目的 研究自噬在不同阶段对VX2细胞增殖、侵袭和转移的影响.方法 将VX2细胞分为对照组、3-甲基嘌呤(3-MA)组、缺血缺氧(I/H)组、I/H+3-MA组、再灌注组、再灌注+3-MA组.荧光显微镜观察各组细胞吖啶橙染色后细胞质内自噬泡数量;Western blot检测LC3及P62(P62/SQSTM1)信号蛋白、基质金属蛋白酶MMP2、MMP9蛋白表达情况;MTT实验测定细胞存活情况;细胞划痕实验观察迁移能力;Transwell实验评价VX2细胞迁移及侵袭能力.结果 缺血缺氧早期吖啶橙标记的橙色或红色自噬泡增多,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达增大、P62表达减少,加入3-MA后细胞存活数目由0.38±0.01减至0.25±0.01(P<0.05);I/H后、再灌注后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达进一步增大(P<0.01),同时MMP2、MMP9蛋白表达也增加,侵袭性细胞计数高于对照组(121.0±5.2 vs 78.3±7.3,P<0.01);加入3-MA后细胞存活数目由0.50±0.01增加到0.61±0.01(P<0.05),侵袭性细胞计数高于再灌注+3-MA组(121.0±5.2 vs 70.0±2.1,P<0.05).结论 缺血缺氧可诱导VX2细胞产生保护性自噬;再灌注后自噬过度激活,对细胞有杀伤作用,联合3-MA抑制自噬细胞存活增多、侵袭性减低;再灌注后VX2肝癌细胞自噬增强促进VX2细胞迁移与侵袭,这可能是局部浸润和远处转移的机制之一,可能为肝动脉化疗栓塞(TACE)术后肝细胞癌(HCC)的复发、转移治疗提供理论基础.
目的:采用网络药理学和分子对接的研究方法,探究白芍治疗系统性红斑狼疮脑病(NPSLE)的有效成分及作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选白芍生物活性成分及潜在靶点;运用Genecards数据库收集NPSLE的疾病靶点;利用在线韦恩图绘制平台Venny2.1得到二者共同的靶点,将共同靶点导入STRING数据库构建蛋白质相互作用网络,并利用Cytoscape3.8.0进行可视化处理;通过Metascape在线软件对靶点进行基因本体(Gene Ontology,GO)分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encylopaedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,探究相关的生物过程与信号通路;应用Cytoscape3.8.0构建“成分—靶点—通路”网络;最后通过AutoDock软件对药物的主要活性成分及核心作用靶点进行分子对接验证。结果:共获得白芍的13个化学成分、70个潜在作用靶点和740个NPSLE相关作用靶点,其中白芍与NPSLE共同作用靶点有31个;PPI网络显示处于核心地位的靶点为白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)、CASP3等,KEGG通路富集分析筛选得到83条与白芍治疗NPSLE相关通路,主要作用于IL-17信号通路、TNF信号通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化、细胞凋亡、雌激素信号通路等。分子对接结果显示,主要活性成分能够分别与代表性的靶点结合并展现出较好的亲和力。结论:白芍对通过“多成分—多靶点—多途径”的特点与优势作用于NPSLE,为中医药治疗NPSLE的临床应用奠定了基础。
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