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现代免疫学 2011年第6期31卷 482-485页

作者：余琴梅林羿狄静芳秦晓黎赵晓明上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学科上海200001 上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科学研究所上海200001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632

为探讨脂多糖(LPS)及其受体TLR4相互作用并影响蜕膜NK细胞的可能机制,在孕E6.5给BALB/c×C57BL/6孕鼠腹腔注射LPS,而E10.5采用流式细胞术检测小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞构成比,计算小鼠胚胎吸收率。此外,采用磁珠亲和细胞分选术纯... 详细信息

为探讨脂多糖(LPS)及其受体TLR4相互作用并影响蜕膜NK细胞的可能机制,在孕E6.5给BALB/c×C57BL/6孕鼠腹腔注射LPS,而E10.5采用流式细胞术检测小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞构成比,计算小鼠胚胎吸收率。此外,采用磁珠亲和细胞分选术纯化E10.5小鼠蜕膜NK细胞并培养,用LPS刺激所培养的细胞,并观察刺激后NK细胞表达NKG2D水平的变化。研究发现,在体内和体外实验中LPS刺激均可显著增高BALB/c×C57BL/6孕鼠蜕膜NK细胞NKG2D的表达水平,其中腹腔注射可显著增高胚胎吸收率。在体外细胞培养实验中,预先在培养基中加入抗TLR4抗体,则LPS刺激后细胞NKG2D表达水平无显著升高。这些结果提示,LPS与TLR4相互作用可增强小鼠蜕膜NK细胞NKG2D的表达,而NKG2D的过高表达不利于同种异基因妊娠成功。

关键词：动物模型细胞信息转导免疫调节妊娠耐受

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白介素10可保持蜕膜NKG2D^+TGF-β^-NK细胞低水平并有利于妊娠成功

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现代免疫学 2011年第2期31卷 139-142页

作者：余琴梅陈琳琳王文静赵晓明林羿上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学科上海200001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州512000 上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科学研究所上海200001

为探讨白介素10(IL-10)及其受体IL-10R相互作用并调节妊娠耐受的可能机制,在孕E4.5、E6.5和E8.5给BALB/c×C57BL/6孕鼠腹腔注射抗IL-10R抗体,而给NOD×C57BL/6孕鼠腹腔注射重组小鼠IL-10。在E10.5检测小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK... 详细信息

为探讨白介素10(IL-10)及其受体IL-10R相互作用并调节妊娠耐受的可能机制,在孕E4.5、E6.5和E8.5给BALB/c×C57BL/6孕鼠腹腔注射抗IL-10R抗体,而给NOD×C57BL/6孕鼠腹腔注射重组小鼠IL-10。在E10.5检测小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞构成比和胚胎吸收率。研究发现,注射抗小鼠IL-10R抗体可显著增高BALB/c×C57BL/6孕鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞构成比,并相应地显著增高胚胎吸收率。相反,注射外源性IL-10可显著降低NOD×C57BL/6孕鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞百分率,达到接近于BALB/c×C57BL/6孕鼠生理状态下同源细胞的水平,并可显著降低NOD×C57BL/6小鼠胚胎吸收率。这些结果提示,IL-10和IL-10R相互作用可调节小鼠蜕膜NKG2D+TGF-β-NK细胞百分率,并使其保持在较低水平,而这种状态有利于同种异基因妊娠成功。

关键词：动物模型免疫调节免疫缺陷妊娠耐受

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不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

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第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：李孝建沈雁张志李延仓杨小红曾耀英暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体... 详细信息

目的探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体内等不同培养体系下培养,观察表皮干细

关键词：细胞增殖几丁质膜培养体系

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不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

不同培养体系对鼠表皮干细胞增殖、分化的影响

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：李孝建沈雁张志曾耀英李延仓杨小红暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的:探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠... 详细信息

目的:探讨不同培养体系对表皮干细胞增殖、分化的影响,建立理想的调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法获取鼠表皮干细胞,分别在普通培养皿、与几丁质膜生物支架材料及以几丁质膜材料作为载体植入裸鼠体内等不同培养体系下培养,观察表皮干细胞生长情况;普通培养和几丁质膜共培养4w后,表皮干细胞克隆形成率的差异;免疫组织化学染色观察表皮干细胞以几丁质膜为载体植入裸鼠体内后4w,表皮干细胞的增殖、分化情况等。结果:表皮干细胞在普通培养皿培养3d左右,细胞开始克隆增殖,12d左右融合成片,传代培养后增殖能力逐渐减低,融合成片时间逐渐延长,传代培养3-4代后细胞终末分化,失去增殖能力;几丁质膜培养表皮干细胞,2w后呈棋盘式集落生长,4w后几丁质膜上有大量的表皮干细胞小集落,集落上有大量的增殖细胞附着生长,扫描电镜下见几丁质膜纤维直径约10μm,以纤维为主,上下两层呈纵横排列成十字孔,孔间有大量表皮干细胞集落。几丁质膜支架材料培养表皮干细胞4w后,其克隆形成率明显高于普通培养皿培养(P<0.05)。表皮干细胞几丁质膜支架植入裸体内培养4w后,细胞大量增殖形成"巢状"排列,在"表皮巢"周围,可见皮肤附件结构形成。结论:表皮干细胞在体外普通培养皿培养,可增殖生长,但维持增殖时间较短;与几丁质膜材料培养,可较长时间地维持表皮干细胞的增殖特性;植入体内后表皮干细胞大量增殖,并可分化形成毛囊等皮肤附件结构。

关键词：细胞增殖培养体系传代培养皮肤附件

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鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

鼠表皮干细胞与角质形成细胞蛋白质组差异表达的初步研究

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中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会

作者：李孝建沈雁张志曾耀英李延仓杨小红暨南大学附属广州市红十字会医院烧伤科暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

目的:研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶... 详细信息

目的:研究鼠表皮干细胞和角质形成细胞的蛋白质组学差异,为进一步研究调控表皮干细胞的增殖、分化提供参考信息。方法:酶消化和Ⅳ型胶原快速粘附法分选鼠表皮干细胞和角质形成细胞,提取其中总蛋白质,Bradford法测定蛋白质浓度;双向凝胶电泳技术展示蛋白质分子的表达,Image Scanner□透射扫描仪及Labscan扫描软件进行扫描获取图像,利用ImageMaster 2D Elite 5.0分析软件对图像进行强度校正、点检测、背景消减、匹配,以获取两种细胞的差异蛋白点;切取差异蛋白点,MOLDI-TOF-TOF质谱仪进行质谱分析,利用软件Mascotdistiller过滤基线峰、识别信号峰,Mascot软件搜索NCBInr数据库(http://***),寻找匹配的相关蛋白质,同时查询其功能。结果:两种细胞的2-DE蛋白表达谱具有良好的重复性和可比性,表皮干细胞与角质形成细胞的电泳图谱平均蛋白质点数分别为(930±15)、(982±18)个,匹配点数分别为(798±11)、(850±13)个,匹配率分别为85.81%、86.56%;两种细胞蛋白质间匹配点数(868±8)个,匹配率是76.98%;找到差异蛋白质点11个,其中只在表皮干细胞表达或高表达的有8个,只在角质形成细胞表达或高表达的有3个。差异蛋白质点分别进行MALDI-TOF/TOF-MS质谱分析,鉴定出11个有意义的蛋白质。其中表皮干细胞表达或表达明显增高的8个蛋白质包括Rho GDP解离抑制蛋白□(dissociation inhibitor(GDI))、翻译延长因子1(Translationelongation factor-1)、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、谷胱苷肽S-转移酶(Glutathione S-transferase Mu 2,GSTM-2)、醛糖还原酶(Aldosereductase,AR)等;角质形成细胞表达或表达明显增高的3个蛋白质,包括Nitrilasehomolog 2(Nit 2)、膜联蛋白A5(Annexin A5)和Ubiquitin-protein hydrolase等。结论:利用双向电泳和质谱分析技术,成功分离和鉴定出鼠表皮干细胞和角质形成细胞差异表达的蛋白质。这些差异蛋白质可能与表皮干细胞和角质形成细胞体外增殖、分化特性的差异有一定关系,为进一步研究调控表皮干细胞增殖、分化的培养体系奠定了基础。

关键词：差异蛋白质点初步研究差异表达

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核因子-κB在小鼠狼疮肾组织中的表达及意义

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中华综合临床医学杂志 2004年第8期6卷 31-33页

作者：蔡马曾山翁德胜仲恺农业技术学院生物教研室广州510225 暨南大学组织移植免疫中心广州第一军医大学病理教研室广州

目的:研究核因子-κ B(nuclear factor kappaB,NF-κ B)在小鼠狼疮肾组织中的表达及意义.方法:按有关文献建立小鼠狼疮模型,按随机原则分为狼疮模型组和正常对照组,用免疫组化方法检测NF-κ B P50在两组小鼠肾组织中的表达.结果:NF-κ ... 详细信息

目的:研究核因子-κ B(nuclear factor kappaB,NF-κ B)在小鼠狼疮肾组织中的表达及意义.方法:按有关文献建立小鼠狼疮模型,按随机原则分为狼疮模型组和正常对照组,用免疫组化方法检测NF-κ B P50在两组小鼠肾组织中的表达.结果:NF-κ B在狼疮组呈高表达,与对照组有显著差异(P＜0.05).结论:NF-κ B在小鼠狼疮肾炎肾组织中呈高表达,可能与该病的发病机制有关.

关键词： NF-κ B狼疮肾炎免疫组化

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通痹灵总碱对大鼠机体细胞免疫的调节作用

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广州中医药大学学报 2003年第1期20卷 1-3,7页

作者：陈光星李晓娟全世明陈纪藩曾耀英王培训广州中医药大学第一附属医院六内科广州510405 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心广州510632 广州中医药大学免疫教研室广州510405

[目的]研究通痹灵(TBL)的有效部位总生物碱对细胞增殖及T淋巴细胞转铁蛋白受体(CD71)的影响,探讨通痹灵调节细胞免疫的作用机理。[方法]培养大鼠淋巴细胞,刀豆蛋白(ConA)刺激72 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测通痹灵总碱对淋巴细胞增殖的... 详细信息

[目的]研究通痹灵(TBL)的有效部位总生物碱对细胞增殖及T淋巴细胞转铁蛋白受体(CD71)的影响,探讨通痹灵调节细胞免疫的作用机理。[方法]培养大鼠淋巴细胞,刀豆蛋白(ConA)刺激72 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测通痹灵总碱对淋巴细胞增殖的影响;佛波醇酯(PDB)或ConA刺激48 h,流式细胞术检测T淋巴细胞CD71的表达率。[结果]不同浓度的TBL总碱可明显抑制ConA刺激下的淋巴细胞增殖;不同浓度的TBL总碱对PDB和ConA激活的T淋巴细胞CD71表达均有明显的下调作用,而且呈明显的量效关系,对ConA刺激下的CD71表达抑制要强于PDB。[结论]TBL总碱可抑制异常增殖的T淋巴细胞,其作用机制可能是通过抑制转铁蛋白受体来实现的。

关键词：通痹灵桂枝芍药知母汤免疫学生物碱类 T淋巴细胞受体转铁蛋白

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白血病干细胞相关抗原在急性白血病细胞中的表达

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中华实用诊断与治疗杂志 2011年第12期25卷 1179-1181页

作者：肖平曾耀英林蔚佛山市第一人民医院临床医学研究所广东省528000 暨南大学组织移植与免疫实验中心广州市510632

目的探讨白血病干细胞(leukemia stem cell,LSC)相关抗原在不同亚型急性白血病细胞中的表达规律。方法采用流式细胞术检测LSC相关抗原CD96,CD90,CD123,CD71等在50例不同亚型急性白血病细胞中的表达,包括急性粒细胞白血病未分化型(M1)、... 详细信息

目的探讨白血病干细胞(leukemia stem cell,LSC)相关抗原在不同亚型急性白血病细胞中的表达规律。方法采用流式细胞术检测LSC相关抗原CD96,CD90,CD123,CD71等在50例不同亚型急性白血病细胞中的表达,包括急性粒细胞白血病未分化型(M1)、急性粒细胞白血病部分分化型(M2)、急性早幼粒细胞白血病(M3)、急性粒-单核细胞白血病(M4)和急性B淋巴细胞白血病。结果 CD96在M3的表达率(90.00%)明显高于M2(18.18%)和急性B淋巴细胞白血病(20.00%)(P<0.05);各亚型急性白血病均表达CD123,但差异无统计学意义(P>0.05);CD71在急性髓细胞白血病各亚型中(M1、M2、M3和M4)阳性表达率分别为80.00%、72.73%、90.00%和100.00%,明显高于急性B淋巴细胞白血病(P<0.05);CD90在急性B淋巴细胞白血病中阳性表达率为13.33%,高于急性髓细胞白血病(P>0.05)。结论 CD71与CD96的表达有亚型特异性,CD96可能具有指示系列分化和细胞分化程度的作用,CD71可用于区分急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞白血病。

关键词：急性白血病白血病干细胞流式细胞术

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青藤碱对T淋巴细胞活化及TH1类细胞内细胞因子表达的影响

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中国免疫学杂志 2004年第4期20卷 249-252,258页

作者：李晓娟王培训刘良陈光星肇静娴曾耀英陈纪藩广州中医药大学免疫研究室广州510405 香港浸会大学中医药学院暨南大学移植与免疫中心国家教育部重点实验室广州510632 广州中医药大学第一附属医院广州510405

目的 :深入研究青藤碱对T淋巴细胞Th1类细胞因子表达的影响。方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,加入不同浓度的青藤碱作用 1小时后 ,加多克隆刺激剂PDB和离子霉素 ,继续培养 4小时后收获细胞 ,进行细胞内细胞因子染色 ,以流式细胞术对T细胞Th... 详细信息

目的 :深入研究青藤碱对T淋巴细胞Th1类细胞因子表达的影响。方法 :分离小鼠淋巴结细胞 ,加入不同浓度的青藤碱作用 1小时后 ,加多克隆刺激剂PDB和离子霉素 ,继续培养 4小时后收获细胞 ,进行细胞内细胞因子染色 ,以流式细胞术对T细胞Th1类细胞因子TNF γ、炎症性细胞因子TNF α分子表达情况进行分析 ;同时 ,观察药物对T细胞活化早期标志CD6 9表达的影响 ;结果 :10 0 0 μmol L(32 9 2 4 μg ml)青藤碱能够抑制CD6 9表达 ,2 0 0 μmol L青藤碱对CD6 9表达无影响 ;2 0 0、10 0 0、2 0 0 0 μmol L青藤碱能够剂量依赖性地显著降低T细胞内细胞因子TNF γ、TNF α分子表达。结论 :抑制T细胞活化异常可能是青藤碱治疗类风湿关节炎免疫药理机制之一 ,此抑制效应可能主要不是通过影响PKC而是与影响钙离子依赖的T细胞活化信号传导途径相关。

关键词：青藤碱细胞因子 Th1细胞类风湿关节炎

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银杏叶提取物对实验大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响

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广东医学 2002年第3期23卷 242-243页

作者：卓文燕徐安定苗海锋曾子华黄志雄郑佩娥狄静芳暨南大学医学院第一附属医院神经内科广州510630 暨南大学医学院第一附属医院医学院病理科广州510630 广东省南海市人民医院神经外科 528200 暨南大学医学院第一附属医院医学院生命科学院组织移植与免疫中心广州510630

目的　观察银杏叶提取物 (EGb761)对实验大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响 ,探讨EGb761对脑外伤的治疗作用。方法　采用Feeney法自由落体撞击脑损伤动物模型 ,将 90只大鼠随机分为研究组及对照组 ,在损伤后15min ,60min及 2 4h分别腹腔注... 详细信息

目的　观察银杏叶提取物 (EGb761)对实验大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响 ,探讨EGb761对脑外伤的治疗作用。方法　采用Feeney法自由落体撞击脑损伤动物模型 ,将 90只大鼠随机分为研究组及对照组 ,在损伤后15min ,60min及 2 4h分别腹腔注射EGb761及生理盐水。第 5天用TUNEL法测定神经细胞原位凋亡、大脑半球含水量、光镜下观察细胞形态学改变。结果　与对照组比较 ,大鼠脑外伤后 15min及 60min给予EGb761能显著降低神经细胞凋亡率和脑组织含水量 (P <0 0 5 ) ,外伤后 2 4h给药 ,神经细胞凋亡率和脑组织含水量差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　EGb761有抗大鼠脑外伤后神经细胞凋亡及减轻脑水肿的作用。

关键词：银杏叶提取物脑外伤神经细胞凋亡

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