密度与特异性黏蛋白MUC5AC阳性率和积分在4周内均与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论结膜碱烧伤制作的干眼模型是一种操作简单、稳定的制模方法。

关键词：碱烧伤干眼动物模型杯状细胞

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CREB在姜黄素改善gp120所致大鼠学习记忆障碍中的作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2008年第4期29卷 362-366页

作者：黄涛董军陆大祥唐红梅潘锐付咏梅暨南大学医学院病理生理教研室附属第一医院骨科广东广州510630

目的:探讨cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在姜黄素改善gp120所致大鼠学习记忆障碍中的作用。方法:SD大鼠随机分为6组:对照组、假手术组、模型组、姜黄素低、中和高剂量治疗组;除对照组、假手术组外其余4组侧脑室缓慢注射5μL的gp120,连续3 ... 详细信息

目的:探讨cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在姜黄素改善gp120所致大鼠学习记忆障碍中的作用。方法:SD大鼠随机分为6组:对照组、假手术组、模型组、姜黄素低、中和高剂量治疗组;除对照组、假手术组外其余4组侧脑室缓慢注射5μL的gp120,连续3 d。第4天开始,低、中、高剂量治疗组分别每天给予50、100、200 mg/kg的姜黄素灌胃,对照组、假手术组和模型组大鼠用双蒸水灌胃,连续灌胃14 d。各组大鼠进行水迷宫测试,并分组进行海马磷酸化的CREB(pCREB)免疫组化染色。结果:①Morris水迷宫空间探索实验显示模型组大鼠反应迟钝,寻找目标象限所需的时间较长,在目标象限停留的时间及穿越次数明显短于对照组(P<0.05);姜黄素低、中、高剂量治疗组大鼠寻找目标象限所需时间缩短,在目标象限停留的时间及穿越次数明显长于模型组(P<0.05),其中姜黄素低剂量组效果更好(P<0.05)。②免疫组化结果显示模型组大鼠海马内pCREB的表达与对照组相比有所降低(P<0.01),姜黄素各剂量治疗组pCREB的表达有所上调。结论:姜黄素具有改善gp120所致大鼠学习记忆障碍的作用,其机制可能与增加海马CREB的磷酸化水平有关。

关键词：艾滋痴呆症 gp120 姜黄素 cAMP反应元件结合蛋白

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纤维蛋白胶为载体构建人羊膜上皮细胞植片的实验研究

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中国病理生理杂志 2008年第6期24卷 1199-1204页

作者：赵芳陈剑吴静徐锦堂周清王彦平金玲赵松滨暨南大学附属第一医院眼科广东广州516032 暨南大学医学院眼科研究室广东广州516032 暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州516032

目的:探讨利用纤维蛋白胶作为支架构建组织工程人羊膜上皮细胞(HAECs)植片重建眼表的可行性。方法:取足月剖宫产胎盘羊膜,经胶原酶和胰蛋白酶消化后,获得HAECs。在体外构建的纤维蛋白胶片上培养HAECs,细胞融合成片后,利用气液界面复层化... 详细信息

目的:探讨利用纤维蛋白胶作为支架构建组织工程人羊膜上皮细胞(HAECs)植片重建眼表的可行性。方法:取足月剖宫产胎盘羊膜,经胶原酶和胰蛋白酶消化后,获得HAECs。在体外构建的纤维蛋白胶片上培养HAECs,细胞融合成片后,利用气液界面复层化,采用倒置显微镜、组织切片、HE染色、细胞角蛋白免疫组织化学染色和扫描电子显微镜观察HAECs的生长情况。结果:HAECs在纤维蛋白胶表面生长良好,细胞呈圆形或多角形,长满后呈上皮细胞特有的铺路石样外观,扫描电镜观察细胞表面有丰富的微绒毛,细胞广谱角蛋白单克隆抗体染色阳性。细胞有复层生长趋势,植片较为透明。结论:以纤维蛋白胶为载体构建组织工程人HAECs植片,具有眼表重建的潜在运用价值。

关键词：羊膜上皮细胞人纤维蛋白组织黏着剂细胞培养

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纤维蛋白胶与兔角膜3种细胞构建组织工程细胞片研究

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中国病理生理杂志 2008年第4期24卷 797-801页

作者：梁晓东陈建苏郑佩娥陈小琳暨南大学附属第一医院眼科广东广州510632 暨南大学医学院眼科研究室广东广州510632 暨南大学医学院病理学教研室广东广州510632 暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632

目的:观察兔角膜3种细胞能否在体外构建的纤维蛋白胶体上良好生长,探讨纤维蛋白胶作为组织工程细胞片支架材料的可行性。方法:将培养扩增的兔角膜3种细胞分别接种于纤维蛋白胶表面,采用倒置显微镜,HE染色和扫描电子显微镜,观察兔角膜3... 详细信息

目的:观察兔角膜3种细胞能否在体外构建的纤维蛋白胶体上良好生长,探讨纤维蛋白胶作为组织工程细胞片支架材料的可行性。方法:将培养扩增的兔角膜3种细胞分别接种于纤维蛋白胶表面,采用倒置显微镜,HE染色和扫描电子显微镜,观察兔角膜3种细胞在纤维蛋白胶表面生长情况。结果:制备的薄层纤维蛋白胶支架光滑、透明,随培养细胞的生长部分降解,可获得仅带少量纤维蛋白胶的细胞片。角膜3种细胞在纤维蛋白胶表面生长良好,可保持生理状态的细胞形态。角膜上皮细胞可形成单层和复层,细胞间连接紧密。角膜内皮细胞呈圆形或多角形,细胞大小一致,排列紧密。角膜基质细胞拉长生长,呈三角形或树枝状,细胞间连接明显,可形成网状连接。结论:体外构建的纤维蛋白胶与角膜3种细胞有组织相容性,纤维蛋白胶有望作为角膜3种细胞的生长载体构建可供移植的组织工程细胞片。

关键词：纤维蛋白组织黏着剂角膜细胞培养组织工程

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N-乙酰半胱氨酸对肺心病患者血浆血管性血友病因子、丙二醛含量和超氧化物岐化酶活性的影响

引用

临床荟萃 2008年第7期23卷 490-491页

作者：林洪刘晓妍王达安程少冰暨南大学附属第一医院内科广东广州510632 暨南大学医学院病理生理学教研室广东广州510632 暨南大学医学院中医系广东广州510632

肺血管内皮细胞损伤及继而引起的血管活性因子失衡是慢性阻塞性肺病(COPD)造成肺动脉高压、并最终发展为肺心病的重要发病环节。既往研究表明,过氧化损伤可能是肺心病患者肺血管内皮细胞受损的重要因素之一,而N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcy... 详细信息

肺血管内皮细胞损伤及继而引起的血管活性因子失衡是慢性阻塞性肺病(COPD)造成肺动脉高压、并最终发展为肺心病的重要发病环节。既往研究表明,过氧化损伤可能是肺心病患者肺血管内皮细胞受损的重要因素之一,而N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)是目前广泛用于治疗COPD、肺心病强有力的抗氧化剂。本研究拟通过观察慢性肺心病急性发作期患者使用NAC治疗前后血管内皮细胞损伤的分子标记物——[第一段]

关键词：肺心病乙酰半胱氨酸丙二醛

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