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医学临床研究 2005年第12期22卷 1769-1771页

作者：张宏张革化吴绍熙暨南大学附属第一医院广东广州510632 中山大学附属第三医院广东广州510630 中国医学科学院皮肤病研究所江苏南京210042

【目的】研制适合于普通医学实验室使用的耗氧剂。【方法】采用正交设计法,得出一种耗氧粉的最佳配方。以此对实验室保存菌株和临床菌株进行验证。【结果】该耗氧粉配方:每升容积需低亚硫酸钠5 g、碳酸氢钠5 g、还原性铁粉1 g和水2.2 m... 详细信息

【目的】研制适合于普通医学实验室使用的耗氧剂。【方法】采用正交设计法,得出一种耗氧粉的最佳配方。以此对实验室保存菌株和临床菌株进行验证。【结果】该耗氧粉配方:每升容积需低亚硫酸钠5 g、碳酸氢钠5 g、还原性铁粉1 g和水2.2 ml。以此对3种厌氧菌做厌氧培养、并于临床标本中做厌氧菌分离的结果,证实其除氧效果与Gas Pak配方相当,同时具有价廉、方便、效果稳定可靠、培养结果无相互污染、安全无害及不需特殊设备等特点。【结论】该经济型耗氧粉可靠、实用,在基层有重要应用价值。

关键词：细菌,厌氧氧消耗

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加载HCMV抗原肽的HLA-A*0201单体及其四聚体制备和鉴定

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生物工程学报 2004年第3期20卷 382-388页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅蔡小嫦曾耀英组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学广州510632 暨南大学生物工程研究所广州510632 暨南大学第一附属医院皮肤科广州510632 郑州大学第一附属医院皮肤科郑州450052

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免... 详细信息

细胞毒T淋巴细胞 (CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用 ,因而特异性CTL的检测相当重要 ;而过去检测CTL的方法都是间接的 ,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法 ,成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序 ,利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒 (HCMV)抗原肽的HLA_A2四聚体 ,具有特异性结合CTL活性。HLA_A 0 2 0 1重链基因是通过RT_PCR方法从HLA_A2 + 供者白细胞中克隆 ,进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽 (BSP)的HLA_A 0 2 0 1(A2 )重链胞外区原核表达载体 ,A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达 ,主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链 β2 微球蛋白和HLA_A2限制性HCMVpp6 5 495_50 3抗原肽 (NLVPMVATV ,NLV)存在时通过稀释法复性获得 ,以BirA对其进行生物素化 ,然后以阴离子交换树脂纯化 ,得到的纯化A2_NLV单体与Streptavidin_PE按 4 :0 8比例混合形成四聚体 ,结合程度在 85 %以上 ,流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA_A2 + 供者的特异性CTL结合活性。总之 ,这种简化的四聚体制备程序 ,不仅有利于该技术的推广 ,为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台。

关键词：人类白细胞抗原四聚体细胞毒T淋巴细胞包涵体人巨细胞病毒

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PD-L2剪切异构体与EGFP融合蛋白的表达及其亚细胞定位研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第11期24卷 878-882页

作者：何贤辉徐丽慧曾耀英刘毅蔡小嫦暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广州510632 暨南大学生物工程研究所郑州大学第一附属医院皮肤科暨南大学第一附属医院皮肤科

目的　探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法　以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞... 详细信息

目的　探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法　以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果　从活化的人白细胞中克隆到常规剪切体PD L2Ⅰ和新型剪切异构体PD L2Ⅱ的cDNA ,后者删除了编码胞外区Ig C结构域的外显子 3。进而构建了PD L2Ⅰ EGFP和PD L2Ⅱ EGFP融合蛋白表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞。流式细胞仪分析显示 ,转染前者的细胞中既可检测到EGFP的表达又可在细胞膜上检测到PD L2表达 ;而转染后者的细胞中只能检测到EGFP的表达 ,在其细胞膜上不能检测到PD L2表达。共聚焦显微镜观察显示 ,PD L2Ⅰ EGFP主要分布于细胞膜表面 ,PD L2Ⅱ EGFP则主要分布于细胞内。结论　常规剪切体PD L2Ⅰ能正确定位于细胞膜表面 ,而新型剪切异构体PD L2Ⅱ则位于细胞内 ,不能运输至细胞膜 ,提示不同PD

关键词： PD 表达载体 EGFP 转染剪切体细胞膜融合蛋白亚细胞定位结构域哺乳动物细胞

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白细胞介素12诱导T细胞凋亡对Bcl-2表达和信号分子的影响

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中国病理生理杂志 2004年第2期20卷 180-185页

作者：郭秋野范洪涛李雅兰张宁郭秀枝邓列华暨南大学医学院血液病研究所广东广州510632 暨南大学医学院第一附属医院皮肤科广东广州510632 Laboratory of Population Genetics NIH/NCI/LPG

目的 :了解和探讨白细胞介素 12 (IL - 12 )作用于T细胞 ,活化T细胞表面的IL - 12受体 β ,诱导T细胞凋亡对Bcl- 2表达和信号转导的作用。方法 :用AnnexinV流式细胞仪检测细胞凋亡率和半定量PCR的方法测定在不同抑制剂作用下对Bcl- 2信... 详细信息

目的 :了解和探讨白细胞介素 12 (IL - 12 )作用于T细胞 ,活化T细胞表面的IL - 12受体 β ,诱导T细胞凋亡对Bcl- 2表达和信号转导的作用。方法 :用AnnexinV流式细胞仪检测细胞凋亡率和半定量PCR的方法测定在不同抑制剂作用下对Bcl- 2信号转导表达的影响。结果 :IL - 12在高浓度下诱导人的白血病T细胞株TIB- 15 2和人的淋巴瘤T细胞株HTB - 176及正常人T细胞的凋亡。在IL - 12处理 6h后Bcl- 2的表达明显升高 ,表达的高峰值在 2 4h ,Bcl- 2的升高不能抑制和阻碍T细胞的凋亡 ;IL - 12诱导上调T细胞Bcl- 2mRNA表达。HA10 0能促进T细胞的凋亡 ,PKC是IL - 12诱导T细胞凋亡信号转导的负性调节因子 ;AG4 90不抑制IL - 12上调的Bcl- 2mRNA表达作用 ,AG4 90阻断的Jak2通路不参与IL - 12诱导T细胞mRNA表达的信号转导及其调节 ;HA10 0 4不影响T细胞表达mRNA ,PKA通路不影响IL - 12诱导T细胞表达Bcl- 2mRNA的信号传递。结论 :Bcl- 2是凋亡介导分子之一 ,但是Bcl- 2不能阻断Fas-FasL介导的T细胞凋亡。

关键词：白细胞介素12 细胞凋亡钙磷脂结合蛋白V 信号转导

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人外周血T淋巴细胞表型改变与衰老相关性研究

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中国病理生理杂志 2003年第8期19卷 1025-1028页

作者：何贤辉徐丽慧刘毅曾耀英暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632 郑州大学第一附属医院皮肤科河南郑州450052

目的 :探讨人T淋巴细胞表型随年龄变化的规律 ,寻找敏感的免疫衰老生物标志。方法 :取年轻组(2 0 - 35岁 )和年老组 (5 0 - 75岁 )志愿者的新鲜肝素抗凝静脉血 ,进行三色或四色直接免疫荧光染色 ,获取有核细胞后以流式细胞仪分析T细胞... 详细信息

目的 :探讨人T淋巴细胞表型随年龄变化的规律 ,寻找敏感的免疫衰老生物标志。方法 :取年轻组(2 0 - 35岁 )和年老组 (5 0 - 75岁 )志愿者的新鲜肝素抗凝静脉血 ,进行三色或四色直接免疫荧光染色 ,获取有核细胞后以流式细胞仪分析T细胞亚群的表型。结果 :2个年龄组的总T细胞 (CD3+ )、辅助T细胞 (CD4 + )以及细胞毒T细胞 (CD8+ )亚群的相对百分率没有明显差别 ,但年老组T细胞上CD3分子的密度 (MFI)明显下降 ;粘附分子CD4 4与CD6 2L在 3群T细胞上阳性率的差别均无统计意义 ;而 2组间总T细胞、辅助T细胞以及细胞毒T细胞亚群的CD95阳性率都有显著差别 ,表现为随年龄增加 ,CD95表达率上升。结论 :在所研究的年龄组间 ,T细胞及其亚群的相对数量没有显著改变 ,而CD3表达密度随年龄增加而下调 ;T细胞的凋亡诱导分子CD95阳性率随年龄增加而上升 ,提示CD95可能是评价免疫衰老的潜在生物标志。

关键词：免疫衰老淋巴细胞流式细胞术抗原 CD95 表型

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黄连素对T淋巴细胞活化和增殖的抑制作用

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中国病理生理杂志 2002年第10期18卷 1183-1186页

作者：何贤辉曾耀英徐丽慧邱海霞蔡小嫦暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生物工程研究所广东广州510632 暨南大学医学院第一附属医院皮肤科广东广州510632

目的 :研究黄连素 (Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法 :正常人外周血全血培养 ,以植物血凝素 (PHA)或佛波醇酯 (PDB)加离子霉素 (Ion)刺激活化淋巴细胞 ,双荧光染色及溶血获取有核细胞后 ,以流式细胞仪分析T细胞表达活... 详细信息

目的 :研究黄连素 (Ber)对T细胞体外活化和增殖的影响及作用机制。方法 :正常人外周血全血培养 ,以植物血凝素 (PHA)或佛波醇酯 (PDB)加离子霉素 (Ion)刺激活化淋巴细胞 ,双荧光染色及溶血获取有核细胞后 ,以流式细胞仪分析T细胞表达活化抗原CD6 9和CD2 5的水平 ,并以碘化丙锭染色分析细胞周期分布 ,7-AAD活染分析细胞死亡率。结果 :浓度为 10 0 μmol/L和 5 0 μmol/L的Ber对PDB +Ion或PHA激活T细胞表达CD6 9有明显抑制 ,而 2 5 μmol/L的Ber抑制效应无显著性 ;随时间延长 ,对CD6 9表达的抑制程度下降 ;对于CD2 5表达 ,上述 3个浓度的Ber抑制作用均有显著性 ,且呈剂量依赖性。同时 ,这 3个浓度的Ber均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2 /M ,对细胞周期的抑制作用没有时相特异性。活染分析显示Ber对淋巴细胞无明显细胞毒性。结论 :Ber通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞活化和增殖 ,发挥其免疫抑制作用。

关键词：黄连素 T淋巴细胞活化抗原细胞周期

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黄连素对T细胞体外活化的抑制作用

黄连素对T细胞体外活化的抑制作用

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中国免疫学会第四届学术大会

作者：何贤辉曾耀英徐丽慧邱海霞蔡小嫦暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室生物工程研究所医学院第一附属医院皮肤科医学院第一附属医院皮肤科

本文旨在通过研究黄连素(Ber)对T细胞活化的影响,以进一步阐明Ber免疫抑制作用的细胞和分子机制。结果表明1 Ber抑制T细胞体外活化表达CD69分子

关键词：黄连素 T细胞 CD69 CD25 活化抗原

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干扰素中和抗体与乙肝病毒DNA含量的关系

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2001年第2期22卷 48-51页

作者：龚晓兵唐永煌陈伟烈黄玉绯暨南大学医学院第一附属医院感染科广东广州510630 广州市第八人民医院传染病研究所广东广州510180 广州市皮肤病防治所广东广州510095

目的 :了解干扰素中和抗体对干扰素疗效的影响。方法 :用中和生物法检测 6 4例慢性乙型肝炎 (CHB)患者干扰素治疗前后血清的干扰素中和抗体 (NA) ,同时用荧光定量PCR技术检测干扰素治疗前后血清HBVDNA的含量。结果 :6 4例接受干扰素治疗... 详细信息

目的 :了解干扰素中和抗体对干扰素疗效的影响。方法 :用中和生物法检测 6 4例慢性乙型肝炎 (CHB)患者干扰素治疗前后血清的干扰素中和抗体 (NA) ,同时用荧光定量PCR技术检测干扰素治疗前后血清HBVDNA的含量。结果 :6 4例接受干扰素治疗的CHB患者中 2 1例患者治疗后检出NA (32 .81% ) ,治疗前后的血清HBVDNA含量在NA阳性组无显著性差异 (P >0 .0 5) ,在NA阴性组有显著性差异 (P <0 .0 5)。 2 1例NA阳性者在治疗结束时 1例 (4 76 % )患者血清中HBVDNA被清除 ,4 3例NA阴性者在治疗结束时 16例 (37.2 1% )患者血清中HBVDNA被清除 ,二者比较P <0 .0 1。结论 :NA能影响干扰素的疗效 ,并可作为预测干扰素疗效的指标。

关键词：干扰素干扰素中和抗体乙型肝炎乙型肝炎病毒核酸 DNA

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特应性皮炎诊断标准的评价

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中华皮肤科杂志 2000年第4期33卷 222-226页

作者：顾恒陈祥生陈崑颜艳金泓陈秀琴曹宁校邵长庚(指导) 叶干运(指导) 中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所南京210042 暨南大学附属华侨医院皮肤科北京医科大学附属人民医院皮肤科

目的探讨特应性皮炎的诊断标准。方法采用对比研究的方法，对 Hanifin Rajka标准（金标准）、康克非标准和 Williams标准进行对比分析。结果与"金标准"相比，在医院人群中， Williams标准在应用中有较高的诊断效率，其敏... 详细信息

目的探讨特应性皮炎的诊断标准。方法采用对比研究的方法，对 Hanifin Rajka标准（金标准）、康克非标准和 Williams标准进行对比分析。结果与"金标准"相比，在医院人群中， Williams标准在应用中有较高的诊断效率，其敏感性、特异性和 Kappa值分别为 95.50％、 97.52％和 0.93；且该标准中" 2岁前发病"这一指标适用于任何年龄。在一般人群使用中，该标准的敏感性、特异性和 Kappa值分别为 80.00％、 99.78％和 0.79，完全适用于 7～ 18岁年龄段人群时点患病率的流行病学调查。此外，瘙痒加以下 4条指标中的 2条或 2条以上：即 ①屈侧曾有皮炎史，②哮喘和（或）过敏性鼻炎史，③皮肤干燥史，④ 2岁前发病，这一问卷调查方法，在使用中具有较高的敏感性（ 88.89％）、特异性（ 99.78％）和 Kappa值（ 0.82），因此，在特应性皮炎流行病学研究中完全可以取代传统的问卷形式。结论 Williams关于 AD的诊断标准完全适用于我国医院人群的临床诊断和小样本人群的流行病学调查。在大样本普查中亦可使用改良的 Williams标准。

关键词：持应性皮炎金标准康克非标准 Williams标准

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PCR-RFLP鉴别念珠菌、曲霉和隐球菌的探讨

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临床皮肤科杂志 2000年第2期29卷 76-78页

作者：秦振宇吴绍熙吕桂霞 Roy L.Hopfer 张宏郭宁如中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所南京市210042 UNC Hospitals Universoty of North CarolinaUSA 暨南大学医学院第一附属医院皮肤科

为快速鉴别 3类医学上重要真菌———念珠菌、曲霉和隐球菌 ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态(PCR RFLP)的分子生物学方法对白念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、乳酒念珠菌、新生隐球菌格梯变种、新... 详细信息

为快速鉴别 3类医学上重要真菌———念珠菌、曲霉和隐球菌 ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态(PCR RFLP)的分子生物学方法对白念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、近平滑念珠菌、热带念珠菌、乳酒念珠菌、新生隐球菌格梯变种、新生隐球菌新生变种、罗伦隐球菌、烟曲霉、黄曲霉和杂色曲霉进行体外研究。经PCR念珠菌、曲霉和隐球菌均扩增出 3 10bp的DNA片段 ,再行限制性内切酶HaeIII消化后分别呈现 2条、4条和 3条片段。本实验建立的PCR RFLP技术鉴别念珠菌、曲霉和隐球菌感染 ,具有快速和特异的特点 ,是对PCR诊断的重要补充 ,有潜在的临床应用价值。

关键词：念珠菌曲霉隐球菌鉴别诊断 PCR-RFLP

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