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现代免疫学 2010年第5期30卷 370-374页

作者：许洁涵陈琳琳赵晓明陈翃王文静林羿上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心上海200001 暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632 上海交通大学医学院附属仁济医院妇产科学研究所上海200001

为研究IL-22与NOD小鼠自发性胚胎吸收率增高的关系,多次腹腔注射中和抗体抑制IL-22,采用流式细胞术检测子宫CD4+IL-22+细胞百分率,并观察NOD×C57BL/6小鼠交配组合中孕鼠胚胎吸收率的变化。结果显示,NOD×C57BL/6孕鼠子宫CD4+IL... 详细信息

为研究IL-22与NOD小鼠自发性胚胎吸收率增高的关系,多次腹腔注射中和抗体抑制IL-22,采用流式细胞术检测子宫CD4+IL-22+细胞百分率,并观察NOD×C57BL/6小鼠交配组合中孕鼠胚胎吸收率的变化。结果显示,NOD×C57BL/6孕鼠子宫CD4+IL-22+细胞百分率显著高于BALB/c×C57BL/6孕鼠(52.4%±2.1%与14.3%±4.4%,P<0.01)。多次腹腔注射中和抗体可显著降低NOD×C57BL/6孕鼠子宫内CD4+IL-22+细胞数量(18.7%±2.8%;与未抑制组相比,P<0.01),并可显著降低这些小鼠孕12.5 d的胚胎吸收率(4.8%±2.0%与19.1%±5.1%,P<0.05)。线性相关-回归分析显示,胚胎吸收率与子宫CD4+IL-22+细胞百分率呈正相关。提示妊娠子宫内CD4+IL-22+细胞相对数量过多是妊娠不利因素,可能是造成NOD×C57BL/6孕鼠胚胎吸收率增高的原因之一。

关键词：流产母-胎界面免疫调节免疫耐受

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银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134表达的研究

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中国实用医刊 2010年第11期37卷 8-11页

作者：刘毅蔡小嫦曾耀英北京协和医学院皮肤病研究所中国医学科学院 210042 暨南大学附属第一医院皮肤科暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式... 详细信息

目的了解银屑病患者外周血T细胞CD69和CD134的表达情况及多克隆刺激剂对其表达的影响.方法取银屑病患者与健康志愿者外周血全血培养,佛波醇脂(PMA)联合Ionomycin刺激使T细胞体外活化;在刺激第0、6、12、24 h,用三色免疫荧光标记流式细胞术检测T细胞CD69、CD134的表达.结果银屑病患者组和健康对照组各11例纳入研究,结果显示:①银屑病患者组新鲜血标本T细胞CD134、CD69表达率均明显高于健康对照组(P<0.01); ②PMA联合Ionomycin刺激第6、12、24 h,银屑病患者组与健康对照组外周血T细胞CD69表达率仅在第24 h差异具有统计学意义(P<0.05); ③在刺激第6、12、24 h,银屑病患者组外周血T细胞CD134表达率均较健康对照组显著升高(P<0.001).结论银屑病患者外周血T细胞存在异常活化.在体外活化的外周血T细胞上,银屑病患者组CD134的表达显著高于健康对照组.

关键词：银屑病患者外周血流式细胞术检测 CD69 表达率 T lymphocytes peripheral blood T cells controls 对照组健康志愿者 results 刺激体外活化 PMA 免疫荧光标记 plus whole blood significant 统计学意义

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正常月经周期妇女和自然流产妇女外周血中树突状细胞亚群的变化

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生殖与避孕 2009年第5期29卷 299-303页

作者：沈媛曾耀英肇静娴暨南大学附属第一医院妇产科广州510630 暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的:探讨正常月经周期妇女和自然流产妇女外周血中髓样树突状细胞(myeloid dendritic cell,MDC)和浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,PDC)的变化。方法:选择正常月经周期妇女30例,分别在每个妇女月经周期卵泡期和黄体期... 详细信息

目的:探讨正常月经周期妇女和自然流产妇女外周血中髓样树突状细胞(myeloid dendritic cell,MDC)和浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,PDC)的变化。方法:选择正常月经周期妇女30例,分别在每个妇女月经周期卵泡期和黄体期采集外周血;早期自然流产妇女30例流产后清宫前采集外周血,并以正常早期妊娠妇女为对照组。应用流式细胞术,检测各组外周血单个核细胞中MDC和PDC的百分率及MDC/PDC比率。应用放射免疫法检测各组外周血中雌二醇(E_2)和孕酮(P_4)的水平。结果:正常月经周期黄体期外周血中MDC的百分率和MDC/PDC比率显著低于卵泡期(P<0.01),PDC的百分率黄体期与卵泡期无统计学差异(P>0.05)。正常月经周期妇女黄体期外周血中E_2和P_4水平显著高于卵泡期(P<0.01)。早期自然流产妇女外周血中MDC的百分率和MDC/PDC比率显著高于正常早孕组(P<0.01),而PDC的百分率与正常早孕组无统计学差异(P>0.05)。自然流产组E_2和P_4水平显著低于正常早孕组(P<0.01)。结论:早期自然流产妇女外周血中MDC的百分率和MDC/PDC比率显著升高,可能参与了导致母体对胎儿发生免疫排斥。

关键词：自然流产外周血树突状细胞亚群

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阻断p38MAPK信号通路降低脑死亡大鼠肾脏免疫原性

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中华实验外科杂志 2009年第11期26卷 1509-1511页

作者：陈洁曾耀英曾慧兰刘嘉雯苏泽轩何贤辉黄秀艳王乔峰暨南大学附属第一医院泌尿外科/肾移植广州510630 暨南大学组织移植与免疫中心暨南大学附属第一医院血液科

目的探讨降低脑死亡大鼠肾脏免疫原性的有效途径。方法雄性Wistar大鼠30只，体质量180～200g，随机均分3组，脑死亡＋SB203580组：诱导大鼠脑死亡时，静脉注射SB203580（1mg／100g·Wt）；脑死亡组：诱导大鼠脑死亡。脑死亡后机械呼... 详细信息

目的探讨降低脑死亡大鼠肾脏免疫原性的有效途径。方法雄性Wistar大鼠30只，体质量180～200g，随机均分3组，脑死亡＋SB203580组：诱导大鼠脑死亡时，静脉注射SB203580（1mg／100g·Wt）；脑死亡组：诱导大鼠脑死亡。脑死亡后机械呼吸6h，如大鼠血压〉80mm Hg（1mmHg=0．133kPa），取肾脏；对照组：正常大鼠麻醉后取肾脏。逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肾脏肿瘤坏死因子（TNF）-α和白细胞介素（IL）-1β mRNA表达，Western blot检测肾脏磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）以及TNF-α和IL-1β蛋白表达。结果肾脏TNF-α和IL-1β mRNA和蛋白表达，以及磷酸化p38MAPK蛋白表达，脑死亡组比对照组显著增加（P〈0．01）；脑死亡＋SB203580组比脑死亡组显著下降（P〈0．05），但比对照组明显增加（P〈0．01）。结论SB203580能阻断p38MAPK信号通路，减少脑死亡大鼠肾脏磷酸化p38MAPK和促炎细胞因子表达，可望成为降低其免疫原性的一条有效途径。

关键词：脑死亡 p38丝裂原活化蛋白激酶肾脏细胞因子免疫原性

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孕酮处理树突状细胞诱导同种移植免疫耐受的研究

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生殖与避孕 2009年第4期29卷 201-205页

作者：沈媛曾耀英肇静娴暨南大学附属第一医院妇产科广州510630 暨南大学组织移植与免疫中心广州510632

目的:探讨孕酮(P4)处理的树突状细胞(dendritic cell,DC)在诱导同种异基因移植免疫耐受中的作用。方法:实验小鼠分为4组,每组动物供体为C57BL/6雄性小鼠8只,受体为BALB/c雄性小鼠8只。体外培养供体小鼠骨髓来源DC,然后用P4处理。受体小... 详细信息

目的:探讨孕酮(P4)处理的树突状细胞(dendritic cell,DC)在诱导同种异基因移植免疫耐受中的作用。方法:实验小鼠分为4组,每组动物供体为C57BL/6雄性小鼠8只,受体为BALB/c雄性小鼠8只。体外培养供体小鼠骨髓来源DC,然后用P4处理。受体小鼠在皮肤移植前经尾静脉分别输注体外培养且经P4处理的供体小鼠DC、供体小鼠成熟DC以及不成熟DC,输注磷酸盐缓冲液为对照组。1周后受体小鼠进行同种异基因皮肤移植,手术后观察皮肤存活情况,应用流式细胞术检测手术前后受体小鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+T)百分率的变化。结果:在同种异基因皮肤移植中,受体小鼠尾静脉输注经P4处理的DC组分别与成熟DC组、不成熟DC组和对照组比较,移植皮肤存活时间显著延长(P<0.01);与成熟DC组、不成熟DC组和对照组比较,P4处理组外周血中CD4+CD25+T百分率显著升高(P<0.01)。结论:P4处理的DC可以延长同种异基因移植物存活时间。

关键词：树突状细胞(DC) 孕酮(P4) 母-胎免疫耐受皮肤移植小鼠

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补阳还五汤预先干预对大鼠脑死亡后肾脏炎症细胞因子表达的影响

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中药材 2009年第12期32卷 1855-1860页

作者：陈洁曾耀英曾慧兰陈孝银苏泽轩刘嘉雯王乔峰李伟吴文燕暨南大学咐属第一医院泌尿外科/器官移植科广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫中心广东广州510632 暨南大学附属第一医院血液科广东广州510632 暨南大学医学院中医系广东广州510632

目的:观察补阳还五汤预先干预对大鼠脑死亡后肾脏炎症细胞因子表达及外周血中性粒细胞内活性氧族(ROS)水平的影响,探讨其可能的机制。方法:雄性Wistar大鼠30只随机分成3组:正常对照组、模型组、补阳还五汤组。模型组与补阳还五汤组脑死... 详细信息

目的:观察补阳还五汤预先干预对大鼠脑死亡后肾脏炎症细胞因子表达及外周血中性粒细胞内活性氧族(ROS)水平的影响,探讨其可能的机制。方法:雄性Wistar大鼠30只随机分成3组:正常对照组、模型组、补阳还五汤组。模型组与补阳还五汤组脑死亡诱导成功后6 h,如平均动脉压>80 mmHg,则作为脑死亡供体,获取大鼠肾脏、外周血,用RT-PCR检测肾脏TNF-α与IL-1βmRNA表达,Western blot测定肾脏TNF-α与IL-1β蛋白及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达,流式细胞仪检测外周血中性粒细胞内ROS水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肾脏组织TNF-α与IL-1βmRNA、蛋白以及磷酸化p38MAPK蛋白表达均较对照组显著增加(P<0.01)。补阳还五汤组大鼠以上指标较模型组显著降低(P<0.05),但仍较对正常对照组显著增加(P<0.01)。肾脏磷酸化p38MAPK蛋白表达与TNF-α、IL-1βmRNA及蛋白表达关系密切。模型组ROS水平较对照组显著上调(P<0.05);而补阳还五汤组ROS水平较模型组显著下调(P<0.05),与正常对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论:补阳还五汤预先干预能显著抑制脑死亡大鼠肾脏炎症细胞因子与ROS表达,其机制可能与阻断p38MAPK信号通路多层次多靶点有关。补阳还五汤预先干预可望成为改善移植前脑死亡供体肾脏质量的一种理想途径。

关键词：补阳还五汤脑死亡肾脏炎症细胞因子 p38丝裂原活化蛋白激酶

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深低温处理对异种骨-髌腱-骨移植排斥反应的影响

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中国病理生理杂志 2009年第4期25卷 770-773页

作者：陈克家王德就蒋亚斌曾耀英暨南大学附属第一医院急诊科广东广州510630 暨南大学附属第一医院骨科广东广州510630 暨南大学组织移植与免疫实验室广东广州510630

目的:观察深低温处理对异种骨-髌腱-骨(BPB)移植排斥反应的影响。方法:采用大鼠股部肌袋模型法探讨深低温处理对异种BPB移植免疫反应的影响,通过观察外周血T细胞活化和植入物组织形态学变化情况来判定免疫反应程度。结果:新鲜未处理异种... 详细信息

目的:观察深低温处理对异种骨-髌腱-骨(BPB)移植排斥反应的影响。方法:采用大鼠股部肌袋模型法探讨深低温处理对异种BPB移植免疫反应的影响,通过观察外周血T细胞活化和植入物组织形态学变化情况来判定免疫反应程度。结果:新鲜未处理异种BPB移植后3 d CD4+/CD8+细胞CD25+表达率即显著升高,与自体移植组比较有显著差异(P<0.05),术后14 d达高峰,且维持该峰值至术后35 d仍无下降;深低温处理的异种BPB移植后CD4+/CD8+细胞CD25+的表达明显受到抑制,表达时间推迟,至术后14 d才有轻度升高,术后3 d起各时点与未处理组比较,均P<0.05。组织学检查发现,深低温处理组骨、腱组织周围见少量淋巴细胞浸润,但未侵入组织内,无组织坏死,腱束结构清楚,胶原排列规则;新鲜异种移植组可见大量斑片状淋巴细胞弥漫性浸润骨及胶原组织周围及其中,可见骨碎片,腱结构不清,胶原排列紊乱,部分切片可见较多的嗜酸性粒细胞和多核巨细胞等炎症细胞。结论:深低温处理能显著降低异种BPB免疫原性,抑制排斥反应发生。

关键词：骨-髌腱-骨异种移植排斥反应白细胞介素2 前交叉韧带

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角质形成细胞与表皮干细胞双向电泳图谱差异分析

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中华烧伤杂志 2009年第1期25卷 61-62页

作者：李孝建李延仓曾耀英沈雁杨小红暨南大学第四附属医院广州市红十字会医院烧伤科广州510220 暨南大学生命科学院组织移植与免疫中心

1材料与方法1．1主要试剂与仪器pH同相梯度干胶条（IPGstrip pH3～10，长17cm）购自广州威佳公司，dispaseⅡ、表皮干细胞（ESC）培养基、FBS和DMEM培养基购自美国Gibco公司，角蛋白19购自美国San-ta Cruz公司。等电聚焦仪、垂直电泳系统、

1材料与方法 1．1主要试剂与仪器 pH同相梯度干胶条（IPGstrip pH3～10，长17cm）购自广州威佳公司，dispaseⅡ、表皮干细胞（ESC）培养基、FBS和DMEM培养基购自美国Gibco公司，角蛋白19购自美国San-ta Cruz公司。等电聚焦仪、垂直电泳系统、

关键词：双向电泳图谱表皮干细胞角质形成细胞 DMEM培养基 dispaseⅡ Gibco 角蛋白19 等电聚焦仪

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rhFGF-7对体外培养人皮肤角质形成细胞增殖的影响

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中国皮肤性病学杂志 2009年第5期23卷 262-264页

作者：朱国兴吴晓萍曾耀英刘钧澄聂燕芳黄秀艳中山大学附属第三医院皮肤性病科广东广州510630 暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632 中山大学附属第一医院小儿外科广东广州510080

目的建立一种人皮肤角质形成细胞分离和培养的方法,研究重组人成纤维细胞生长因子7(rhFGF-7)对人皮肤角质形成细胞增殖的影响。方法取环切术后包皮,分别用胰酶和dispaseⅡ酶消化法分离表皮,用无血清培养基进行无滋养层培养,采用免疫细... 详细信息

目的建立一种人皮肤角质形成细胞分离和培养的方法,研究重组人成纤维细胞生长因子7(rhFGF-7)对人皮肤角质形成细胞增殖的影响。方法取环切术后包皮,分别用胰酶和dispaseⅡ酶消化法分离表皮,用无血清培养基进行无滋养层培养,采用免疫细胞化学方法对培养的细胞进行鉴定,并用细胞计数法测定细胞的生长曲线,MTT法检测rhFGF-7对人皮肤角质形成细胞增殖的影响。结果与胰酶消化分离表皮相比,dispaseⅡ酶消化获得的表皮,其细胞贴壁率高,增殖速度快,且成纤维细胞污染少;荧光显微镜下细胞胞浆呈黄绿色,为角蛋白阳性染色;培养的角质形成细胞可持续增殖至第8代,10ng/mL的rhFGF-7促角质形成细胞增殖作用最显著。结论所建立的人皮肤角质形成细胞分离和培养方法,可获得高纯度的人皮肤角质形成细胞,rhFGF-7可促进体外培养人皮肤角质形成细胞的增殖。

关键词：人皮肤角质形成细胞细胞培养细胞增殖

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p38MAPK抑制剂抑制脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达

p38MAPK抑制剂抑制脑死亡大鼠肝脏促炎细胞因子表达

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第二届全国器官捐献与移植学术研讨会

作者：陈洁刘嘉雯曾慧兰曾耀英苏泽轩暨南大学附属第一医院泌尿外科/器官移植科广州 510630 暨南大学附属第一医院血液科广州 510630 暨南大学组织移植与免疫中心广州 510632

目的:观察SB203580阻断p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路，抑制脑死亡(BD)大鼠肝脏促炎细胞因子的表达。方法：雄性Wistar大鼠(180-200g)30只，随机分三组：(1)BD组(n=10只)：诱导大鼠脑死亡;(2)BD+SB203580组(n=10只)：大鼠脑死亡... 详细信息

目的:观察SB203580阻断p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路，抑制脑死亡(BD)大鼠肝脏促炎细胞因子的表达。方法：雄性Wistar大鼠(180-200g)30只，随机分三组：(1)BD组(n=10只)：诱导大鼠脑死亡;(2)BD+SB203580组(n=10只)：大鼠脑死亡诱导成功时，经阴茎背静脉注射SB203580(1mg/100g·Wt)。脑死亡诱导成功后维持人工呼吸6小时，如果大鼠平均动脉压大于80mmHg，则作为脑死亡供体;(3)对照组(n=10只)：正常大鼠。获取肝脏待测。RT-PCR检测各组肝脏TNF-α和IL-1β mRNA表达，Western blot检测各组肝脏TNF-α和IL-1β蛋白表达以及磷酸化p38MAPK。结果：BD+SB203580组肝脏TNF-α和IL-1βmRNA和蛋白表达，以及磷酸化p38MAPK表达与BD组的比较显著下降;与对照组比较仍明显增高。结论：SB203580能抑制p38MAPK信号通路关键靶点，抑制脑死亡大鼠肝脏炎症细胞因子的表达，是提高脑死亡供体肝脏质量的一条有效途径。

关键词：丝裂原活化蛋白激酶脑死亡促炎细胞因子信号通路供体肝脏

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