检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2020年第12期36卷 1489-1497页

作者：王鹏珍陈松生黄伟光崔进张少衡暨南大学附属广州红十字会医院广州市创伤外科研究所广州510220 暨南大学附属广州红十字会医院心内科广州510220

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)可促进骨髓及脐带血间充质干细胞增殖。然而,bFGF对大鼠外周血间充质干细胞(peripheral blood mesenchymal stem cells,PBMSCs)是否具有促增殖作用,尚缺乏系统研究。本研... 详细信息

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)可促进骨髓及脐带血间充质干细胞增殖。然而,bFGF对大鼠外周血间充质干细胞(peripheral blood mesenchymal stem cells,PBMSCs)是否具有促增殖作用,尚缺乏系统研究。本研究旨在探讨bFGF在大鼠PBMSCs体外培养和扩增中的作用及机制。从大鼠腹主动脉收集动脉血,用Ficoll分离液分离出单个核细胞(mononuclear cells, MNCs),将MNCs用不含bFGF(对照组)和含bFGF(10,20 ng/mL)的DMEM培养基进行贴壁培养获得PBMSCs。取第3代PBMSCs通过流式细胞法分析其细胞表面标志表达情况,以及bFGF对PBMSCs细胞周期的影响。并评价bFGF对其细胞克隆形成数量、细胞增殖和对细胞周期蛋白D1(cyclin D1),细胞周期蛋白E(cyclin E),p21和β-联蛋白(β-catenin)表达的影响。三组之间PBMSCs细胞形态无差异。PBMSCs培养至14 d可出现细胞克隆,细胞培养至21 d,相比于对照组,10 ng/mL bFGF组和20 ng/mL bFGF组PBMSCs细胞汇合度分别增加40%(P<0.05)和80%(P<0.05);20 ng/mL组PBMSCs细胞汇合度较10 ng/mL组增加28%(P<0.05)。第3代PBMSCs高表达MSC标记蛋白CD29和CD90,低表达CD45,符合MSC的细胞表型特征。与对照组比较,10 ng/mL和20 ng/mL bFGF组PBMSCs细胞克隆数分别增加51%(P<0.05)和92%(P<0.05);20 ng/mL组PBMSCs细胞克隆数较10 ng/mL组进一步增加14%(P<0.05)。PBMSCs生长曲线表明,PBMSCs在培养7 d时,与对照组比较,10 ng/mL和20 ng/mLbFGF组PBMSCs细胞数分别增加41%(P<0.05)和61%(P<0.05),且20 ng/mL组间的PBMSCs细胞数明显高于10 ng/mL bFGF组(P<0.05)。流式检测细胞周期结果表明,相比于对照组,10 ng/mL和20 ng/mL bFGF组处于G1期的PBMSCs细胞数显著降低(P<0.05),处于S期的PBMSCs细胞数显著增加(P<0.05)。与10 ng/mL组相比,20 ng/mL bFGF组处于G1期的PBMSCs细胞数显著降低(P<0.05),处于S期的PBMSCs细胞数显著增加(P<0.05)。免疫荧光结果表明,与对照组相比,10 ng/mL和20 ng/mL bFGF显著促进PBMSCsβ-联蛋白核转位和核表达。与10 ng/mL组相比,20 ng/mL bFGF组PBMSC s表现出更强的β-联蛋白核转位和核表达。蛋白质印迹结果表明,与对照组比较,10 ng/mL bFG和20 ng/mLbFGF组β-联蛋白及其靶蛋白细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白E表达量均显著上调(均P<0.05),而p21蛋白表达量显著下调(P<0.05)。与10 ng/mL组相比,20 ng/mL bFGF组细胞周期蛋白D1,细胞周期蛋白E和β-联蛋白表达量均显著上调,p21蛋白表达量显著下调(均P<0.05)。本研究结果证实,bFGF通过激活细胞周期蛋白和β-联蛋白表达,进而促进PBMSCs增殖,将有助于体外大量获得PBMSCs并用于干细胞工程。

关键词：外周血间充质干细胞碱性成纤维细胞生长因子 β-联蛋白增殖

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肌腱干细胞在骨肌腱接点纤维软骨带重建中的作用机制研究进展

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中国修复重建外科杂志 2017年第8期31卷 1006-1009页

作者：秦胜男董飞王文广州市红十字会医院暨南大学附属广州红十字会医院骨科广州市创伤外科研究所广州510220

目的对肌腱干细胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)在骨肌腱接点(bone-tendon junction,BTJ)纤维软骨带重建中的作用机制进行综述。方法广泛查阅国内外有关TDSCs促进BTJ纤维软骨带重建的研究文献,并总结分析。结果 TDSCs具有向骨细胞... 详细信息

目的对肌腱干细胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)在骨肌腱接点(bone-tendon junction,BTJ)纤维软骨带重建中的作用机制进行综述。方法广泛查阅国内外有关TDSCs促进BTJ纤维软骨带重建的研究文献,并总结分析。结果 TDSCs具有向骨细胞、纤维软骨细胞及肌腱细胞分化的能力,因此具备形成纤维软骨带的潜能;决定TDSCs成骨、成软骨分化的因素有力学刺激、生物活性因子、细胞外基质及炎性因子等。结论TDSCs因其来源的特殊性,具有成为重建BTJ纤维软骨带种子细胞的潜能,通过外界刺激可诱导TDSCs形成类似于纤维软骨带结构。

关键词：肌腱干细胞骨肌腱接点纤维软骨带重建

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大鼠脂肪来源干细胞对紫外线造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用研究

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中国修复重建外科杂志 2017年第5期31卷 600-606页

作者：张金丽刘志河汤文彬熊喜峰张志曹雯娟李孝建广州市红十字会医院暨南大学医学院附属广州红十字会医院创伤外科研究所广州510220 广州市红十字会医院暨南大学医学院附属广州红十字会医院烧伤整形科广州510220

目的探讨大鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对紫外线照射造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用。方法取3~4周龄SD大鼠(体质量100~120 g)腹股沟脂肪,利用Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养ADSCs并传代;取第3代细胞采用流式... 详细信息

目的探讨大鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对紫外线照射造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用。方法取3~4周龄SD大鼠(体质量100~120 g)腹股沟脂肪,利用Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养ADSCs并传代;取第3代细胞采用流式细胞仪检测其表面相关标记,行成骨及成脂诱导鉴定其多向分化潜能。另取SD大鼠关节软骨,利用酶消化法分离培养软骨细胞并传代,并行甲苯胺蓝染色鉴定。取第3代软骨细胞,采用40 J/m^2剂量紫外线照射;照射后细胞分别以正常培养基培养(照射组)、以含ADSCs培养上清的培养基培养(ADSCs上清组)或与ADSCs共培养(ADSCs组)24h。以不进行紫外线照射的正常第3代软骨细胞作为对照(对照组)。采用MTS法检测细胞增殖情况,免疫荧光染色、Western blot法检测软骨细胞DNA损伤标志蛋白磷酸化组蛋白2A变异体(phosphorylatedhistone family 2A variant,γH2AX)的表达情况。结果经流式细胞仪检测及成骨、成脂诱导鉴定,所培养细胞为ADSCs。对照组、照射组及ADSCs上清组吸光度(A)值分别为2.20±0.10、1.34±0.04、1.57±0.06,照射组及ADSCs上清组显著低于对照组,照射组显著低于ADSCs上清组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光染色示,照射组、ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白荧光强度明显高于对照组,但ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白荧光强度明显弱于照射组,ADSCs组和ADSCs上清组则无明显区别。Western blot法检测示,照射组、ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白相对表达量均明显高于对照组,但ADSCs上清组及ADSCs组显著低于照射组,差异均有统计学意义(P<0.05);ADSCs组和ADSCs上清组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠ADSCs有助于恢复紫外线照射后的软骨细胞的增殖,降低DNA损伤标志蛋白γH2AX的表达,对紫外线照射所致软骨细胞损伤具有修复作用。

关键词：脂肪来源干细胞软骨细胞辐射修复大鼠

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高纯度猪软骨II型胶原的制备与检测

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生物医学工程学杂志 2001年第4期18卷 592-594页

作者：李斯明叶春婷邹海燕彭燕豪杨小红暨南大学医学院附属广州市红十字会医院广州市创伤外科研究所广州510220

探讨以猪透明软骨为原材料制备高纯度 II型胶原的方法 ,为批量化生产提供依据。以猪透明软骨为原料 ,采用盐酸胍抽提蛋白多糖 ,酸性条件下酶解 ,中间过程经多步纯化去除杂胶原、降解及变性产物 ,最后经Sepharose H.P.阴离子柱层析纯化... 详细信息

探讨以猪透明软骨为原材料制备高纯度 II型胶原的方法 ,为批量化生产提供依据。以猪透明软骨为原料 ,采用盐酸胍抽提蛋白多糖 ,酸性条件下酶解 ,中间过程经多步纯化去除杂胶原、降解及变性产物 ,最后经Sepharose H.P.阴离子柱层析纯化制备出产品并以 Sigma公司产品作对照。 SDS- PAGE电泳、氨基酸成份分析和紫外最大吸收光谱的结果表明 ,所提取的 II型胶原性质符合文献报导 ,纯度比 Sigm a公司的产品高。所提取的 II型胶原为高纯度的 II型胶原 ,由于采用肉用猪作原料 ,来源丰富 ,成本低。

关键词： Ⅱ型胶原制备检测抗体高纯度猪软骨

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几丁质膜作为表皮干细胞培养支架的实验研究

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中华烧伤杂志 2009年第3期25卷 197-201页

作者：沈雁李孝建梁蓉李延仓张琰梁佩红戴丽冰杨小红谭见容李叶扬黄粤暨南大学附属广州市红十字会医院创伤外科研究所广州510220 暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科广州510220

目的了解大鼠表皮干细胞（ESC）与几丁质膜共同构建皮肤组织工程覆盖物的可行性。方法采用冷消化法和Ⅳ型胶原贴壁法分离培养大鼠ESC。倒置显微镜观察细胞生长情况，激光共聚焦显微镜检测其DNA和RNA表达，澳玛蓝比色法测定ESC生长曲线... 详细信息

目的了解大鼠表皮干细胞（ESC）与几丁质膜共同构建皮肤组织工程覆盖物的可行性。方法采用冷消化法和Ⅳ型胶原贴壁法分离培养大鼠ESC。倒置显微镜观察细胞生长情况，激光共聚焦显微镜检测其DNA和RNA表达，澳玛蓝比色法测定ESC生长曲线，流式细胞仪检测ESC表面标志物CD29、CD71、CD49d和CD34，免疫组织化学法测定细胞角蛋白15（CK15）、CK19和P63阳性表达。检测不同倍比稀释几丁质膜浸出液对细胞的影响，并设常规培养为对照组；观察ESC在载体上的生长情况。结果分离培养的细胞经鉴定确认为ESC，细胞倍增时间为48h。其表面标志物CD29、CD49d为阳性，CD71、CD34为阴性；CK15、CK19、P63为阳性。几丁质膜浸出液培养的细胞与对照组比较，在1：8～1：512等比稀释时，有轻微的促细胞增殖作用但差异无统计学意义（P〉0．05）。ESC在几丁质膜上培养2～4周时，肉眼可见棋盘样细胞集落，显微镜下见大量ESC在纤维上增殖。结论几丁质膜可以作为ESC的培养载体，两者有较好的生物相容性。

关键词：皮肤于细胞组织工程仿生材料几丁质

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穗花杉双黄酮抑制人脐静脉内皮细胞血管形成的实验研究

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中山大学学报（自然科学版） 2016年第6期55卷 148-152页

作者：张金丽曹文娟熊喜峰戴丽冰刘志河广州市红十字会医院∥暨南大学医学院附属广州红十字会医院创伤外科研究所广东广州510220

为探讨穗花杉双黄酮(Amentoflame,AF)对人脐静脉内皮细胞ECV304血管形成及机制的影响,从而为穗花杉双黄酮治疗肿瘤及其他血管增生性疾病提供理论基础,采用MTS检测AF对ECV304血管内皮细胞增殖的作用,细胞划痕实验观察AF对ECV304细胞迁移... 详细信息

为探讨穗花杉双黄酮(Amentoflame,AF)对人脐静脉内皮细胞ECV304血管形成及机制的影响,从而为穗花杉双黄酮治疗肿瘤及其他血管增生性疾病提供理论基础,采用MTS检测AF对ECV304血管内皮细胞增殖的作用,细胞划痕实验观察AF对ECV304细胞迁移的影响,体外血管形成实验观察AF对ECV304血管形成的影响,Western blot检测AF对ECV304细胞血管形成相关信号通路及蛋白如磷酸化AKT(p-AKT)、金属基质蛋白酶9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、促血管生成素2(angiopoietin 2,Ang 2)表达影响。结果表明AF能够抑制ECV304细胞的增殖作用,并呈梯度依赖性;AF具有抑制ECV304细胞迁移的作用,并且能够抑制ECV304体外血管样结构的形成;Western blot结果显示100μmol/L的AF能够降低ECV304细胞p-AKT、MMP-9、Ang-2的蛋白表达。

关键词：血管生成内皮细胞穗花杉双黄酮

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淫羊藿苷联合碱性成纤维细胞生长因子促进外周血间充质干细胞自我更新

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第12期37卷 1667-1674页

作者：王鹏珍孟庆奇陈松生张少衡暨南大学附属广州红十字会医院广州市创伤外科研究所广州510220 暨南大学附属广州红十字会医院骨科广州510220 暨南大学附属广州红十字会医院心内科广州510220

研究淫羊藿苷(icariin,ICA)联合碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对大鼠外周血间充质干细胞(rat peripheral blood mesenchymal stem cells,rPBMSCs)增殖、衰老及自我更新的影响。分离、培养并鉴定rPBMSCs;取第3代rPBMSCs用于后续研究。实验分为4组:对照组;ICA组;bFGF(20 ng/mL bFGF)组;联合(ICA和bFGF)组。CCK-8检测结果表明,ICA在浓度为10^(-6) mol/L时,显著促进rPBMSCs增殖,并将该浓度用于后续试验。采用CCK-8法测定各组rPBMSCs吸光度并制作出生长曲线,4组细胞生长曲线均近似"S"形,7 d时,相比于对照组,ICA组、bFGF组和联合组细胞OD值显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),相比于ICA组和bFGF组,联合组rPBMSCs OD值进一步显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。β-半乳糖苷酶染色检测结果表明,相比于对照组,ICA组和bFGF组衰老百分比显著降低(P<0.05),相比于ICA组和bFGF组,联合组rPBMSCs衰老百分比显著下降(P<0.05)。多潜能分化检测结果证明,ICA联合bFGF明显提高rPBMSCs体外诱导成软骨、成骨和成脂的能力。Western印迹检测结果显示,ICA和bFGF单独作用均能促进PCNA、Nanog和Oct4蛋白质表达(P<0.05),抑制p16、p21和p53蛋白质表达(P<0.05),而ICA和bFGF联合作用效果更显著(P<0.05)。综上所述,ICA联合bFGF通过促进rPBMSCs增殖,维持干性,延缓衰老维持自我更新。

关键词：外周血间充质干细胞淫羊藿苷碱性成纤维细胞生长因子衰老

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成纤维细胞生长因子和表皮生长因子及复合因子对兔ACL、MCL体外增殖作用

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中国修复重建外科杂志 2005年第3期19卷 229-233页

作者：沈雁陈鸿辉李贤让唐毅钟灿灿梁佩红任国梅梁伟国暨南大学医学院附属广州市红十字会医院广州市创伤外科研究所

目的　观察酸性成纤维细胞生长因子 (acid fibroblast growth factor,a FGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblastgrowth factor,b FGF)和表皮生长因子 (epidermal growth factor,EGF)以及复合因子对兔前交叉韧带 (anterior cruciate ligament,ACL)和内侧副韧带 (medial collateral ligament,MCL)的促增殖作用。　方法　分离传代培养 10周龄新西兰大白兔骨关节韧带的 ACL 和 MCL 的成纤维细胞 ,接种 96孔板 ,并加入浓度为 0 (对照组 )、1、5、10、5 0、10 0 ng/ ml的 a FGF或 b FGF,浓度为 0 (对照组 )、1.5 6、3.13、6 .2 5、12 .5 0、2 5、5 0 ng/ ml的 EGF,单独或 a FGF+EGF两种因子联用与细胞 (n=4 )共同培养 4 8h,以 XTT方法测定其促细胞增殖作用。　结果　 3种生长因子单独应用对ACL和 MCL都有促进作用 ,a FGF对两种细胞均存在量效关系 ;b FGF 1ng/ ml,EGF 5 ng/ ml对 ACL作用最好 ,而对MCL 则是 b FGF和 EGF均存在量效关系。浓度为 5 ng/ ml的 a FGF与 5 0 ng/ ml的 EGF联合 1ng/ ml a FGF与3.13ng/ ml EGF作用于 ACL 或 MCL均有协同作用。　结论　 3种生长因子对 ACL 和 MCL 均有促进作用 ,单独应用a FGF或联用 EGF优于单一因子促进兔 ACL 和 MCL 细胞的增殖 ,并且提示低浓度的 a FGF联?

关键词：前交叉韧带内侧副韧带成纤维细胞生长因子表皮生长因子复合因子兔软组织损伤

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CG创伤敷料的研制

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中国生物医学工程学报 1996年第2期15卷 112-115页

作者：叶春婷刘锡麟马福广徐国风邹翰广州市红十字会医院广州市创伤外科研究所暨南大学生物医学工程研究所

以壳聚糖、明胶和甘油为基本原料，选用戊二醛为交联剂，探讨了交联反应的条件，避免了明胶蛋白与壳聚糖的静电沉淀反应。成膜后经再处理，制备出一种含水率高、透明的多孔网状纤维膜样的创伤敷料。该敷料的扯断强度为６．５ＭＰａ，扯... 详细信息

以壳聚糖、明胶和甘油为基本原料，选用戊二醛为交联剂，探讨了交联反应的条件，避免了明胶蛋白与壳聚糖的静电沉淀反应。成膜后经再处理，制备出一种含水率高、透明的多孔网状纤维膜样的创伤敷料。该敷料的扯断强度为６．５ＭＰａ，扯断伸长率为２１０％，撕裂强度为５．３ＫＮ／ｍ，含水率为７６％。通过动物实验，证明该膜具有良好的组织相容性，对防止感染、促进伤口愈合起到良好的作用。

关键词：壳聚糖明胶创伤敷料高分子材料医用

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积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子及RhoA/ROCK-Ⅰ调控信号的影响

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中国药学杂志 2010年第14期45卷 1067-1072页

作者：戴丽冰潘姝沈雁黄粤梁蓉康宁李叶扬李孝建谢有富李罡张琰暨南大学医学院第四附属医院广州市红十字会医院广州市创伤外科研究所广州510220

目的研究积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)的影响及RhoA/ROCK-Ⅰ信号通路在其中的作用。方法分离培养人增生性瘢痕组织来源的成纤维细胞,应用积雪草苷300μ***-1及RhoA的下游效应器Rho激酶的特异抑制剂Y-27632对... 详细信息

目的研究积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)的影响及RhoA/ROCK-Ⅰ信号通路在其中的作用。方法分离培养人增生性瘢痕组织来源的成纤维细胞,应用积雪草苷300μ***-1及RhoA的下游效应器Rho激酶的特异抑制剂Y-27632对实验细胞进行干扰实验。分为对照组、积雪草苷组、Y-27632组、积雪草苷+Y-27632组。运用荧光定量PCR(SYBR Green)及免疫荧光细胞化学的方法检测各组瘢痕成纤维细胞中RhA、ROCK-Ⅰ、CTGF mRNA与蛋白表达。结果积雪草苷300μ***-1能抑制RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF的mRNA与蛋白表达,与对照组比较具有统计学意义(P<0.05);Y-27632能阻碍积雪草苷的作用,积雪草苷(300μ***-1)+Y-27632组,CTGF的mRNA与蛋白表达明显高于单纯积雪草苷组(P<0.05),与对照组及Y-27632组比较无显著性差异(P>0.05);Y-27632组与对照组比较RhoA、ROCK-Ⅰ、CTGF的mRNA与蛋白表达没有统计学意义。结论积雪草苷300μ***-1能抑制RhoA、ROCKⅠ-、CTGF的mRNA与蛋白表达;而且可通过RhoA/ROCKⅠ-信号通路抑制瘢痕成纤维细胞中CTGF mRNA与蛋白表达。这可能是积雪草苷治疗瘢痕的作用机制之一。

关键词：增生性瘢痕成纤维细胞积雪草苷 RhoA ROCK-Ⅰ 结缔组织生长因子

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