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Smurf2对增生性瘢痕TGF-β1信号通路负向调节因子Smad7的影响及调控机制

中华整形外科杂志 2018年第12期34卷 1059-1069页

作者：刘昌玲张志刘志河陈宾汤文彬曹雯娟李孝建暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤整形科广州510220

目的探讨Smurf2对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1/Smad信号转导通路负向调节因子Smad7的影响及调控机制。方法标本来自暨南大学附属广州市红十字会医院2014年1月至10月收治的8例需要手术的增生性瘢痕患者,年龄1岁8个月至7岁,瘢痕增生的时... 详细信息

目的探讨Smurf2对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1/Smad信号转导通路负向调节因子Smad7的影响及调控机制。方法标本来自暨南大学附属广州市红十字会医院2014年1月至10月收治的8例需要手术的增生性瘢痕患者,年龄1岁8个月至7岁,瘢痕增生的时间在2~12个月,以同一患者术中剩余正常皮肤作为对照。采用组织块培养法分离后传代培养人增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞,取第3~5代细胞进行实验。①采用蛋白质印记法检测2组细胞中Smad7的蛋白表达水平;②加入外源性TGF-β1(10ng/ml)作用0min、5min、15min、30min、1h、2h、12h后,采用RT-PCR和蛋白质印记法分别检测2组细胞中Smad7的mRNA和蛋白表达水平;③收集增生性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞的细胞裂解液,分别加入泛素化混合物于37℃孵育1h、2h、6h,采用蛋白质印记法检测2组细胞中Smad7的体外降解水平;④收集增生性瘢痕成纤维细胞的细胞裂解液,同时加入泛素化混合物及蛋白酶体抑制剂MG132/MG115(50μmol/L∶50μmol/L),研究其对Smad7体外降解的抑制作用;⑤利用免疫共沉淀技术,检测增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7与E3泛素连接酶Smurf2是否存在相互作用;⑥采用siRNA干扰技术沉默增生性瘢痕成纤维细胞中Smurf2的基因表达,研究沉默Smurf2后,增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7蛋白在TGF-β1刺激下的表达水平。实验数据采用两样本t检验、单因素方差分析进行统计分析,组内两两比较采用SNK法,以P<0.05认为差异有统计学意义。结果在正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞中,Smad7的蛋白表达水平无明显差异(t=0.763,P=0.46);②在外源性TGF-β1刺激下,正常皮肤成纤维细胞中Smad7mRNA和蛋白表达水平均呈时间依赖性增高均P<0.05,增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7mRNA表达呈时间依赖性增加(除5min时P>0.05,其余各时间点与未刺激细胞比较,P值均<0.05),蛋白水平无明显变化(P>0.05);③正常皮肤成纤维细胞中,Smad7的体外降解无明显变化(P=0.162),增生性瘢痕成纤维细胞中,Smad7的体外降解增强(各时间点Smad7蛋白表达水平与对照组及上一个时间点比较,除2h与1h比较时P值为0.012,其余P值均为0.000);④蛋白酶体抑制剂MG132/MG115可以阻断增生性瘢痕成纤维细胞中Smad7的体外降解;⑤在用Smurf2抗体免疫共沉淀下来的蛋白复合物中检测到Smad7,表明增生性瘢痕成纤维细胞中Smurf2与Smad7存在相互作用;⑥增生性瘢痕成纤维细胞中,加入TGF-β1刺激,Smad7的蛋白表达水平无明显变化;沉默Smurf2基因后,Smad7蛋白在TGF-β1刺激下表达增高。结论在烧伤后儿童增生性瘢痕成纤维细胞中,Smurf2通过泛素化降解Smad7,削弱了Smad7对TGF-β1信号转导的抑制作用,从而增强了TGF-β1/Smad信号转导,可能参与了增生性瘢痕的形成。

关键词：转化生长因子-β 增生性瘢痕 Smurf2 Smad蛋白

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神经调节素受体降解蛋白1调控巨噬细胞极化对成纤维细胞功能的影响

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第三军医大学学报 2021年第11期43卷 1003-1009页

作者：贾康张志刘昌玲曹雯娟刘志河陈宾汤文彬李孝建暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤整形科广州510220

目的探讨E3连接酶神经调节素受体降解蛋白1(neuregulin receptor degradation protein 1,Nrdp1)调控巨噬细胞极化对成纤维细胞功能的影响。方法分别以内毒素(lipopolysaccharide, LPS)和γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)混合剂、白细胞介素13(interleukin-13,IL-13)诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞为M1型巨噬细胞(简称M1)和M2型巨噬细胞(简称M2);流式细胞仪、Western blot分别检测M1表面标记蛋白CD11c、特异性分泌物——诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxide synthase, iNOS)及M2表面标记蛋白CD206、特异性分泌物——精氨酸酶1(arginine1,Arg1)的表达。转染siRNA-Nrdp1 24 h, Western blot检测Nrdp1表达;建立巨噬细胞与成纤维细胞的Transwell共培养体系,按添加的诱导剂不同,分为LPS组(LPS及IFN-γ共同诱导)、LPS-NC组(siRNA阴性Nrdp1无关序列对照组)、LPS-siRNA-Nrdp1组(转染siRNA-Nrdp1质粒)及对应的IL-13组、IL-13-NC组、IL-13-siRNA-Nrdp1组;培养8、12、24 h, CCK-8检测成纤维细胞增殖情况,ELISA检测转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1, TGF-β1)、Ⅰ型前胶原含量。对数据行析因设计方差分析、Bonferroni法检验。结果 LPS诱导的巨噬细胞中,M1表面标记蛋白CD11c阳性细胞比例显著高于对照组(P<0.05);IL-13诱导的巨噬细胞中,M2表面标记蛋白CD206阳性细胞比例显著高于未诱导组(P<0.05);LPS组M1特异性分泌物iNOS表达量显著高于对照组(P<0.01)及IL-13组(P<0.01);IL-13组M2型特异性分泌物Arg1显著高于对照组及LPS组(P<0.01)。siRNA-Nrdp1干扰巨噬细胞24 h后,Western blot检测结果显示,干扰组(siRNA-Nrdp1组)Nrdp1的蛋白表达量明显低于空白对照组(P<0.01)及阴性对照组(P<0.01)。共培养24 h后,CCK-8检测结果显示,IL-13-siRNA-Nrdp1组成纤维细胞增殖数量明显低于IL-13组及IL-13-NC组(P<0.01);ELISA检测结果显示,IL-13-siRNA-Nrdp1组TGF-β1含量明显低于IL-13组及IL-13-NC组(P<0.01),IL-13-siRNA-Nrdp1组Ⅰ型前胶原含量明显低于IL-13组(P<0.01)。结论通过siRNA干扰Nrdp1合成,影响巨噬细胞向M2型极化,可抑制M2型巨噬细胞与成纤维细胞共培养体系中成纤维细胞的增殖,减少共培养体系中成纤维细胞TGF-β1及Ⅰ型前胶原的分泌。

关键词：巨噬细胞极化神经调节素受体降解蛋白1 转化生长因子β1 Ⅰ型前胶原

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红细胞平均体积和脆性及血红蛋白电泳联合检测在地中海贫血诊断中的价值

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中华检验医学杂志 2005年第3期28卷 244-246页

作者：何雅军杨小华马福广舒建昌暨南大学医学院附属广州市红十字会医院检验科 510220

目的　探讨红细胞平均体积(MCV)、红细胞脆性和血红蛋白 (Hb)电泳联合检测在地中海贫血诊断中的应用价值。方法　采用日本SysmexKX 21自动血细胞分析仪、中山医科大学红细胞脆性一管定量法、美国Helena公司KEP型全自动电泳分析系统,分... 详细信息

目的　探讨红细胞平均体积(MCV)、红细胞脆性和血红蛋白 (Hb)电泳联合检测在地中海贫血诊断中的应用价值。方法　采用日本SysmexKX 21自动血细胞分析仪、中山医科大学红细胞脆性一管定量法、美国Helena公司KEP型全自动电泳分析系统,分别对确诊的 160例地中海贫血患者和110例非地中海贫血者进行MCV、红细胞脆性和Hb电泳测定,并对结果作相关统计学分析。结果　MCV、红细胞脆性、Hb电泳单项检测对地中海贫血诊断的灵敏度及特异度分别为 91. 3%、78 .1%、71 .3%及 69 .1%、90%、91. 8%;MCV与Hb电泳、红细胞脆性与Hb电泳 2项检测平行联合的灵敏度及特异度分别为 97. 5%、93 .7%及 63 6%、78 2%;系列联合的灵敏度及特异度分别为 71 2%、68 .8%及97 .3%、99 .1%。MCV、红细胞脆性、Hb电泳 3项检测平行联合的灵敏度、特异度为 100%、61 8%;系列联合的灵敏度和特异度为 67. 5%、100%。经u检验,平行联合检测的灵敏度与各单项检测灵敏度之间、联合检测的特异度与各单项检测特异度之间差异有统计学意义 (P<0 .05)。结论　MCV、红细胞脆性、Hb电泳平行联合检测可提高灵敏度,联合检测可提高特异度。

关键词：特异度诊断 MCV 联合检测红细胞平均体积地中海贫血电泳单项平行结论

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维甲酸改变腭突发育关键时期细胞增殖和凋亡导致腭裂

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中华整形外科杂志 2016年第3期32卷 220-224页

作者：胡晓李叶扬梁岷林伟华暨南大学医学院附属广州市红十字会医院烧伤整形科 510220

目的探讨维甲酸对腭发育关键时期腭突间充质细胞和上皮细胞增殖和凋亡的影响，确定其致腭裂的胚胎学作用节点。方法将100只怀孕12d（E12）的C57孕母鼠采用随机数字表法平均分为2组，实验组灌胃维甲酸1次，70mg／kg，对照组灌胃玉米油，... 详细信息

目的探讨维甲酸对腭发育关键时期腭突间充质细胞和上皮细胞增殖和凋亡的影响，确定其致腭裂的胚胎学作用节点。方法将100只怀孕12d（E12）的C57孕母鼠采用随机数字表法平均分为2组，实验组灌胃维甲酸1次，70mg／kg，对照组灌胃玉米油，分别取E13．5、E14．5、E15．5和E17．5的胎鼠头部制成石蜡切片，HE染色观察腭突的形态，BrdU和TUNEL染色分别检测间充质和上皮细胞增殖、凋亡情况。结果在E13．5～15．5切片中，维甲酸处理组的前部腭突间充质细胞增殖明显增多，差异有统计学意义。后部腭突间充质细胞的增殖无明显差异。对照组前部和后部的上皮细胞增殖均无明显差异。E13．5～14．5切片中维甲酸处理组口腔侧上皮细胞的凋亡减少。结论维甲酸诱导腭突间充质细胞过度增殖，口腔面上皮细胞凋亡减少，腭突不能正常抬升和融合，最终导致腭裂发生。

关键词：腭裂维甲酸细胞增殖细胞凋亡

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烧伤并发脓毒症后免疫与凝血功能及营养代谢变化对创面愈合的影响研究进展

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中华烧伤杂志 2014年第2期30卷 137-140页

作者：罗慧李孝建曹雯娟暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤整形科广州510220 创伤研究所

创面愈合是一个复杂的生物学过程，需要有活力的各种细胞、细胞因子、生长因子及胶原蛋白等的相互作用。大面积烧伤患者往往因为创面感染导致机体发生脓毒症和MODS等严重并发症，不仅影响机体各器官的功能，也影响了创面愈合的过程。有... 详细信息

创面愈合是一个复杂的生物学过程，需要有活力的各种细胞、细胞因子、生长因子及胶原蛋白等的相互作用。大面积烧伤患者往往因为创面感染导致机体发生脓毒症和MODS等严重并发症，不仅影响机体各器官的功能，也影响了创面愈合的过程。有关烧伤并发脓毒症后对心、肺等脏器功能的影响已有较多研究，但对创面愈合影响的研究甚少。

关键词：大面积烧伤患者严重并发症创面愈合脓毒症代谢变化凝血功能营养免疫

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椎体骨质疏松性骨折MRI研究进展

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中国介入影像与治疗学 2018年第2期15卷 119-122页

作者：郭威曾旭文梁治平熊玉超彭丽君暨南大学第一临床医学院广东广州510220 广州市红十字会医院暨南大学医学院附属广州红十字会医院放射科广东广州510220

椎体骨质疏松性骨折(OCVF)的发病率逐年上升。MRI可无创观察OCVF的类型、病理分期及严重程度等,且无辐射。近年来,MRI已成为评价OCVF的重要手段,可为临床选择治疗方案提供影像学依据。本文对OCVF的MRI研究进展进行综述。

关键词：磁共振成像脊柱骨折骨质疏松

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整合素连接激酶对瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响

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中华整形外科杂志 2014年第1期30卷 45-49页

作者：林伟华李叶扬米兰李罡孙敬恩王仁坤梁振文暨南大学医学院附属广州市红十字会医院烧伤整形科广州510220

【摘要】目的观察整合素连接激酶（integrin—linkedkinase，ILK）对人瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响，以探讨其在瘢痕形成中的作用。方法体外分离培养瘢痕成纤维细胞，并按下述方法处理并分组：①空白对照组，仅含有常规高糖DMEM培... 详细信息

【摘要】目的观察整合素连接激酶（integrin—linkedkinase，ILK）对人瘢痕成纤维细胞增殖和分化的影响，以探讨其在瘢痕形成中的作用。方法体外分离培养瘢痕成纤维细胞，并按下述方法处理并分组：①空白对照组，仅含有常规高糖DMEM培养液；②转染试剂jetPRIME。TM对照组（jetPRIME。TM对照组），常规高糖DMEM培养液与200μljetPRIME。TMbuffer及4txljetPRIME。TM反应试剂；③ILK小分子干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）组（ILKsiRNA组），常规高糖DMEM培养液与siRNA转染复合物；④ILK互补DNA（complementaryDNA，cDNA）组（ILKcDNA组），常规高糖DMEM培养液与cDNA转染复合物。分别检测细胞增殖、ILK信使RNA（messengerRNA，mRNA）、仅．平滑肌肌动蛋白（0I—smoothmuscleaetin，d—SMA）mRNA表达及其蛋白表达水平。结果①四唑翁盐（XTT）检测结果表明，转染后48h，各组成纤维细胞增殖水平，空白对照组为0．820±0．065，jetPRIMETM对照组为0．873±0．041，ILKsiRNA组为0．554±0．013，ILKcDNA组为1．296±0．094。各组48h内的细胞增殖曲线见，ILKsiRNA组的细胞增殖极为平缓，而ILKcDNA组的细胞增殖水平从12h开始逐渐升高。转染后48h，ILKsiRNA组细胞增殖水平明显低于其他3组（P值分别为0．021、0．034、0），ILKcDNA组细胞增殖水平明显高于其他3组（P值分别为0．017、0．009、0）。②实时荧光定量聚合酶链式反应（Real—timeqPCR）技术检测结果显示，ILKmRNA和***的表达水平，空白对照组为0．6934-0．412和0．4224-0．037，jetPRIME“对照组为0．621±0．183和0．3884-0．005，ILKsiRNA组为0．0524-0．019和0．0734-0．023，ILKcDNA组为240．1934-35．170和138．056±24．060。ILKsiRNA组ILKmRNA和OL—SMAmRNA表达水平均显著低于其他组，差异有统计学意义（P〈0．05）；而ILKcDNA组ILKmRNA和d—SMAmRNA表达水平均显著高于其他3组，差异有统计学意义（P〈0．05）。③应用Westernblot检测发现ILKsiRNA组的ILK及***蛋白表达明显受到抑制，而ILKcDNA组的ILK及α一SMA蛋白表达均明显增加。结论ILK对成纤维细胞增殖具有促进作用，并能够在转录和翻译水平对n—SMA进行上调控制，可能通过促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化，并在瘢痕的形成与挛缩中起到重要作用。

关键词：【关键词】整合素连接激酶瘢痕成纤维细胞一平滑肌肌动蛋白

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增生性瘢痕组织中褪黑素受体的表达

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中华整形外科杂志 2010年第3期26卷 203-207页

作者：张俊成谢有富刘思隽戴丽冰李建平暨南大学医学院附属广州市红十字会医院烧伤整形科广州510220

目的检测人增生性瘢痕组织和正常皮肤中褪黑素受体含量的差异,探讨其意义.方法人增生性瘢痕组织和正常皮肤各10例,免疫组化检测组织中褪黑素受体GPR50的表达,荧光定量PCR（SYBR Green）检测组织中褪黑素受体MT1、MT2 mRNA含量,并将PC... 详细信息

目的检测人增生性瘢痕组织和正常皮肤中褪黑素受体含量的差异,探讨其意义.方法人增生性瘢痕组织和正常皮肤各10例,免疫组化检测组织中褪黑素受体GPR50的表达,荧光定量PCR（SYBR Green）检测组织中褪黑素受体MT1、MT2 mRNA含量,并将PCR阳性产物基因测序.结果免疫组化显示褪黑素受体GPR50表达于细胞膜和细胞质,正常皮肤表皮基底层细胞、毛囊和汗腺均有褪黑素受体阳性表达,增生性瘢痕组织表皮、残留的毛囊和汗腺内也存在褪黑素受体表达;同时发现增生性瘢痕真皮成纤维细胞有广泛褪黑素受体阳性表达,而正常皮肤组织中则少见表达.荧光定量PCR显示增生性瘢痕组织中MT1、MT2 mRNA含量分别为（1.16584 4±0.21829）和（0.99550 ±0.14624）拷贝数/μl cDNA,正常皮肤中为（0.99081±0.26485）和（0.77083±0.15927）拷贝数/μl cDNA,增生性瘢痕组织中MT1、MT2 mRNA含量均高于正常皮肤（P〈O.05）,同时MT1 mRNA含量在两种组织中均高于MT2 mRNA（P〈0.05）;基因测序显示扩增产物与GeneBank中人MT1、MT2受体基因序列相吻合.结论褪黑素受体在增生性瘢痕组织和正常皮肤中均有表达,而且在增生性瘢痕组织中高于正常皮肤,褪黑素受体在增生性瘢痕形成过程中可能发挥着重要作用.

关键词：瘢痕,肥大性受体,褪黑激素,MT1 受体,褪黑激素,MT2

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重度烧伤合并原发性干燥综合征及抑郁症一例

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中华烧伤杂志 2017年第9期33卷 582-583页

作者：贾康陈宾张志华兴张旭辉刘昌玲李孝建广州市红十字会医院暨南大学医学院附属广州市红十字会医院烧伤整形科510220

患者女，57岁，2016年4月15日在家中不慎被煤气火焰烧伤腹部、双下肢、双臀及会阴部。患者伤后无昏迷、摔倒，创面未特殊处理，立即送往当地医院，行补液、抗感染、创面清创换药等。考虑病情危重，于伤后3d转入笔者单位。

关键词：原发性干燥综合征重度烧伤抑郁症创面清创火焰烧伤病情危重双下肢会阴部

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乳癌放疗后放射性溃疡的治疗

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中华整形外科杂志 2004年第1期20卷 13-15页

作者：李叶扬梁岷汪锦伦矫立仁黄峻暨南大学医学院附属广州市红十字会医院烧伤整形科广州510220

目的　探讨乳癌放射性治疗 (下简称放疗 )后放射性溃疡的治疗方法 ,阐述放疗后臂丛神经损伤的广泛性和严重性。方法　 1999年以来分别应用腹直肌肌皮瓣转移、皮肤软组织扩张、局部皮瓣转移和局部延迟皮瓣转移等方法修复乳癌放疗后放射... 详细信息

目的　探讨乳癌放射性治疗 (下简称放疗 )后放射性溃疡的治疗方法 ,阐述放疗后臂丛神经损伤的广泛性和严重性。方法　 1999年以来分别应用腹直肌肌皮瓣转移、皮肤软组织扩张、局部皮瓣转移和局部延迟皮瓣转移等方法修复乳癌放疗后放射性溃疡 16例 ,并常规行肌电图检查了解臂丛神经损伤的情况。结果　除 1例患者因创口感染而皮瓣部分坏死外 ,其余皮瓣成活良好 ,创面修复满意 ;10例行肌电图检查的患者中 ,有 7例合并有臂丛神经损伤。结论　乳癌放疗后引起的放射性溃疡常伴有臂丛神经损伤 ,这些损伤呈慢性、进行性和不可逆性改变 ;应用血运良好的皮瓣可有效地修复溃疡创面。

关键词：放射性溃疡乳癌放疗后治疗臂丛神经损伤肌电图检查皮瓣简称创面修复

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